Содержание

Расшифровка маркировки компактных люминесцентных ламп

Код из трёх цифр на упаковке лампы содержит, как правило, информацию относительно качества света (индекс цветопередачи и цветовой температуры).

Первая цифра — индекс цветопередачи в 1х10 Ra (чем выше индекс, тем достоверней цветопередача; компактные люминесцентные лампы имеют 60‒98 Ra)

Вторая и третья цифры — указывают на цветовую температуру лампы.

Таким образом, маркировка «827» указывает на индекс цветопередачи в 80 Ra, и цветовую температуру в 2700 К (что соответствует цветовой температуре лампы накаливания).

Наиболее распространены компактные люминесцентные лампы с коррелированной цветовой температурой 2700K, 4000K, 4500K, 6500K.

Кроме того, индекс цветопередачи может обозначаться в соответствии с DIN 5035, где диапазон цветопередачи 20‒100 Ra поделён на 6 частей — от 4 до 1А.

Пример маркировки КЛЛ

Параметр  Значение
Потребляемая мощность 
11 Вт
Световой поток 
535 лм
Цветовая температура  2700 К
Тип цоколя  Е27
Напряжение  220‒240 В
Частота питающей сети  50/60 Гц
Номинальный срок службы (при работе примерно 2,7 часов в день / время службы) 8 лет

Работа 2,7 ч/день или 2,74 ч/день указывается производителями из-за простоты расчётов и сравнения с другими типами ламп, так как при таком графике лампа за один год прогорает примерно 1000 ч.

Столь малое время работы в сутки производители объясняют средним временем работы всех ламп в квартире, включая в расчёт и те, которые используются короткое время (например в санузле).

Расшифровка сокращений ламп и светильников. Электрикам пригодится! | Электрик негодует!

Сейчас не так много электриков, кто может расшифровать маркировки светильников, а некоторые даже в лампах путаются. Вот специально и создаю этот материал для расширения кругозора!

Освещение склада

Освещение склада

Всем привет!

Начнем мы, конечно же, с ламп, с самих источников света. Возможно, это описание несколько устаревает, но в любом случае, данный материал многим пригодится.

1. Расшифровка сокращений типов ламп:

ДНаТ – натриевая высокого давления

ДРЛ – ртутная

ЗЛН – зеркальная лампа накаливания

КГ – кварцево-галогенная

КГИ – накаливания галогенная с интерференционным отражателем

КГМ – накаливания галогенная миниатюрная

КЛЛ – компактная люминесцентная

ЛН – лампа накаливания

ЛОН – лампа общего назначения

МО – местного освещения

ЛЮМ – люминесцентная

МГЛ – металлогалогенная

PAR30 – накаливания галогенная рефлекторная с цоколем Е27

LED – светодиодный источник света

Вот эти основные маркировки могут встречаться и в каталогах и тех. паспортах и т.п., поэтому запомнить будет очень даже полезно.

2. Теперь же переходим к светильникам. Здесь всё немного сложнее, но если запомнить, то проблем не составит труда. Самое главное – три буквы, которые встречаются в маркировке светильников.

Первая буква нам говорит о том, какой источник света установлен:

Н – лампа накаливания

С – лампа-светильник

И – кварцево-галогенная лампа

Л – линейная люминесцентная лампа

Ф – фигурная люминесцентная лампа

Э – эритемная люминесцентная лампа

Р – газоразрядная ртутная лампа

Г – газоразрядная металлогалогенная лампа

Ж – газоразрядная натриевая лампа

Б – бактерицидная лампа

К – ксеноновая трубчатая лампа

Д – светодиодная лампа

Вторая буква указывает на способ установки светильника:

С – подвесной

П – потолочный

В – встраиваемый

Д – пристраиваемый

Б – настенный

Н – настольный, опорный

Т – венчающий, торшерный

К – консольный

Р – ручной

Г – головной

И третья буква нам говорит о назначении светильника:

П – для промышленный и производственных зданий

О – для общественных зданий

Б – для жилых (бытовых) помещений

У – наружного (уличного) освещения

Р – для рудников и шахт

Т – для кинематографических и телевизионных студий.

_______________________________________________

Вот теперь легко и просто расшифровать маркировку светильника.

ЛСП? Светильник подвесной, для промышленных помещений с люминесцентной лампой.

ЖКУ? Консольный уличный светильник с натриевой лампой.

Ну и так далее. Так что ставьте в закладки или запоминайте и будет вам проще ориентироваться в маркировках.

Подписывайтесь на канал, ставьте лайки и я буду специально для вас писать новые тексты, еще более интересные и еще более познавательные!

С уважением, Кухарский Олег.

Электротехническая продукция в Уфе

ФОТО-КАТАЛОГ
  • Лампы, световые устройства, комплектующие светильников
    • Лампы накаливания (ЛН)
    • Лампы накаливания галогенные (ГЛ)
    • Лампы люминесцентные (линейные (ЛЛ), компактные (КЛЛ))
      • Линейные люминесцентные лампы
      • Компактные лампы Osram (цоколь 2G7, 2G11, G23, G24, GX24, E14, E27 и др. )
      • Компактные лампы Selecta (цоколь G23, G24, GX53, GX70, E14, E27 и др.)
      • Компактные лампы Ecola (цоколь GU5.3, GU10, GX24, GX40, GX53, GX70, R7s, E14. E27 и др.)
      • Компактные лампы Uniel (цоколь R7s, Е14, Е27 и др.)
      • Компактные лампы Compak (цоколь 2G7, 2G11, Gx10q и др.)
      • КЛЛ TDM с трубкой дугообразной (3U, 4U)
      • КЛЛ TDM с трубкой спиралевидной полной (FS)
      • КЛЛ TDM с трубкой малого диаметра (FST2)
      • КЛЛ TDM неинтегрированные (без ПРА)
      • КЛЛ TDM промышленные (мощные)
    • Лампы газоразрядные
    • Светодиодные (LED) лампы и модули
    • Лампы бактерицидные, облучатели
    • Фитолампы и световые устройства для растений
    • Декоративная иллюминация
    • Светодиодные (LED) ленты, контроллеры и аксессуары
    • Пускорегулирующая и светотехническая арматура
  • Светильники наружного освещения и универсального применения
    • Прожекторы (опции – переносной, с датчиком движения, RGB) IP44, 54, 65
      • Прожекторы светодиодные брендовые (ASD, JazzWay, GeniLED, General и др. )
      • Прожекторы светодиодные Народные СДО
      • Прожекторы светодиодные Народные СДО-04
      • Прожекторы светодиодные Народные СДО-3 Компакт
      • Прожекторы цокольные R7s под галогенные лампы брендовые (+ опции)
      • Прожекторы цокольные R7s под галогенные лампы TDM (+ опции)
      • Прожекторы цокольные Е27, Е40 и пр. под различные лампы (ЛН, КЛЛ, LED, ДНаТ, ДРЛ и пр.) брендовые
      • Прожекторы цокольные Е27, Е40 и пр. под различные лампы (ЛН, КЛЛ, LED, ДНат, ДРЛ и пр.) TDM
      • Прожекторы цокольные Rx7s, Е40 под металлогалогенные лампы брендовые
      • Прожекторы цокольные Rx7s, Е40 под металлогалогенные лампы TDM
      • Прожекторы на штативе, штативы
    • Светильники садово-парковые комбинированные брендовые
    • Светильники консольные на трубу (+ опции) брендовые
    • Светильники настенно-потолочные (накладные, подвесные и пр.)
      • Светильники под цокольные лампы Е27, Е40
      • Светильники под цокольные лампы G5.3, GU5.3, GU10, GX53, GX70
      • Накладные люминесцентные светильники типа ЛСП под цокольные лампы G13
      • Накладные светильники типа НПП, НПБ, НБП, НББ под цокольные лампы Е27, Е40
      • Светильники подвесные (на трос, профиль, трубу) светодиодные и цокольные Е27, Е40
      • Светильники вертикально-подвесные типа НСП под цокольные лампы Е27, Е40
    • Фонари, светильники переносные/с аккумулятором и аксессуары
    • Светильники садово-парковые (с/п) TDM и комплектующие к ним
    • Светильники взрывозащищенные
  • Светильники внутреннего освещения
    • Встраиваемые светильники общего и дополнительного освещения
    • Светильники накладные люминесцентные (под лампы с цоколем G5, G13, G23, GR10q и пр. ) IP20, 23, 40
    • Светильники настенно-потолочные цокольные Е14, Е27, G10 и пр. под лампы ЛН, КЛЛ, LED
    • Светильники светодиодные настенно-потолочные
    • Светильники подвесные (на шнур, трос, трубу и пр.)
      • Светильники подвесные светодиодные
      • Светильники подвесные типа НСО, НСБ цокольные Е27, G9 и пр. (под лампы ЛН, КЛЛ, LED)
      • Светильники подвесные (люстры) CITILUX цокольные Е14, Е27 и пр. (под лампы ЛН, КЛЛ, LED)
      • Светильники производственные цокольные Е27, Е40 и пр. (под лампы ЛН, КЛЛ, LED)
      • Светильники производственные цокольные Е27, Е40 (под лампы ДРЛ, ДНаТ, ДРИ (МГЛ))
    • Светильники накладные специальные – с датчиками (фото-, шума, движения и пр.), антивандальные
    • Светильники аварийные/с аккумулятором и световые указатели
    • Светильники точечные (опции – поворотные, с рефлектором, с декоративным элементом)
      • Встраиваемые светодиодные светильники
      • Встраиваемые светильники с цоколем E14, E27
      • Встраиваемые светильники с цоколем G4, GU4, G9, GU9, GU10
      • Встраиваемые светильники с цоколем G5.
        3, GU5.3
      • Встраиваемые светильники с цоколем GX40, GX53, GX70
      • Встраиваемые декоративные потолочные светильники E14, G4, G9, G5.3, GU5.3, GU10
      • Накладные светильники с цоколем GX53
    • Светильники локального и акцентного освещения
  • Электроустановочные изделия (ЭУИ)
  • Кабельные разъемы, удлинители, фильтры сети
    • Бытовые электрические вилки, розетки
    • Колодки (посты) розеточные, разветвители
      • Колодки бытовые белые (IP20, 2P б/заземления, 2P+E)
      • Колодки бытовые черные (IP20, 2P б/заземления, 2P+E)
      • Колодки бытовые ЭКО сосна (IP20, 2P б/заземления, 2P+E)
      • Колодки бытовые ЭКО бук (IP20, 2P б/заземления, 2P+E)
      • Розеточные посты каучуковые IP44, 55
      • Разветвители (двойники, тройники и пр.)
      • Разветвители с гнездами под плоскую вилку
    • Удлинители офисно-бытовые IP20
    • Удлинители производственные IP20, 44
    • Удлинители-переноски под лампу
    • Разъемы, переходники, шнуры соединительные для сетевого оборудования
    • Силовые вилки, розетки (разъемы)
  • Автоматические выключатели и устройства защиты
    • Автоматические выключатели силовые
    • Автоматические выключатели модульные
    • Дифференциальные автоматические выключатели
    • Устройства защиты от перенапряжений
    • Предохранители (типа ПАР, плавкие вставки, держатели и пр. )
      • Предохранители ПАР (автоматические резьбовые)
      • Плавкие вставки ВПБ, Н520Б (быстрого действия), ВПТ, Н520Т (замедленного действия), держатели ДПВ 5х20
      • Плавкие вставки цилиндрические ПВЦ, держатели ДПВ 10х38, 14х51, 22х58
      • Предохранители плавкие серии ППНН, держатели, аксессуары
      • Предохранители плавкие вставки ПН-2, контакты-основания и пр.
      • Патроны ПТ высоковольтных предохранителей ПКТ
    • Устройства защитного отключения
    • Реле (блоки) контроля и защиты
    • Устройства заземления (комплекты и пр.)
  • Электрокоммутационная аппаратура
    • Устройства модульные
    • Устройства в оболочке, с функцией доп/оболочки и без нее
      • Выключатели кнопочные IP40
      • Выключатели путевые, концевые IP54, 55, 67
      • Рубильники кулачковые IP40, 44
      • Посты кнопочные IP40, 54, оболочки для кнопок
      • Посты кнопочные тельферные IP30, 54
      • Переключатели кулачковые IP20, 40, 54
      • Пакетные выключатели/переключатели IP00, 30, 56
      • Контакторы в оболочке IP54
    • Арматура ручного управления
    • Выключатели-разъединители
    • Устройства электромагнитные для частых коммутаций
    • Контакторы малогабаритные КМН, катушки и пр.
    • Контакторы промышленные КТН, катушки и пр.
    • Контакторы электромагнитные КТ серии 6600
    • Пускатели ПМ12 Вольтмик, реле и аксессуары
    • Пускатели ПМ-12 TDM electric, реле и аксессуары
    • Пускатели ПМЛ
  • Корпуса и устройства для сборки щитов, электрощиты в сборе
    • Щиты распределительные встраиваемые (типа ЩРВ) пластиковые, металлические IP31, 40, 41
    • Щиты распределительные навесные (типа ЩРН) пластиковые, металлические IP20, 30, 31, 40, 41
      • Щиты (боксы) навесные пластиковые ABB, Schneider Electric IP40
      • Щиты (боксы) навесные пластиковые TDM IP20, 41, 42 белый
      • Щиты (боксы) навесные пластиковые TDM IP20, 41, 42 ЭКО сосна, бук, антрацит
      • Щиты (боксы) навесные пластиковые Tekfor IP41
      • Щиты (боксы) навесные пластиковые Vi-ko, U-plast, Legrand Nedbox IP30, 40
      • Щиты (боксы) навесные пластиковые ТУСО IP40
      • Щиты (боксы) навесные пластиковые IEK, СЩит IP30,31
      • Щиты (боксы) навесные металлические Узола IP31
      • Щиты (боксы) навесные металлические TDM IP31
      • Щиты (боксы) навесные металлические СЩит, ЭРА, RUCELF IP31
    • Щиты учетные и учетно-распределительные IP30, 31
      • Щиты учета и распределения встраиваемые (ЩУРВ, ЩРУВ, ЩРУ-В и др. ) IP31
      • Щиты учета и распределения навесные (ЩУН, ЩУРН, ЩРУН, ЩРУ и др.) IP31
      • Щиты квартирные (ЩК, ЩКВ, ЩКН, оболочки, корпуса, панели и др.) IP30, 31
    • Щиты с монтажной панелью IP31, 54, 55, 66
      • Щиты ЩМП, ЩРН-М металлические IP31 TDM
      • Щиты ЩМП, ЩРН-М металлические IP31 Узола, RUCELF, СЩит
      • Щиты ЩМП, ЩРН-М металлические IP66 TDM
      • Щиты ЩМП, ЩРН-М металлические IP54, 55, 65 Узола, RUCELF, СЩит
      • Щиты ЩМП, ЩРН-М металлические напольные IP31, 66 TDM и аксессуары
      • Щиты антивандальные ЩПМП пластиковые
      • Щиты ЩМП пластиковые IP65 TDM
    • Щиты учета и распределения герметичные IP54, 55, 66
    • Каркасы и аксессуары (панели, рамы и пр.) для сборки щитов
      • Каркасы TDM серии ВРУ-1 (цельносварные, сборно-разборные) IP31
      • Каркасы TDM серии ВРУ-2, ВРУ-3 (цельносварные, сборно-разборные) IP31
      • Панели, рамы и аксессуары для каркасов ВРУ TDM (-1,-2,-3)
      • Каркасы TDM серии ВРУ-1 IP54
      • Корпуса TDM ШРС, ВРУ-моноблочный IP31, 54
      • Корпуса TDM для сборки НКУ (ШРС, ВРУ, ГРЩ, ЩО-70, Щиты автоматики и пр. ) серия КСРМ сборно-разборные IP31
      • Корпуса TDM щитов этажных ЩЭ IP30
    • Средства обеспечения микроклимата
    • Электрические счетчики, приборы измерительные
    • Электрощитовые сборки
  • Аксессуары для щитов и шкафов
  • Устройства трансформации, питания и стабилизации
    • Трансформаторы и комплектные устройства
    • Авто- и мотосвязанные устройства
    • Аккумуляторы, батарейки и источники (системы) бесперебойного питания
      • Аккумуляторные батарейки AAA (R03 10,5мм), AA (R06 D14,5мм), C (R14 D26,2мм), D (R20 D34,2мм) и др., зарядные устройства
      • Батарейки цилиндрические 1,5В (AAA, AA, C, D), дисковые 1,5; 3,0В) и др.
      • ИБП (плюс реле напряжения, стабилизатор, аккумулятор)
    • Устройства питания пониженным напряжением
    • Стабилизаторы напряжения для однофазной сети
    • Стабилизаторы напряжения для трехфазной сети
  • Аксессуары управления электрической нагрузкой
  • Кабель, провод
    • Силовой для стационарной прокладки
    • Силовой для подвижных соединений
    • Установочные (монтажные) и соединительные провода
      • Провод ПуВ, ПВ-1
      • Провод ПуВ, ПВ-1 бухтами (TDM)
      • Провод ПуГВ, ПВ-3
      • Провод ПуГВ, ПВ-3 бухтами (TDM)
      • Провод АПВ
      • Провод ПВС, кабель гибкий КГ-ВВ
      • Провод ПВС бухтами (TDM)
      • Провод плоский гибкий ШВВП, ШВП-2, ПУБГ-П, ПГВВ-П
      • Провод монтажный НВ, МПО, МГШВ, БПВЛ
    • Для вторичных сетей контроля, управления, связи, сигнализации и блокировки
    • Кабель информационный и речевой
    • Ретро-провод витой
    • Специальный провод (водопогружной, термо- и жаростойкий и пр. )
    • Греющий кабель (саморегулирующийся и резистивный)
  • Кабеленесущие изделия и системы
  • Товары для одноразовой выписки артикулы 89000 – 89999
  • Изделия монтажные соединением с кабельной жилой
  • Изделия для изоляции и защиты соединений
  • Изделия крепежные и смежные
  • Электрический инструмент для работы и измерений, расходники
    • Электроинструмент для электромонтажных и общестроительных работ
    • Расходные материалы для электроинструмента
    • Расходные материалы для электроинструмента (продолжение)
      • Круги отрезные по металлу и др.
      • Круги отрезные по бетону, кирпичу и пр.
      • Круги зачистные, обдирочные, заточные
      • Штроберы, зубила плоские, пики для перфораторов
      • Паяльные материалы (припои, канифоль и пр.), клеевые стержни
      • Щетки-крацовки
      • Шкурка шлифовальная, лента абразивная, паста полировальная, насадки
      • Метчики, плашки, клуппы, фрезы, резцы машинные и машинно-ручные, держатели (воротки)
    • Сварочные аппараты и аксессуары
    • Средства обеспечения электромонтажных и общестроительных работ
  • Ручной инструмент, расходники
    • Ручной электромонтажный инструмент и приспособления
    • Ручной общестроительный инструмент и аксессуары
      • Бокорезы, пассатижи, длинногубцы слесарные
      • Ключи разводные, раздвижные (трубные), клещи переставные
      • Отвертки слесарные и аксессуары (биты, переходники и пр. ), наборы
      • Ключи слесарные (рожковые, накидные, комбинированные, имбусовые и пр.), наборы
      • Ключи головочного типа (торцевые), головки и державки (трещетки, воротки), наборы
      • Ножовки по дереву, гипсокартону и пр., стусла
      • Ножи, ножницы, болто- и тросорезы, лезвия и пр.
    • Ручной общестроительный инструмент (продолжение), приспособления и аксессуары
      • Кисти для покраски
      • Ролики и аксессуары для покраски
      • Шпатели, мастерки, кельмы, правило, миксеры и др.
      • Напильники, надфили, рашпили, щетки (обдирочные, зачистные)
      • Ударный инструмент (молотки, кувалды, топоры, киянки, аксессуары)
      • Мерительный инструмент (рулетки, угольники и пр.)
      • Уровни (пузырьковые, лазерные), нивелиры, отвесы и др.
      • Специнструмент (стамески, стекло- и плиткорезы и др.)
    • Расходные материалы и ручной инструмент (приспособления) их использования
      • Полотна ножовочные по металлу, державки полотен
      • Баллоны цанговые заполненные для газовых горелок, горелки, лампы паяльные
      • Тубовая пена монтажная и очистители, распределители (пистолеты)
      • Герметики в тубах и тюбиках, распределители (пистолеты)
      • Заклепки, заклепочники
      • Скобы, степлеры
      • Бруски, шкурка (сетка) абразивные (шлифовальные), оправки (державки)
      • Захваты колец, подшипников (съемники), крюки монтажные и пр.
    • Приспособления и легкая техника для производства работ
  • Электрические водо- и воздухонагреватели (прямые и косвенные)
  • Электронасосные агрегаты
  • Электродвигатели, частотные преобразователи
  • Электротовары для хозяйства, аналоги и хозинвентарь
  • Инженерная сантехника для дома
    • Вентили, краны, смесители
    • Резьбовые фитинги, коллекторы/разделители, радиаторы
    • Арматура и устройства безопасности, управления и учета
    • Трубы, фитинги, аксессуары для монтажа систем водоснабжения, отопления и канализации
    • Сантехнические монтажные аксессуары и запчасти
      • Хомуты трубные, червячные, ремонтные и пр.
      • Лента-фум, лен, паста, нить для герметизации резьбы
      • Арматура запорная (картриджи, кран-буксы, клапаны и пр.)
      • Теплоизоляция (трубки, рулоны и аксессуары)
      • Трос сантехнический
      • Теплоносители (антифриз)
      • Аэраторы, лейки и пр.
      • Прокладки, манжеты, кольца и пр.
      • Запчасти (мембраны, фланцы) к гидроаккумуляторам (бакам), крепления
      • Дюбеля для крепления сантехники
    • Гибкая подводка, труба/фитинги из нержавеющей стали и пр.
    • Элементы магистральной очистки воды


Торговая сеть ATOM electric работает на рынке электротехнической продукции с 2003 года и предлагает своим клиентам товары оптимального соотношения цена-качество.


Лампы, световые устройства, комплектующие светильников

Светильники наружного освещения

Светильники внутреннего освещения

Электроустановочные изделия

Кабельные разъемы, удлинители, фильтры сети

Автоматические выключатели и устройства защиты

Электрокоммутационная аппаратура

Корпуса и комплектующие для сборки щитов, электрощиты в сборе

Аксессуары для щитов и шкафов

Устройства трансформации, питания и стабилизации

Аксессуары управления электрической нагрузкой

Кабель, провод

Кабеленесущие системы

Изделия монтажные соединением с кабельной жилой

Изделия для изоляции и защиты соединений

Изделия крепежные и смежные

Электрический инструмент для работы и измерений, расходники

Ручной инструмент для электромонтажных и общестроительных работ, расходники

Электрические водо- и воздухонагреватели (прямые и косвенные)

Электронасосные агрегаты

Электродвигатели, частотные преобразователи

Электротовары для хозяйства и хозинвентарь

Инженерная сантехника

 

 

 

ОПИСАНИЕ ЛАМПЫ GFS

1

Описание буквенно-цифрового сообщения GFS LAMP


Наведение GFS на базе MOS LAMP генерируется с использованием текущие наблюдения станции за время цикла, анализ наблюдений, вывод простой модели и Данные MOS получены из глобальной спектральной модели NCEP.
Чтобы оставаться в курсе о наличии наведения GFS-LAMP для разного времени цикла, пожалуйста, обратитесь к нашему Документ последних изменений . Это руководство действительно для станций в США, Пуэрто Рико и Виргинские острова США. Для просмотра самого последнего списка станций нажмите здесь . Элементы прогноза действительны от 1 до 25 часов вперед.
Образец сообщения LAMP
        РУКОВОДСТВО ПО ЛАМПАМ KBWI GFS 14.02.2018 15:00 UTC
UTC 16 17 18 19 20 21 22 23 00 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16
ТМП 43 45 47 49 51 51 50 48 47 47 46 47 47 47 47 48 48 48 48 48 49 51 53 56 59
ДПТ 33 34 36 38 41 42 42 42 42 42 42 43 43 43 44 44 45 45 45 45 45 46 47 48 49
WDR 23 23 23 23 23 22 21 18 18 19 23 23 22 23 24 23 22 22 22 23 23 24 23 23 23
WSP 09 08 08 09 08 07 06 05 03 03 03 03 04 05 06 04 03 03 03 03 03 03 04 06 07
WGS NG NG NG NG NG NG NG NG NG NG NG NG NG NG NG NG NG NG NG NG
ПФО 0 1 1 1 1 9 7 1 6 1 3 6 19 30 46 46 43 40 31 23 13 8 6 3 1
PCO N N N N N N N N N N N N N N Y Y Y Y N N N N N N N
P06 9 50 57
ЛП1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0
LC1 N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N
CP1 1 1 1 0 0 0 1 1 1 1 1 3 13 19 24 17 18 15 8 4 0 0 0 0 1
CC1 N N N N N N N N N N N N L L M L M L N N N N N N N
ПОЗ 3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
POS 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
ТИП Р Р Р Р Р Р Р Р Р Р Р Р Р Р Р Р Р Р Р Р Р Р Р Р
CLD BK BK BK BK BK OV BK BK OV OV OV OV OV OV OV OV OV OV OV OV OV OV OV OV OV
CIG 8 8 7 7 8 8 8 7 7 7 6 6 6 4 3 3 3 3 2 2 2 2 6 6 7
ОГК 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 5 2 2 2 2 2 2 2 2 6 6 6
ВИС 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 5 5 5 5 5 5 3 4 5 7 7 7
CVS 6 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 6
OBV N N N N N N N N N N N N N BR FG FG FG BR FG FG FG FG HZ N N
                 
  • Всемирное координированное время = Час дня по времени UTC. Это час, когда прогноз действителен, или если прогноз действителен для периода, конец прогнозируемого периода.
  • ТМП = температура поверхности, действующая в этот час.
  • ДСТ = точка росы на поверхности, действующая в этот час.
  • Широкий динамический диапазон = прогнозы 10-метрового направления ветра в час, учитывая в десятках градусов.
  • WSP = прогноз скорости ветра на высоте 10 м в час, приведенный в узлы.
  • ВГС = прогнозы 10-метрового порыва ветра в час, приведенные в узлы. «НГ» означает, что порывы ветра не прогнозируются.
  • РРО = вероятность осадков, выпадающих в течение часа.То количество осадков не обязательно должно быть измерено.
  • П06 = вероятность измеряемых осадков (PoP) в течение 6-часового период, заканчивающийся в это время.
  • ПКО = категорический прогноз да (Y) или нет (N) указывает на то, что осадки, не обязательно измеримые, произойдет в час.
  • ЛП1 = вероятность молнии (по крайней мере, одна общая вспышка молнии) в течение 1-часового периода, заканчивающегося в указанное время.
  • ЛК1 = категорический прогноз отсутствия (N), низкого (L), среднего (M) или высокого (H) потенциала молнии (как минимум одна общая вспышка молнии), происходящего в течение 1-часового периода, заканчивающегося в указанное время.
  • СР1 вероятность конвекции (по крайней мере, одна общая вспышка молнии и/или коэффициент отражения радара 40 дБЗ или выше), происходящая в течение 1-часового периода, заканчивающегося в указанное время.
  • СС1 = категорический прогноз отсутствия (N), низкого (L), среднего (M) или высокого (H) потенциала конвекции (по крайней мере, одна общая вспышка молнии и/или радиолокационная отражательная способность 40 дБZ или выше) в течение 1 часа период, заканчивающийся в указанное время.
  • поз* = условная вероятность замерзания ПКП, происходящего на час. Эта вероятность зависит от количества осадков. происходит.
  • POS* = условная вероятность выпадения снега в данный час. Эта вероятность обусловлена ​​выпадением осадков.
  • ТИП* = тип условных осадков в час. Этот Прогноз категории зависит от выпадающих осадков.
  • CLD = категории прогноза общего небесного покрова, действительные в этот час.
  • КИГ = высота потолка категориальные прогнозы на час.
  • ККИ = условная высота потолка категорийных прогнозов на час. Прогноз для этой категории зависит от осадков. происходит.
  • ВИС = видимость категориальных прогнозов в час.
  • CVS = условная видимость категориальные прогнозы на час. Прогноз для этой категории зависит от осадков. происходит.
  • ОБВ = препятствие для видения категоричных прогнозов на час.

*На территории США эти продукты доступны с 1 сентября по 31 мая.


Определения категориальных элементов

Категории высоты потолка LAV (CIG) и условной высоты потолка
(CCG)
1 200 – 400 футов
3 500 – 900 футов
4 1000 – 1900 футов
5 2000 – 3000 Ноги
6 3100 – 6500 футов
7

6600 – 12 000 футов
8> 12 000 футов или неограниченного потолка

Категории видимости LAV (VIS) и
условной видимости (CVIS)
1 <1/2 мили
2 1/2 – <1 миль
3 1 – <2 мили
4 2 – <3 мили
5 3 – 5 мили
6 6 мили
7> 6 миль

Для численного прогноза
элемент отсутствует значения
обозначаются 99 или 999

Облако LAV (CLD) Категории
CL CLE
FW
FW

SC SC
BK Brada> 4-
OV пасмурно

LAV Препятствие зрению (OBV) Категории
N None из следующих
HZ Haze, дым, пыль
BR MIUT (туман с видимостью> = 5/8 миль)
FG Fog или наземный туман
(видимость
БЛ метель, пыль, песок, снег

LAV Тип осадков (TYP) Категории
S чистый снег или снежные зерна
Z замерзание дождя / морося, ледяные гранулы, или
что-либо смешанное с замораживанием Precip
R Чистый дождь / морося или дождь, смешанный со снегом
x Прогноз отсутствует на этот час



Последнее изменение страницы: 21 июня 2018 г. 18:21 универсальное глобальное время

Тональный декодер 4 + 1

Главная – Techniek – Electronica – Radiotechniek – Радиолюбительское лезвие – 73 любительское радио – Тональный декодер 4 + 1


Декодер для групповых и индивидуальных звонков менее чем за 35 долларов!

Радиолюбители часто хотят отключить все сигналы на занятом ретрансляторе, кроме того, который звонит специально для них. Было бы неплохо оставить включенным HT на работе и не быть уволенным!

Теперь они могут с декодером 4 + 1.Это умный динамик, который подключается к разъему динамика и молчит, пока кто-нибудь не активирует его персональным 4-значным набором DTMF (Touch-Tone(1)).

Трасса была вдохновлена ​​местной аварийной группой RACES/ARES. У всех участников были двухметровые радиоприемники, но немногие были готовы держать их включенными днем ​​в офисе или поздно ночью дома. Решение состояло в том, чтобы спроектировать схему, которая позволила бы каждому участнику иметь свою собственную последовательность из четырех цифр, а также реагировать на одну команду, чтобы активировать всех сразу.

Декодер 4 + 1 в любое время отвечает либо на последовательность из четырех цифр, либо на одну цифру, отправленную в течение трех секунд, отсюда и название «Декодер 4 + 1». Декодер каждого может быть установлен на одни и те же 3 секунды (длинный тон) для общего вызова. Независимо от того, используется ли функция вызова, каждый оператор может выбрать последовательность тональных сигналов длиной до четырех цифр для своего личного кода вызова. Менее чем за 35 долларов по частям трудно превзойти.

Идея использования DTMF-декодера для управления динамиком радиостанции не нова, особенно для экстренной связи(2).Существует как минимум один высококачественный декодер с динамиком, доступный в продаже менее чем за 100 долларов (Auto-Kall), и Heathkit предлагает комплект, который можно радикально адаптировать (3). Однако декодер 4 + 1 является первой недорогой схемой, позволяющей осуществлять как индивидуальные, так и групповые вызовы.

Типичная операция

цифр DTMF выбираются с помощью перемычек в разъеме IC. Из соображений низкой стоимости и простоты декодируются только цифры от 1 до 9 и специальная цифра «D». Цифры 0, *, #, A, B и C не распознаются.Для одного длинного тона выбирается одна цифра, а для последовательности выбираются от одной до четырех цифр. Одна цифра может использоваться повторно.

Единственная другая регулировка – потенциометр. Это используется для установки того, сколько секунд будет включен динамик после того, как будет распознана правильная цифра. Затем декодер подключается к радио как внешний динамик. Динамик декодера остается выключенным до тех пор, пока он не получит правильную цифру или последовательность. После срабатывания загорается лампа «вызов», и динамик подключается к аудиосистеме радио.По истечении заданного периода динамик отключается до тех пор, пока другой действительный вход не активирует динамик. Имеется обходной переключатель, отключающий функцию декодирования и, таким образом, позволяющий пользователю прослушивать весь трафик на частоте. На декодере также есть кнопка сброса, которая немедленно отключает динамик и гасит индикатор вызова.

Цепь

Рис. 1 представляет собой схему платы декодера. U1 — это микросхема декодера DTMF. Он выполняет 90% работы, распознавая цифры DTMF и преобразовывая их в двоичные коды.Так как U I использует кристалл “цветовой импульс” и сложную цифровую фильтрацию, его точность и стабильность выше, чем у декодеров, изготовленных из ИС декодера тона с фазовой автоподстройкой частоты (например, LM567) (4). U2 преобразует двоичные коды из U 1 в отдельные сигналы, по одному на каждую цифру от 1 до 9 и цифру D.


Рисунок 1. Схема схемы декодера.

Ввод последовательности

Сокет для программирования позволяет пользователю выбирать цифры и отправлять их на U4 либо для определения последовательности, либо для синхронизации.Метод секвенирования необычен и является одной из причин низкой стоимости. Первая цифра последовательности заряжает C5 через CR2. C5 будет удерживать заряд на одном из двух входов U4a примерно полсекунды. В течение этого периода вторая цифра может активировать другой вход U4a. Как только оба входа U4a (логический элемент И) активны, выход U4a включается и заряжает C6 через CR3. Теперь один вход U4b активируется на полсекунды, пока схема ожидает третьей цифры в последовательности, чтобы включить другой вход U4b.Успешная третья цифра активирует выход U4b, который на этот раз заряжает C7 через CR4. Если четвертая цифра поступает в течение следующих полсекунды, это также активирует вывод U4c. Этот выход активирует защелку индикатора вызова (U5) и таймер динамика (U6).

Таймер длинного тона

Таймер длинных тонов работает на разновидности секвенсора. Пока принимается длинный сигнал, R3 медленно заряжает C4. Если длинный тон прекращается до трехсекундного интервала, CR1 (который имеет противоположную полярность в цепи, чем D2-D4) быстро разряжает C4.Как только C4 полностью заряжается достаточно длинной непрерывной цифрой, включается выход U4d, который запускает U5 и U6.

Успешная последовательность или одна трехсекундная цифра DTMF запускает таймер U6 и фиксирует U5. U5 держит лампу вызова включенной. Между тем, пока работает U6, реле Kl находится под напряжением и подключает динамик к аудиосистеме радио. Кнопка сброса сбрасывает U5. Кнопка сброса также прерывает период времени U6.

U4 — это регулятор для универсального источника питания, который принимает 7–14 вольт переменного или постоянного тока.Двумя типичными источниками питания являются автомобильный прикуриватель и модульный настенный трансформатор.

Изменение времени

Значение C4 определяет требуемую продолжительность длинного тона. Более длительное время требует больших значений емкости. Однако три секунды оказались наиболее практичными. Входная скорость для последовательного декодирования определяется C5-C7. Большие значения снижают требования к скорости, но увеличивают вероятность ложного срабатывания последовательностей цифр, подобных запрограммированной последовательности.Например, если последовательность 6-8-2-1 отправлена ​​достаточно быстро, это вызовет декодер, установленный для последовательности 6-2-1. Если ложные срабатывания являются проблемой, уменьшите значения для C5-C7. Таймер динамика управляется резисторами R9 и C10. Показанные значения позволяют время в диапазоне от 1 до 60 секунд. Увеличение C10 увеличивает этот диапазон. Возможны диапазоны до 10 минут.

Программирование

В разъеме для программирования (W 1) запрограммированы как длинный код, так и кодовая последовательность от 1 до 4 цифр. Самый простой способ программирования – подключить 16-контактный разъем IC “.” Подключите несколько разъемов для быстрого изменения программирования. Контакты разъема с 1 по 9 соответствуют цифрам DTMF с I по 9, контакт 10 заземлен, а контакт 11 соответствует цифре D. Чтобы запрограммировать длинный тон, выберите цифру и завяжите перемычка с соответствующего номера контакта на контакт 16. Замыкание контакта 16 на землю, контакт 10, отключает таймер длинного тона.

Программирование последовательности почти так же просто. Соедините контакт 15 с первой цифрой последовательности, контакт 14 со второй цифрой, контакт 13 с третьей цифрой и контакт 12 с четвертой цифрой. Если требуется только последовательность из 3, 2 или 1 цифры, подключите неиспользуемые контакты последовательности (12, 13 или 14) к последней цифре кода. Например, при программировании двухзначной последовательности 1-2 все контакты 12, 13 и 14 подключаются к контакту 2. Вот пример программирования трехзначного числа.

Проводка заголовка для программы Long-tone 5 и последовательности 2-7-2:

  • Длиннотональный контакт 16 — контакт 5 (цифра 5)
  • 1-я цифра последовательности от контакта 15 до контакта 2 (цифра 2)
  • 2-я цифра последовательности от контакта 14 до контакта 7 (цифра 7)
  • 3-я цифра последовательности контактов с 13 по 2 (цифра 2)
  • 4-я цифра последовательности от контакта 12 до контакта 2 (цифра 2)

Этот пример иллюстрирует одно важное ограничение программирования последовательности: декодер не может отличить одиночную цифру от повторяющейся одиночной цифры (т.грамм. 2 против 2-2-2). Например, программная последовательность 9-1-1 запускает звук с помощью 9-1.

Потребляемая мощность

Схема потребляет 15 мА в ожидании звонка, в основном из-за U 1. Это делает непрактичной работу от маленькой (9 вольт) батареи, поэтому для питания декодера и HT в ночное время я использую мотоциклетную батарею за 15 долларов. Когда реле и светодиод находятся под напряжением, цепь потребляет чуть более 40 мА.

Строительство

Расположение компонентов не критично. Просто помните, что соединения от U I до кристалла должны быть достаточно короткими, и осторожно обращайтесь с микросхемами CMOS U2, U4 и U5.Будет достаточно проволочной обмотки или двухточечной проводки, но проще всего использовать печатную плату (см. Проще всего использовать печатную плату (см. список деталей). Доступная печатная плата будет содержать все компоненты, кроме светодиода, динамика. , разъемы и переключатели.Большинство соединений, внешних по отношению к плате (рис. 2), подключены через отверстия для 16-контактного разъема IC 01). Можно подключить соединения либо непосредственно к плате, либо через разъем, подключенный к разъему IC.


Фигура 2.Проводка внешняя по отношению к печатной плате. Эта конфигурация предназначена для активации внутреннего или внешнего динамика.


Фото А. Внутренний вид готового дешифратора. Печатная плата находится на дне коробки. Ленточный кабель соединяет плату с динамиком, светодиодом и переключателями на передней панели. Разъемы для аудиовхода, выход на внешний динамик. и питания установлены на дальнем конце коробки. Пьезозуммер (см. рис. 2) в эту версию не входил.

Я собрал готовый блок, показанный на фото А, в недорогой пластиковой коробке (см. список деталей).Кольцевая пила, обычно используемая для вырезания отверстий для сверхминиатюрных тумблеров (декодирования/обхода) диаметром 1 дюйм или меньше, просверлила отверстие для динамика в съемной крышке коробки. Кусок перфорированной доски служил решеткой динамика. При установке в коробку , недорогой 2-дюймовый динамик имел удивительно хорошее качество звука. Светодиод вызова был установлен прямо над динамиком с помощью эпоксидной смолы, чтобы удерживать его на месте. Кнопочный переключатель сброса и сверхминиатюрный тумблер DPST (декодирование/обход) установлен под динамиком.Компьютер установлен на металлических стойках, прикрученных болтами к нижней части коробки, но до того, как печатная плата встала на место, на одном конце коробки были установлены разъемы для подключения аудиовхода, внешнего динамика и питания. .Я выбрал разъем для внешнего динамика, чтобы он соответствовал разъему на моей установке. (Таким образом, мне не нужен адаптер для использования моего внешнего динамика с установкой или декодером.) Гнездо аудиовхода имеет другой размер, чтобы предотвратить ошибки. Стандартный разъем питания концентрического типа предназначен для подключения питания. Ленточный кабель соединяет печатную плату с разъемами, а печатную плату с верхней панелью. Наклеенные резиновые ножки, добавленные к нижней части корпуса, придают последний штрих.


Фото B. Тональный декодер в корпусе.

6 Radio Shack Miniature Piezo Buzzer

Список деталей
печатная плата
C1 0,1 мкФ
C2 470016 C2 47 мкФ 16 В электролитические
C3 1 мкФ 6 В Электролитические
C4 22 мкФ 16 В Электролитические
C5-C7 0,0022 мкВФ
C8 0,01 мкФ
C9 0,1 мкФ
C10 47 мкФ 6 В Электролитические
C11 0. 01μf
CR1-CR6 1N914 или похожих
CR7
CR7 DB101 или VM08 Diodes Bridge, или 4 1N4001 Diodes
K1 Radio Shack 275-232 Миниатюрный 5-вольт реле
Q1, Q2 2N3904
R1 1,0 мОм 1/4 Вт 10%
R2 27Kω 1 / 4W 10%
R3 100Kω 1 / 4W 10%
R4 15Kω 1 / 4W 10%
R5
R5 27COM 1 / 4W 10%
R6 270Oм 1/4 Вт 10%
R7 470Kω 1 / 4W 10%
R8 4.7kω 1 / 4W 10%
R9 R9 1MΩ 1-HOTE TRIMPOT
U1

RCA CDD22204E или SSI 204 DTMF приемник
U2 CD4028B CMOS BCD Decoder
U3 78L05AC Low Power 5V регулятор
u4 CD4081 B CMOS Quad и Gate CD4001 B CMOS Quad ни Gate
U6 NE555 таймер
W1 16 PIN-код гнездо и 16-контактный разъем
Y1 3. 579545 Colorburst Crystal
BUZZER
Case Radio Shack 270-223 (6 “x 3.15” x 1.84 “)
Регулярное или мигающее LED
Power 8 VDC, 400 мА Стеноводки (JameCo DC800)
Динамик
Миниатюрный динамик 4 Ом или 8 Ом
коммутаторы SPST обычно открывают мгновенный переключатель (сброс )
Миниатюрный тумблер SPST (отключение зуммера)
Миниатюрный тумблер DPST (декодирование/обход)

Конфигурация

Плата работает от переменного или постоянного тока.Соединения на плате E3 и E4 предназначены для соединений + и -, особенно если используется источник постоянного тока. В этом случае не используйте выпрямитель CR7. В списке деталей есть настенный трансформатор постоянного тока (очевидно, трансформатор переменного тока со встроенными выпрямителями), доступный менее чем за 2 доллара. Для тех, у кого уже есть настенный трансформатор переменного тока от старого зарядного устройства для батарей калькулятора, используйте микросхему мостового выпрямителя (DB101, VM08 и т. д.) или 4 отдельных силовых выпрямителя (1N4001 или аналогичный) для CR7. Вход переменного тока поступает на разъемы платы E1 и E2.

С помощью реле К1 можно переключать что-то кроме динамика. E5 и E6 настроены для работы с динамиком. Удаление перемычки отделяет реле от аудиовхода.

Выход с фиксацией используется для управления зуммером или драйвером с открытым коллектором для другой логической схемы.

Несмотря на то, что большинство радиостанций имеют достаточный уровень звука для срабатывания декодера, могут быть некоторые приложения, в которых декодер должен принимать низкий уровень звука. Поскольку входной импеданс декодера намного выше, чем обычное выходное сопротивление 8 Ом большинства радиоприемников, согласующий трансформатор звука 8-1000 Ом делает декодер более чувствительным.

Проверка и эксплуатация

Перед установкой интегральных схем лучше всего проверить блок питания. Предполагая, что используется печатная плата, установите U4, C1, C2 и дополнительно CR7. Подайте питание на цепь и измерьте напряжение на C2. Это напряжение должно быть между 4,5 и 5,5 вольт. Установите остальные компоненты, обращая внимание на полярность диодов с CR 1 по CR6.

Протестируйте декодер, подключив его к радиостанции, с которой он будет использоваться, и используйте вторую радиостанцию ​​(разумеется, с фиктивной радиочастотной нагрузкой) для генерации тонов.Те, у кого есть радиостанция ICOM IC-2AT или аналогичная, могут подключить декодер к разъему для наушников, а разъем антенны к фиктивной нагрузке. Эти HT производят тоны DTMF в цепи громкоговорителя в то же время, когда они передаются. Подключите вольтметр к TP2 на плате. Без каких-либо входящих тонов показание должно быть меньше половины вольта. Уменьшите звук на декодер и передайте любую цифру DTMF. Медленно увеличивайте громкость. В какой-то момент вольтметр должен подскочить примерно до 4,5 или 5 вольт. Этот объем является минимально необходимым для срабатывания декодера.Попробуйте увеличить громкость и посмотрите, есть ли точка, в которой вольтметр снова падает ниже 2 вольт. Это верхний предел. Установите регулятор громкости где-то между двумя пределами и переместите вольтметр на контакт 1 разъема для программирования. Нажмите «1» на клавиатуре DTMF. Когда цифра нажата, напряжение на контакте I должно подняться с менее половины вольта до более 4,5 вольт. Проверьте контакт 2, отправив 2, и так далее через контакт 9. Если установка оснащена 16-значной клавиатурой, проверьте контакт 11, удерживая нажатой цифру D.

Общий эксплуатационный тест

Запрограммируйте заголовок на длинный тон и последовательность из 4 цифр и установите потенциометр R9 примерно в среднее положение.Попробуйте последовательность или длинный тон. Если лампа вызова горит, но динамик не включается, проверьте соединения U6 и K 1. Если лампа вызова вообще не загорается, проверьте программирование заголовка, проводку U5 и полярность CR1–CR6.

Выводы

Декодер 4 + 1 представляет собой универсальную схему, которая обеспечивает пользователю тишину и покой без угрозы пропустить личный или экстренный вызов. Он идеально подходит для офиса или других мест, где нежелательно слышать разговоры на занятом канале.


Рис. 3. Расположение деталей на печатной плате декодера 4 + 1.

Каталожные номера

  1. Touch-Tone является товарным знаком Bell. Справочную информацию о кодировании и декодировании DTMF см.: Nassar, Dale: “DTMF Encoding and Decoding”, Radio-Electronics, декабрь 1986 г., с. 65.
  2. Пакет: «Декодер тона с задержкой по времени», QST, февраль 1977 г., стр. 16.
  3. Декодер тонального набора HD-1530, Heathkit Electronics, Benton Harbour M1. Auto-Kall AK-10, Matron Electronics, 695 Вт.21-я авеню, Юджин ИЛИ 97405.
  4. Комплект аварийного декодера Time-DTMF (//LJM2RK, также называемый STORM-ALERT), Metheny Corporation, 204 Sunrise Drive, Madison IN 47250.
  5. Платы для ПК
  6. можно приобрести в Midland Technologies, 34374 East Frontage Road, Bozeman MT 59715, тел. 406-586-1i90.
  7. Kraman: «Однотональные декодеры», Ham Radio, август 1978 г., стр. 70.
  8. Nowland, Harold C. W8ZXH и Briggs, Stan W8MPD: «Декодер тонального оповещения», Ham Radio, ноябрь 1978 г., стр. 64.
  9. Wetzel: «Монитор тонального оповещения», Ham Radio, август 1980 г., стр. 24.
  10. Джагер, Фрэнк WA9SQN: «Стандартная система звукового оповещения ARES», QST, январь 1981 г., стр. 24.
  11. Таннер, TC VE3BBI: “The London Tone Alert”, QST, ноябрь 1983 г., стр. 35.
  12. Кумец, Рональд П. Младший N2ENW: «Декодер DTMF-64 2», QEX, апрель 1987 г., стр. 4.
  13. Таннер, Т. Сед VE3BBI: «Миниатюрный, упрощенный лондонский тон, Ален», QST, февраль 1987 г., стр. 30.

WA3LTJ, Эндрю Митц.

Опосредованное светом открытие наноразмерной организации поверхности и сетей взаимодействия межклеточных рецепторов

Реагенты

Все химические вещества были приобретены у Merck, если не указано иное. SOG в форме NHS-функционализированного тиородамина (кат.: AD-Thio12-41) и метиленового синего, функционализированного азидом (кат.: AD-MB2-31), были приобретены у ATTO-TEC GmbH (Зиген, Германия). Биоцитин-гидразид был приобретен у Pitsch Nucleic Acids AG (Stein am Rhein, Швейцария). Для экспериментов с LUX-MS использовали следующие антитела: контрольное антитело изотипа IgG мыши (Invitrogen, кат. Химерное моноклональное антитело против CD38, любезно предоставленное Centrose LLC, моноклональное антитело против человеческого CD54 мышиного IgG1, клон HCD54 (BioLegend, кат. Моноклональное антитело мыши IgG2 CD220, клон B6.220 (BioLegend, кат.: 352602).

Культура клеток

Все химические вещества для культивирования клеток были приобретены у ThermoFisher Scientific, если не указано иное. Все остальные химикаты были приобретены у Sigma-Aldrich, если не указано иное. Клеточные линии были приобретены в ATCC и выращены при 37°C и 5% CO 2 окружающей среды. Линия клеток В-лимфомы пациента SUDHL6 (ATCC, CRL-2959) и линия клеток В-лимфомы Беркитта Ramos (ATCC, CRL-1596, любезно предоставленная Майклом Ретом) выращивали в среде Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640. с 1.5  мМ GlutaMAX, 1% пенициллин-стрептомицин и 10% эмбриональная бычья сыворотка. Клеточная линия промиелоцитарного лейкоза пациентов HL60 (ATCC CCL-240) выращивалась в RPMI с 1,5 мМ GlutaMAX (Gibco), 1% пенициллином-стрептомицином (Gibco) и 10% человеческой сывороткой (Chemie Brunschwig). Мышиная дендритная клеточная линия MutuDC1940 86 была любезно предоставлена ​​Хансом Ача-Орбеа (кафедра биохимии, Лозаннский университет, Швейцария) и была культивирована и изотопно помечена в модифицированной среде Дульбекко Искова для SILAC (Thermo, кат.: 88367) с добавлением глюкозы. (окончание: 4.5 г/л), l-Arg- 13 C 6 15 N 4 (конечная: 42 мкг/мл), l-Lys- 13 C – 8 1 2 (окончательная концентрация: 73 мкг/мл), 1,5 мМ GlutaMAX, 10 мМ HEPES, 50 мкМ β-меркаптоэтанола, 1 % пенициллин-стрептомицина, заменимых аминокислот и 10 % диализированной эмбриональной бычьей сыворотки.

Мыши

Самок или самцов мышей в возрасте от шести до шестнадцати недель использовали для экспериментов на животных, описанных в этом исследовании. Мыши CD45.1 P14 с Т-клеточными рецепторами на CD8 + Т-клетки, специфичные к эпитопу гликопротеина GP33-41 LCMV 71 , скрещенные с мышами Nur77-GFP 87 (P14 Nur77-GFP), были выведены в ETH Центр Феномики при цикле свет-темнота 12 ч, температуре окружающей среды 22 °C ± 2 °C и влажности 55% ± 10%.Всех животных перед использованием разводили и содержали в условиях, свободных от специфических патогенов. Все эксперименты на животных проводились в соответствии с институциональной политикой и швейцарскими федеральными нормами, в соответствии с руководящими принципами и были одобрены ветеринарным управлением кантона Цюрих (разрешение на эксперименты на животных: 115/2017).

Источники света

Реакции фотоокисления контролировали с помощью прожекторов Precision LED, управляемых модулем управления освещением BioLED (BLS-PL04-US) в режиме непрерывной волны (Mightex Systems, Плезантон, США).Для применений LUX-MS с тиородамином в качестве SOG использовались прожекторы BLS-PLS-0590-030-05-S для освещения на длине волны 590 нм с интенсивностью света 4,6 мВт/см 2 . Для применений LUX-MS с метиленовым синим в качестве SOG использовались прожекторы BLS-PLS-0656-030-07-S для освещения на длине волны 656 нм с интенсивностью света 14,9 мВт/см 2 .

Светоконтролируемое производство SO

Тиородамин SOG смешивали с 1  мкМ Singlet Oxygen Sensor Green (SOSG, Invitrogen, кат.: S36002) в фосфатно-солевом буфере при увеличении соотношения D 2 O/H 2 O и освещали на рабочем расстоянии 30 см прожекторами Precision LED с длиной волны 590 нм в течение 0–15 мин.Флуоресценцию фотоокисленного SOSG контролировали с помощью многорежимного планшетного ридера Synergy HT (BioTek) при возбуждении 485 ± 20 нм и эмиссии 528 ± 20 нм. Количественные значения интенсивности были стерты и нормализованы к неосвещенному контролю с использованием индивидуального R-скрипта.

Открытие и настройка фотоиндуцированных участков мечения белков

Голотрансферрин человека (Sigma, кат.: T4132) соединили с тиородамином SOG при молярном соотношении лиганда к SOG 1:1 и очистили с использованием 7-kDa ZebaSpin Колонки (Thermo, кат. : 89882) согласно рекомендациям производителя.Связанный с SOG трансферрин в D 2 фосфатно-солевом буфере (PBS) на основе O, содержащем 0 или 5 мМ биоцитин-гидразида, либо освещали прожекторами Precision LED с длиной волны 590 нм в течение 15 минут, либо оставляли в темноте. Буфер дополняли катализатором 50 мМ 2-(аминометил)имидазолдигидрохлорида на 50 мин для катализа образования гидразона. Обработанные белки расщепляли в течение ночи при 37 °C с использованием трипсина для секвенирования (Promega, кат.: V511C) при соотношении ферментов к белкам 1:100. Пептиды очищали от C18 с использованием колонок UltraMicroSpin 5–60 мкг (The Nest Group, кат.: SEMSS18V) в соответствии с инструкциями производителя и подвергали масс-спектрометрическому анализу с использованием трибридного масс-спектрометра Orbitrap Fusion (Thermo Scientific) в режиме сбора данных, зависящего от данных (DDA). режим с массовым разрешением 120 000 и 30 000 на уровне предшественника и фрагмента соответственно (подробности см. Ниже).Полученные необработанные файлы освещенных образцов были подвергнуты открытому поиску модификаций с использованием MSfragger (v.201) 88 и Crystal-C 89 в рамках конвейера FragPipe (v.9.4) с использованием стандартных настроек и проверенной SwissProt базы данных белков человека. (загружено в июне 2014 г.), содержащее распространенные загрязнители. Наблюдаемые модификации были реализованы в последующем закрытом поиске всех полученных образцов с использованием Comet (v.2015.01) в рамках Trans Proteomic Pipeline v.4.7 (SPC/ISB Seattle) в качестве вариабельной модификации (карбонилирование His, Cys и Trp; однократное окисление Met, Trp и Tyr; двойное окисление Met, Trp и His; тройное окисление Met, Cys и Trp) для идентификации полностью триптических пептидов с максимум двумя пропущенными сайтами расщепления и максимум пятью вариабельными модификациями.Таким образом, допуск по массе предшественника и фрагмента был установлен на 20 частей на миллион и 0,02 Да соответственно. Пептиды были количественно определены путем интеграции хроматографических следов с использованием Progenesis QI v.4.0 (Nonlinear Dynamics) и отфильтрованы до уровня ложных обнаружений <1%. Пептиды трансферрина были отнесены к фиктивным белкам, представляющим собой немодифицированные или одиночные типы модификации. В вычислительной среде R (v.3.4.0) кратные изменения содержания белка (выраженные в log2) рассчитывались с использованием линейной модели со смешанными эффектами и проверялись на статистическую значимость с использованием двустороннего теста t с соответствующей степенью достоверности. свобода в пакете R MSstats (v.3.8.6) 90 . Типы модификаций с кратностью изменения содержания >1,5 при освещении и скорректированным значением p <0,05 считались продуктами фотоокисления, индуцированного светом. Аналогичным образом модификации аминокислот со значительно сниженной светозависимой продукцией в присутствии биотин-гидразида (значение p <0,1) считались модификациями аминокислот, реагирующими с гидразидом. Всего использовали три биологически независимых повтора для каждого условия.

Для специфичной для аминокислот настройки сайтов мечения белков с помощью различных буферных условий голотрансферрин человека (Sigma, кат. соотношение к белку 1:50.Пептиды были обессолены с помощью колонки Waters Sep-Pak C18 50  мг (Waters, кат.: WAT054955) в соответствии с инструкциями производителя и высушены в концентраторе SpeedVac (Thermo Scientific). Пептиды ресуспендировали либо в PBS, либо в 50% PBS на основе D 2 O, либо в 100% PBS на основе D 2 O до конечной концентрации пептида 10 мкМ, а затем добавляли тиородамин SOG, погашенный Tris, при молярной концентрации пептида к -Соотношение 1:1. Образцы либо освещали прожекторами Precision LED с длиной волны 590 нм в течение 15 мин, либо оставляли в темноте.Все образцы были дополнены PBS или PBS на основе D 2 O для достижения конечного 50% D2O и инкубированы в течение 2 часов в темноте. Пептиды очищали по C18 с использованием 7–70 мкг колонок BioPureSPNmini (The Nest Group, кат. : HUM S18V) в соответствии с инструкциями производителя и сушили в концентраторе SpeedVac. Модифицированные пептиды трансферрина подвергали масс-спектрометрическому анализу с использованием масс-спектрометра Orbitrap Q Exactive HF (Thermo Scientific) в режиме DDA с массовым разрешением 60 000 и 15 000 на уровне предшественника и фрагмента соответственно (подробности см. ниже).Полученные необработанные файлы облученных образцов были подвергнуты закрытому поиску с использованием SEQUEST HT и Multi Peptide Search в Proteome Discoverer (v.2.5.0.400, Thermo Scientific) и в проверенной SwissProt базе данных белков человека (загружена в июне 2014 г.), содержащей распространенные загрязнители. Модификации были установлены, как указано выше, а допуск по массе предшественника и фрагмента был установлен на 10 частей на миллион и 0,02 Да соответственно. Безметочную количественную оценку проводили на уровне предшественников с использованием только уникальных пептидов. Как и выше, трансферриновые пептиды были отнесены к фиктивным белкам, представляющим собой немодифицированные типы или типы с одной модификацией. В вычислительной среде R (v.3.4.0) кратные изменения содержания белка (выраженные в log2) рассчитывались с использованием линейной модели со смешанными эффектами и проверялись на статистическую значимость с использованием двустороннего t-критерия с соответствующей степенью свободы. в пакете R MSstats (v.3.8.6) 90 и визуализировали в виде точечной диаграммы по всем условиям с помощью R. Всего для каждого условия готовили один биологически независимый образец и трижды измеряли масс-спектрометрией.

Сбор и очистка РВМС человека

Лейкоцитарная пленка была получена от здоровых доноров, предоставленных Службой переливания крови Цюриха.Для выделения PBMC образцы лейкоцитарной пленки человека разводили 1:1 в PBS (Gibco) и выделяли мононуклеарные клетки с градиентом плотности Histopaque-1077 (Sigma-Aldrich) в соответствии с инструкциями производителя. РВМС на границе раздела собирали, один раз промывали в PBS и ресуспендировали в среде до дальнейшей обработки.

Получение конъюгатов антитело-SOG и HRP

Для конъюгатов антитело-SOG 10 мкг антитела на образец очищали с использованием 7-кДа колонок для обессоливания ZebaSpin (Thermo Scientific, кат. : 89882), следуя рекомендациям производителя, и элюировали 10 мМ бикарбонат натрия в PBS, pH 8.3. Антитело было связано с тиородамином SOG при молярном соотношении антитела к SOG 1:5, очищено с использованием колонок ZebaSpin 7 кДа и немедленно использовано для экспериментов LUX-MS.

Для конъюгатов антитело-HRP 10 мкг антитела к CD20 (Invitrogen, клон 2H7) на образец очищали с использованием колонок для обессоливания ZebaSpin 7 кДа (Thermo Scientific, кат.: 89882) в соответствии с рекомендациями производителя и элюировали 0,2 М карбонатом -бикарбонатный буфер, рН 9,4. Очищенное антитело к CD20 конъюгировали с предварительно активированным аминореактивным HRP (Thermo Scientific™ EZ-Link™ Plus Activated Peroxidase, Thermo Scientific, кат.: 31489) для 1.5 ч в 0,2 М карбонатно-бикарбонатном буфере, рН 9,4, при соотношении антител к ПХ 1:10. Реакционную смесь очищали с помощью колонок для обессоливания ZebaSpin 7 кДа, элюировали PBS, pH 7,2, и далее обрабатывали в соответствии с руководством производителя. Конъюгаты анти-CD20-HRP сразу же использовали для эксперимента по мечению на основе HRP.

Для конъюгатов CG1-HRP предварительно активированную аминореактивную HRP (Thermo Scientific™ EZ-Link™ Plus Activated Peroxidase, Thermo Scientific, кат.: 31489) соединяли с аминосодержащим сердечным гликозидом CG1 (любезно предоставленным Centrose LLC, Мэдисон, Висконсин) за 1.5 ч в 0,2 М карбонатно-бикарбонатном буфере, рН 9,4, с отношением связывания HRP и CG1, равным 1:10. Конъюгат HRP-CG1 был повторно забуферен в PBS, pH 7,2, с использованием колонок для обессоливания ZebaSpin 7 кДа, и далее обработан в соответствии с рекомендациями производителя. Конъюгаты HRP-CG1 очищали и отделяли от свободного CG1 с использованием обессоливающих колонок ZebaSpin 7 кДа (дважды) и фильтров с отсечкой по молекулярной массе 10 кДа (Merck, кат.: UFC501024) и впоследствии использовали для скрининга хемочувствительности отдельных клеток.

Расчет степени мечения (DOL)

Среднее DOL антител, меченных тиородаминовыми зондами SOG, определяли путем измерения поглощения, как описано ранее 12 . В частности, с помощью спектрофотометра NanoDrop 2000 (Thermo Scientific) измеряли поглощение конъюгатов (Conj), антител (Ab) и свободного тиородамина (SOG) как при 280 нм, так и при 582 нм. Далее были рассчитаны следующие отношения; Соотношение AB AB = A582 AB / A280 AB и соотношение SOG = A582 = A582 SOG / A280 SOG .Затем измеряли поглощение конъюгата антитело-SOG с получением A280 Conj и A582 Conj . Фактическая концентрация антитела и SOG, содержащаяся в сопряженном растворе, определялась следующим образом: [AB] = (A280 CONG – (A582 AC – Соотношение AB × A280 CONG ) / (Соотношение SOG – Соотношение ab )) / ε ε

ε ab

ab , [sog] = (A582 AC – Соотношение ab × A280 AB ) / ε SOG . Таким образом, следующие коэффициенты вымирания ( ε ) были использованы: ε AB = 210 000 м -1 см -1 , ε

SOG = 110 000 м -1 см -1 . Наконец, определяли DOL: DOL = [SOG]/[Ab]. Для каждого конъюгата в вычислительной среде R рассчитывали средний DOL шести повторных измерений. Та же процедура была применена для измерения DOL HRP, меченного CG1, путем измерения поглощения как при 403 нм, так и при 299 нм, а также с использованием ε HRP   = 100 000   M −1   см7   8 и 5   см CG1  = 5623 M −1  см −1 .

Картирование микроокружения рецептора под контролем антител

Для LUX-MS на основе SOG 20 × 10 6 клеток инкубировали с 10 мкг SOG-связанного антитела (конечная концентрация 5 мкг/мл) в течение 30 мин при 4 °C в темный, чтобы свести к минимуму окисление, вызванное фоновым светом. Клетки промывали ледяным PBS, ресуспендировали в охлажденном фотоокислительном буфере (5 мМ биоцитин-гидразида в PBS на основе D 2 O, pH 7,5, если не указано иное) и освещали на рабочем расстоянии 20 см с помощью 590-нм прецизионные светодиодные прожекторы или оставленные в темноте. Для временной кривой LUX-MS анти-CD20 анализировали один и три биологически независимых образца для каждой временной точки освещения и контроля без освещения соответственно. Для анти-CD20 LUX-MS анализировали два и три биологически независимых образца в условиях меченого и немеченого соответственно. Для всех других LUX-MS, управляемых антителами, были проанализированы три биологически независимых образца как для меченых, так и для немеченых условий. Клетки осаждали центрифугированием и ресуспендировали в охлажденном буфере для мечения (5 мМ биоцитин-гидразид и 50 мМ 2-(аминометил)имидазолдигидрохлорид в PBS, pH 6.0) в течение 50 мин при 4 °С в темноте. Для проточного цитометрического анализа биотинилирования клеточной поверхности клетки тщательно промывали PBS и окрашивали NeutrAvidin Protein DyLight 488 (Invitrogen, кат.: 22832) 1:200 в течение 20 минут перед анализом с использованием проточного цитометра Accuri C6 (BD Biosciences) и FlowJo ( v.10.07). Таким образом, модель FSC / SSC немеченого состояния использовалась для выбора живых клеток (дополнительная рис. 12). Для анализа LUX-MS клетки тщательно промывали PBS, быстро замораживали в виде осадка клеток в жидком азоте и хранили при температуре -80°C до дальнейшей обработки.

Для мечения на основе фермента HRP, 20 × 10 6 клеток Ramos собирали на образец и дважды промывали охлажденным льдом PBS. Клетки всех состояний инкубировали с CD20-HRP-конъюгатом в 1 мл PBS в течение 30 мин при 4 °C. После инкубации клетки промывали один раз ледяным PBS и один раз PBS комнатной температуры (КТ). После этого клетки ресуспендировали при комнатной температуре в PBS, содержащем 0,1 мМ биотин-тирамида (Pitsch Nucleic Acids AG). Реакцию мечения близости на основе HRP начинали добавлением H 2 O 2 (конечная концентрация 1 мМ) к условиям мечения CD20.Для контрольных образцов использовали буфер Mock на основе PBS (без H 2 O 2 ). Через 1 мин реакцию останавливали буфером для гашения, содержащим 10 мМ NaN 3 , 10 мМ аскорбата натрия и каталазу 1:10 000 (Sigma-Aldrich, C30) в ледяном PBS, после чего немедленно следовали три промывания с гашением. буфер и две промывки ледяным PBS. Клетки быстро замораживали в виде клеточных осадков в жидком азоте и хранили при температуре -80 °C до дальнейшей обработки. Всего использовали три биологически независимых повтора для каждого условия.

Синтез сердечного гликозида CG1, связанного с SOG

Первичный аминосодержащий сердечный гликозид CG1 был любезно предоставлен Centrose LLC (Madison, Wisconsin). К раствору CG1 2 (5 мг, 0,0081 ммоль) и эфиров тиоламина-NHS 1 (5,7 мг, 0,0081 ммоль) в N , N -диметилформамид (1 мл) был добавлен ET 3 N (0,011  мл, 0,08  ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа, и образование продукта подтверждали с помощью ЖХ-МС.Конечный продукт CG1-SOG 3 очищали препаративной ОФ-ВЭЖХ на колонке Waters Eclipse XDB (C18, 250 × 21,2 мм, 7 мкм) с градиентом 5–50% ACN/H 2 O + 0,1 % TFA в пяти объемах колонки. Продукт имел чистоту >95%, судя по данным ВЭЖХ с обращенной фазой и HR-MS. HR-ESI-MS: m/z (M + H + ) 999,4938 (расчетная масса = 999,4936) (дополнительный рисунок 9).

Скрининг на хемочувствительность одиночных клеток

Одноклеточную суспензию клеток HL60 высевали (2000 клеток/лунку с 50 мкл/лунку) в планшеты CellCarrier 384 Ultra с прозрачным дном, обработанные тканевой культурой (PerkinElmer), содержащие противоопухолевые агентов (см. ниже) и инкубировали в течение ночи в течение 24 часов при 37 °C и 5% CO 2 .Количество клеток и жизнеспособность определяли с использованием счетчика клеток Countess II (Thermo Fisher). Затем клетки обрабатывали библиотекой для скрининга лекарственных средств, состоящей из трех отдельных соединений (CG1, CG1-SOG и CG1-HRP) в четырех концентрациях, каждая с десятью техническими повторами, которые распределяли в аналитические планшеты с помощью устройства обработки жидкости Echo (Labcyte). Анализ был остановлен путем фиксации и пермеабилизации клеток 20 мкл/лунку раствора, содержащего 0,5% (вес/объем) формальдегида, 0,05% (объем/объем) Triton X-100, 10 мМ натрия (мета) периодата и 75 мМ моногидрохлорида L-лизина после удаления культуральной среды. После 20-минутной инкубации при комнатной температуре среду, содержащую фиксатор, отсасывали с помощью устройства для промывки планшетов HydroSpeed ​​(Tecan). Затем клетки блокировали (50 мкл/лунку) PBS с добавлением 5% фетальной бычьей сыворотки (FBS, Gibco) и хранили до иммуноокрашивания. Для ядерного обнаружения использовали 2  ​​мкг/мл DAPI (4′,6-диамидино-2-фенилиндол, Biolegend) в PBS. Клетки дополнительно окрашивали антителом Alexa Fluor 647 против человеческого CD33 (клон P67.6) в разведении 1:20. Перед окрашиванием удаляли блокирующий раствор, добавляли 20 мкл/лунку смеси антитело/DAPI и инкубировали планшет в течение 1 ч в темноте (при комнатной температуре).Затем раствор для окрашивания удаляли и добавляли PBS (70 мкл/лунку) перед визуализацией. 384-луночный планшет визуализировали с помощью автоматического конфокального микроскопа с вращающимся диском Opera Phenix (PerkinElmer) при увеличении × 20 с неперекрывающимися изображениями 5 × 5 , покрывающими всю поверхность лунки. Каждая лунка планшета полностью отображалась в каналах светлого поля (650–760 нм), сигнала DAPI/Nuclear (435–480 нм) и сигнала APC/Red (650–760 нм). Изображения Raw.tiff использовались для анализа изображений отдельных клеток в CellProfiler (v.2) 91 . Обнаружение одиночных клеток и ядерную сегментацию выполняли с максимальной пороговой корреляцией на канале DAPI. Для извлечения цитоплазматического измерения клеточные очертания оценивали по круговому расширению на 10 пикселей вокруг ядра. Чтобы измерить фон локальной интенсивности вокруг каждой отдельной клетки, было выполнено второе большее расширение на 30 пикселей. Стандартные значения интенсивности флуоресценции CellProfiler были извлечены, преобразованы в log10 и нормализованы относительно локального клеточного фона 92 .

Идентификация поверхностных структур, нацеленных на низкомолекулярные лекарственные средства

Пятьдесят миллионов клеток инкубировали с 0–10 мкМ CG1-SOG (10 мкМ для эксперимента LUX-MS) в течение 30 минут при 4 °C в темноте, чтобы свести к минимуму фоновое освещение индуцированное окисление. Клетки промывали ледяным PBS, ресуспендировали в охлажденном буфере для фотоокисления и освещали на рабочем расстоянии 20  см прожекторами Precision LED с длиной волны 590 нм или оставляли в темноте (по три биологически независимых образца в каждом). Клетки осаждали центрифугированием и ресуспендировали в охлажденном буфере для мечения в течение 50 мин при 4°С в темноте.Для проточного цитометрического анализа биотинилирования клеточной поверхности клетки тщательно промывали PBS и окрашивали NeutrAvidin Protein DyLight 488 (Invitrogen, кат.: 22832) 1:200 в течение 20 минут перед анализом с использованием проточного цитометра Accuri C6 (BD Biosciences) и FlowJo ( v.10.07). Таким образом, модель FSC / SSC немеченого состояния использовалась для выбора живых клеток (дополнительная рис. 12). Для анализа LUX-MS клетки тщательно промывали PBS, быстро замораживали в виде осадка клеток в жидком азоте и хранили при температуре -80°C до дальнейшей обработки.

Открытие межклеточных поверхностных сигнальных доменов с помощью биомолекул

Человеческий пептидный гормон инсулин и голотрансферрин гликопротеина были связаны с тиородамином SOG при молярном соотношении лиганд:SOG 1:1 и 1:13, соответственно, в соответствии с рекомендациями производителя . Конструкции лиганда, связанного с SOG, хранили при 4 °C и немедленно использовали. Двадцать миллионов клеток инкубировали с 1 мкМ инсулина-SOG или 75 нМ трансферрина-SOG в течение 10 минут при 4 °C в темноте, чтобы свести к минимуму вызванное фоновым светом окисление.Клетки промывали ледяным PBS, ресуспендировали в охлажденном буфере для фотоокисления и освещали на рабочем расстоянии 20  см прожекторами Precision LED с длиной волны 590 нм в течение 5  мин или оставляли в темноте (по три биологически независимых образца). Клетки осаждали центрифугированием и ресуспендировали в охлажденном буфере для мечения в течение 50 мин при 4°С в темноте. Клетки тщательно промывали PBS, быстро замораживали в виде осадка клеток в жидком азоте и хранили при -80°C до дальнейшей обработки.

Синтез и характеристика SOG-связанного антимикробного танатина

Производное танатина было любезно предоставлено группой Джона Робинсона (Цюрихский университет, Швейцария) и (6.0 мг, 0,0023 ммоль) растворяли в 500 мкл H 2 O. Аскорбат натрия (0,1 M, 30 мкл, 0,0022 ммоль) и метиленовый синий, функционализированный азидом, в виде SOG (0,5 мг, 0,0009 SO ммоль) в 1 4 (0,1 M, 30 мкл, 0,003 ммоль). Через 15 мин реакционную смесь вводили непосредственно в колонку препаративной ВЭЖХ C18 с градиентом 10–40% ACN/H 2 O (0,1% TFA). Чистота соединения танатин-SOG была подтверждена анализом UPLC, а идентичность подтверждена HR-ESI с расчетной массой 652.1353 (M + 6H) 6+ и измеренное значение m/z 652,1360 (M + 6H) 6+ (дополнительный рисунок 10).

Полнопротеомная и активируемая светом деконволюция мишени в прокариотических системах

Клетки E. coli (Migula) Castellani and Chalmers (ATCC: 25922) инкубировали с 3 мкМ Thanatin-SOG в присутствии или в отсутствие 30 мкМ неконъюгированного Производное танатина в течение 30 минут при 37 °C в темноте, чтобы свести к минимуму окисление, вызванное фоновым светом. Клетки промывали ледяным PBS, ресуспендировали в охлажденном буфере для фотоокисления и освещали на рабочем расстоянии 20  см прожекторами Precision LED с длиной волны 659 нм в течение 5  мин или оставляли в темноте (три биологически независимых образца в каждом). Клетки осаждали центрифугированием и ресуспендировали в охлажденном буфере для мечения в течение 50 мин при 4°С в темноте. Клетки тщательно промывали PBS, быстро замораживали в виде осадка клеток в жидком азоте и хранили при -80°C до дальнейшей обработки.

Генерация и характеристика SOG-связанных бактериофагов

Грамположительные L. monocytogenes специфические бактериофаги были связаны с тиородамином SOG путем смешивания 1,2 мл раствора фага Listeria A500 (титр 10 10) (БОЕ)/мл) с 60 мкл 0.2 М NaHCO 3 и 30 мкл 0,15 мМ NHS-функционализированного тиородамина. Смесь инкубировали при комнатной температуре в темноте в течение 1 часа. Комплекс фаг-СОГ осаждали добавлением 1/5 объема 20% ПЭГ/2,5 М NaCl и инкубировали в течение 2 ч при 4 °С. Супернатант отбрасывали для удаления непрореагировавших молекул SOG, а осадок красителя M13 ресуспендировали в 1  мл буфера SM и подвергали определению БОЕ. Для анализа БОЕ 990 мкл ночных культур клеток L. monocytogenes смешивали с 10 мкл серийно разведенного исходного раствора фага (в буфере SM). Затем культуру смешивали и встряхивали с 5 мл расплавленного мягкого агара 1/2 BHI (50°C) и выливали на чашки с твердым агаром. Чашки с затвердевшим агаром инкубировали при 30°C в течение дня и определяли титр фага на основе количества наблюдаемых бляшек.

Исследование поверхности клеток хозяина, нацеленных на вирус, под контролем бактериофагов МВД 10 в течение 30 мин при 4°С в темноте.На образец бактерии, соответствующие 3,5 × 10

9 колониеобразующих единиц (КОЕ), промывали ледяным PBS, ресуспендировали в охлажденном буфере для фотоокисления и освещали на рабочем расстоянии 20 см прецизионным светодиодом с длиной волны 590 нм. освещали прожекторами в течение 15 мин или оставляли в темноте (по три биологически независимых образца). Клетки осаждали центрифугированием и ресуспендировали в охлажденном буфере для мечения в течение 50 мин при 4°С в темноте. Для проточного цитометрического анализа биотинилирования клеточной поверхности клетки тщательно промывали PBS и окрашивали NeutrAvidin Protein DyLight 488 1:50 в течение 20 минут перед анализом с использованием проточного цитометра Accuri C6 (BD Biosciences) с боковым рассеянием (высота), установленным на 10 000. как предел обнаружения и FlowJo (v.10.07). Таким образом, модель FSC / SSC немеченого состояния использовалась для выбора живых клеток (дополнительная рис. 12). Для анализа LUX-MS клетки тщательно промывали PBS, быстро замораживали в виде осадка клеток в жидком азоте и хранили при температуре -80°C до дальнейшей обработки.

Генная инженерия и микроскопическая проверка идентифицированных поверхностных белков

L. monocytogenes

Положительный контроль поверхностных белков ), и их нативные промоторы клонировали в векторы интеграции pPL2 67 с меткой HA с использованием метода Гибсона, как описано ранее 93 .Пустой вектор pPL2, три вектора, содержащие вставку pPL2( inlA -HA), pPL2( rae1 -HA) и pPL2( r383 -HA), трансформировали в электрокомпетентные клетки L. monocytogenes 1042. Праймеры 5′-GTCAAAAACATACGCTCTTATC-3′ и 5′-ACATAATCAGTCCAAAGTAGATGC-3′ использовали для подтверждения интеграции pPL2 в бактериальный геном. Для иммуноокрашивания поверхности L. monocytogenes WT и мутантных штаммов соответствующие клетки выращивали до средней логарифмической фазы, промывали PBS и затем блокировали в 1% BSA/PBS.Затем клетки промывали и окрашивали моноклональным антителом НА, конъюгированным с Alexa Fluor 555 (ThermoFisher Scientific), в разведении 1:100 в течение 30 мин. После окончательной промывки клеточные суспензии наносили на предметное стекло и визуализировали с помощью конфокальной лазерной сканирующей микроскопии.

Синтез и характеристика SOG-связанного иммуногенного пептида gp33

Пептид LCMV gp33-41 (gp33; KAVYNFATM) был приобретен у NeoMPS. Пептид gp33 (1,0 мг, 1,0 мкмоль, 1 экв.) и NHS-тиородамин (1.4 мг, 2,0 мкмоль, 2 экв.) инкубировали при комнатной температуре в течение 90 мин в PBS при рН 8,3. Реакционную смесь очищали непосредственно препаративной ОФ-ВЭЖХ на приборе Jasco с использованием колонки YMC C18 (5 мкм, внутренний диаметр 20 мм × 250 мм) при комнатной температуре при скорости потока 10 мл/мин с одновременным контролем элюента при 220, 254 и 301 нм. В качестве элюента использовали воду Milli-Q с 0,1% ТФУ (растворитель А) и градиент 5–15% АЦН с 0,1% ТФУ (растворитель В) в течение 5 минут и от 15 до 75% растворителя В в течение 30 минут. Фракции, содержащие чистый продукт, объединяли и лиофилизировали с получением gp33-SOG 2 в виде фиолетового твердого вещества.Чистоту и идентичность проверяли с помощью аналитической ОФ-ВЭЖХ и ВР-МС. HR-MS (ESI): рассчитан для C 106 H 133 N 17 O 17 S 17 S 3 S 3 2+ 2+ [M] 2+ : 1005.9608, Найдено: 1005.9589 (Дополнительные данные Рис. 11).

Функциональная оценка gp33, связанного с SOG

CD8 + Т-клетки выделяли из разрушенных селезенки и паховых лимфатических узлов мышей P14 Nur77-GFP с использованием набора EasySep™ Mouse naive CD8 + T-cell Isolation Kit (StemCell, Гренобль, Франция) в соответствии с инструкциями производителя. Селезенки и лимфатические узлы были разрушены с помощью 70-микрометрового клеточного фильтра. Меченые изотопами ДК мыши инкубировали без соединения или с очищенным gp33 в концентрации 1 мкг/мл, не содержащим (gp33), одним (gp33-SOG) или двумя (gp33-SOG 2 ) SOG в течение 1 часа. 10-кратный избыток остро выделенных CD8 + Т-клеток добавляли путем центрифугирования и клетки совместно инкубировали в течение 3 ч в присутствии интерлейкина-2. Клетки тщательно промывали ледяным PBS, добавляли охлажденный буфер для фотоокисления и взаимодействующие клетки освещали на рабочем расстоянии 20 см прожекторами Precision LED с длиной волны 590 нм в течение 15 мин.Клетки осаждали центрифугированием и ресуспендировали в охлажденном буфере для мечения в течение 50 мин при 4°С в темноте. Клетки тщательно промывали PBS и оценивали на активацию Т-клеток и специфичное для типа клеток биотинилирование поверхности с использованием проточной цитометрии.

Активируемое светом мечение функциональных иммуносинапсов in situ

На образец десять миллионов меченных изотопами мышиных ДК предварительно активировали с помощью 0,5 мкг/мл CpG (Microsynth, Balgach, Швейцария) в течение ночи. Промытые PBS DC затем инкубировали с 1 мкг/мл gp33-SOG 2 в течение 1 часа в темноте, чтобы свести к минимуму вызванное фоновым светом окисление.Центрифугированием добавляли 1,5-кратный избыток свежевыделенных CD8 + Т-клеток и коинкубировали клетки в течение 30 мин в присутствии интерлейкина-2. Клетки осторожно промывали ледяным PBS, добавляли охлажденный фотоокислительный буфер и взаимодействующие клетки освещали на рабочем расстоянии 20 см прожекторами Precision LED с длиной волны 590 нм в течение 15 мин или оставляли в темноте (два и три биологически независимых образцы соответственно). Клетки осаждали центрифугированием и ресуспендировали в охлажденном буфере для мечения в течение 50 мин при 4°С в темноте.Клетки тщательно промывали PBS, быстро замораживали в виде осадка клеток в жидком азоте и хранили при -80°C до дальнейшей обработки.

Анализ мышиных иммунных клеток методом проточной цитометрии

Собранные клетки окрашивали для проточной цитометрии в PBS в течение 20 мин при комнатной температуре. Следующие антитела были приобретены у BioLegend (Сан-Диего, США) и использованы для проточного цитометрического анализа: CD8a-BV510 (кат.: 100752, клон: 53-6,7, разведение 1:200), CD45.1-PacificBlue (кат.: 110722). , клон: A20, разведение 1:200), CD44-APC (кат.: 559250, клон: IM7, разведение 1:100), CD11c-PerCP (кат.: 117326, клон: N418, разведение 1:200), CD69-PeCy7 (кат.: 104512, клон: h2.2F3, разведение 1:100), CD25-FITC (кат.: 553072, клон: 3C7, разведение 1:100). Жизнеспособность клеток определяли с помощью фиксируемого окрашивания мертвых клеток в ближней ИК-области (LifeTechnologies, Карлсбад, США). Биотинилирование оценивали путем окрашивания стрептавидином-PE (BioLegend) в течение 10 мин при комнатной температуре. Активацию Т-клеток определяли по экспрессии экспрессии GFP под контролем промотора Nur77. Данные были получены на проточном цитометре Canto TM (BD Bioscience, Allschwil, Швейцария) и проанализированы с использованием программного обеспечения FlowJo (Treestar, Ashland, OR, USA) (см. 12 для стратегии стробирования).

Автоматический захват и обработка белков

Меченые клеточные осадки лизировали в 500 мкл буфера для лизиса (100 мМ Трис, 1% дезоксихолат натрия, 10 мМ Трис(2-карбоксиэтил)фосфин, 15 мМ 2-хлорацетамид) с помощью ультразвука в течение четырех интервалов. 30 с в VialTweeter (Hielscher Ultrasonics) при мощности 170 Вт с длительностью цикла 80% и последующим нагревом до 100 °С в течение 5 мин. Лизисный буфер для бактериальных клеток дополнительно содержал 75 мкг эндолизинов Ply511 Listeria для снижения целостности клеточной стенки.Концентрацию белка определяли с помощью спектрофотометра Nanodrop 2000 (Thermo Fisher Scientific), и равные количества между образцами и контрольными условиями (обычно 3  мг белка) подвергали автоматическому захвату и обработке фотомеченых белков с использованием робота для работы с жидкостями. В частности, упакованные наконечники собственного производства, содержащие 80 мкл смолы Streptavidin Plus UltraLink (Thermo Fisher Scientific), были подключены к системе обработки жидкости Versette (Thermo Fisher Scientific) для автоматического смешивания с клеточным лизатом для 2. 5 ч и последующая промывка 5 М NaCl, буфер StimLys (50 мМ Трис pH 7,8, 137 мМ NaCl, 150 мМ глицерин, 0,5 мМ ЭДТА, 0,1 % Тритон Х-100), 100 мМ NaHCO 3 и 50 мМ (NH 4 )HCO 3 . Белки, связанные с шариками, ферментативно расщепляли с помощью 0,5 мкг лизилэндопептидазы Lys-C (Wako, кат. № 125-05061) в течение 2 часов при 37 °C в 3 М мочевины/50 мМ бикарбоната аммония, а затем разбавляли до 1,5 М мочевины/50 мкл. мМ бикарбонат аммония для переваривания в течение ночи с 0,8 мкг трипсина для секвенирования при 37 °C.Элюирующие пептиды очищали по C18 с использованием колонок UltraMicroSpin 5–60 мкг в соответствии с инструкциями производителя и ресуспендировали в 3% ацетонитриле (ACN), 0,1% муравьиной кислоте (FA), содержащем iRT-пептиды (Biognosys AG, Шлирен, Швейцария) для масс-спектрометрического анализа.

Жидкостная хроматография-тандемная масс-спектрометрия

Для идентификации индуцированных светом модификаций белков фотоокисленные пептиды трансферрина ресуспендировали в 3% ACN, 0,1% FA и разделяли с помощью обращенно-фазовой хроматографии на колонке ВЭЖХ (75 -мкм, новый объектив), который был упакован внутри компании с неподвижной фазой 15 см (ReproSil-Pur C18-AQ, 1. 9 мкм) и подключен к нанопоточной ВЭЖХ с автоматическим пробоотборником (EASY-nLC 1000, Thermo Scientific). ВЭЖХ соединяли с масс-спектрометром Orbitrap Fusion Tribrid (Thermo Scientific), снабженным источником ионов с наноэлектроспреем (Thermo Scientific). Пептиды наносили на колонку со 100% буфером А (99,9% H 2 O, 0,1% FA) и элюировали при постоянной скорости потока 300 нл/мин с линейным градиентом 45 от 10–32% буфера B (99,9 % ACN, 0,1% FA) с последующим 4-минутным переходом от 32 к 54% буфера B.После градиента колонку промывали в течение 10 мин 98 %, 4 мин 10 % и снова 8 мин 98 % буфера B. Образцы собирали в режиме DDA с фиксированным временем цикла 3 с (универсальный метод). Таким образом, напряжение электрораспыления и температура капилляра были установлены на 2,2  кВ и 275, соответственно. Обзорный масс-спектр высокого разрешения (от 395 до 1500 m/z), полученный в Orbitrap с разрешением 120 000 при m/z 200 (целевое значение автоматической регулировки усиления 5 × 10 5 и максимальное время инжекции 100 мс). затем спектры МС/МС с разрешением 30 000 наиболее распространенных пептидных ионов с минимальной интенсивностью 2 × 10 4 , которые были выбраны для последующей высокоэнергетической фрагментации диссоциации, вызванной столкновением, с фиксированной энергией столкновения 28% и изоляционное окно 2 Da.Фрагменты были обнаружены с помощью МС/МС на орбитальной ловушке с режимом автоматического нормального диапазона сканирования, целевым значением автоматической регулировки усиления 1 × 10 6 и максимальным временем инжекции 200  мс при включенной параллельной инжекции ионов. Фрагментированные предшественники динамически исключались в течение 10 с.

Для настройки индуцированных светом модификаций белков фотоокисленные пептиды трансферрина ресуспендировали и разделяли с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой, как описано выше.Элюирующие пептиды элюировали в масс-спектрометре Q-Exactive HF (Thermo Scientific), снабженном источником ионов с наноэлектроспреем (Thermo Scientific), и анализировали в режиме DDA. Обзорный масс-спектр (от 350 до 1650 m/z), полученный в Orbitrap с разрешением 60000 при m/z 200 (целевое значение автоматической регулировки усиления 3 × 10 6 и максимальное время ввода 100 мс), сопровождался 10 Спектры МС/МС с разрешением 15 000 наиболее распространенных пептидных ионов с минимальной интенсивностью 4.5 × 10 4 , которые были отобраны для последующей высокоэнергетической диссоциационной фрагментации, индуцированной столкновением, со ступенчатой ​​энергией столкновения 27% и окном изоляции 1,3 Да. Фрагменты были обнаружены с помощью МС/МС на орбитальной ловушке с диапазоном сканирования 200–2000 м/z, целевым значением автоматической регулировки усиления 5 × 10 4 и максимальным временем инжекции 44  мс. Фрагментированные предшественники динамически исключались в течение 15 с.

Для образцов LUX-MS с контролем антител, малых молекул, биомолекул и Thanatin-SOG, полученных в режиме DDA, пептиды разделяли с помощью обращенно-фазовой хроматографии на колонке ВЭЖХ (внутренний диаметр 75 мкм, новая цель), которая был упакован на месте с неподвижной фазой 15 см (ReproSil-Pur C18-AQ, 1. 9 мкм) и подключен к нанопоточной ВЭЖХ с автоматическим пробоотборником (EASY-nLC 1000, Thermo Scientific). ВЭЖХ соединяли с масс-спектрометром Q-Exactive Plus (Thermo Scientific), оснащенным источником ионов с наноэлектрораспылением (Thermo Scientific). Пептиды наносили на колонку со 100% буфером А (99,9% H 2 O, 0,1% FA) и элюировали при постоянной скорости потока 300 нл/мин 70-минутным линейным градиентом от 6–28% буфера B. (99,9% ACN, 0,1% FA) с последующим 4-минутным переходом от 28 до 50% буфера B.После градиента колонку промывали в течение 10 мин 98% буфером В, 4 мин 10% буфером В и 8 мин 98% буфером В. Напряжение электрораспыления устанавливали на 2,2 кВ, а температуру капилляра – на 250°С. Обзорный масс-спектр высокого разрешения (от 300 до 1700 m/z), полученный в Orbitrap с разрешением 70 000 при m/z 200 (целевое значение автоматической регулировки усиления 3 × 10 6 ), сопровождался спектрами МС/МС. в Orbitrap с разрешением 35 000 (целевое значение автоматической регулировки усиления 1 × 10 6 ) из 12 наиболее распространенных пептидных ионов с минимальной интенсивностью 2. 5 × 10 4 , которые были отобраны для фрагментации с помощью высокоэнергетической диссоциации, вызванной столкновением, с энергией столкновения 28% и окном изоляции 1,4 Да. Фрагментированные предшественники динамически исключались в течение 30 с.

Для сравнения антитело-SOG LUX-MS (в H 2 O и D 2 O) и мечения под контролем антитела-HRP пептиды были восстановлены в 3% ACN/0,1% FA/H 2 О. Всего 1  мкг на образец подвергали жидкостной хроматографии-тандемной масс-спектрометрии с использованием установки nLC 1200 (Thermo Scientific) QExactive HFX (Thermo Scientific).Пептиды наносили на 30-см насадочную колонку собственного производства (внутренний диаметр 75 мкм, New Objective) с буфером для подвижной фазы А, содержащим 0,1% FA/H 2 O, и разделяли с помощью обращенно-фазовой хроматографии с ReproSil-Pur 120 A C18- Неподвижная фаза AQ 1,9 мкм (Dr. Maisch GmbH), нагретая до 50°С. Пептиды элюировали буфером подвижной фазы B, состоящим из 80% ACN/0,1% FA/H 2 O, начиная с 7% B до 60% B за 160 мин. Интенсивность пептидов была получена в режиме сбора данных, зависящем от данных. Спектры МС1 регистрировались в диапазоне от 350 до 1650 м/з с разрешением 60 000 при 200 м/з.Сканирование MS1 запускалось при AGC 3e6 или после 45  мс. 12 лучших пептидов были итеративно выделены в пределах окна изоляции 1,3  m / z и фрагментированы с помощью высокоэнергетической диссоциации столкновений (HCD) с нормализованной энергией столкновения nce   =   28. Сканирование MS2 запускалось при достижении мишени AGC из ионов 1e5 или после 22 время заполнения мс и мин. AGC 3e3. Фрагментарные ионы контролировались с разрешением 15000 при 200 m/z с первой фиксированной массой 100 m/z. Фрагментированные пептиды динамически исключали на 30 с для дальнейшего анализа.Ионы с неустановленным зарядовым состоянием, 1 или >6 исключались из фрагментации.

В образцах LUX-MS под контролем бактериофагов, полученных в режиме DDA, пептиды разделяли с помощью обращенно-фазовой хроматографии на колонке для ВЭЖХ (внутренний диаметр 75 мкм, New Objective), которая была заполнена внутри компании 15-сантиметровой неподвижной фазой. (ReproSil-Pur C18-AQ, 1,9 мкм) и подключены к нанопоточной ВЭЖХ с автоматическим пробоотборником (EASY-nLC 1000, Thermo Scientific). ВЭЖХ соединяли с масс-спектрометром Orbitrap Fusion Tribrid (Thermo Scientific), снабженным источником ионов с наноэлектроспреем (Thermo Scientific).Пептиды наносили на колонку со 100% буфером А (99,9% H 2 O, 0,1% FA) и элюировали при постоянной скорости потока 300 нл/мин 70-минутным линейным градиентом от 6–28% буфера B. (99,9 % ACN, 0,1 % FA) с последующим 4-минутным переходом от 28 к 50 % буфера B. После градиента колонку промывали в течение 10 мин 98 %, 4 мин 10 % и снова 8 мин 98% буфер B. Напряжение электрораспыления было установлено на 1,8  кВ, а температура капилляра на 275. Обзорный масс-спектр высокого разрешения (от 395 до 1500  m/z), полученный в Orbitrap с разрешением 120 000 при m/z 200 (автоматический целевое значение контроля усиления 2 × 10 5 и максимальное время впрыска 50 мс) сопровождались спектрами МС/МС наиболее распространенных пептидных ионов с минимальной интенсивностью 5 × 10 3 , которые были выбраны для последующего столкновения с более высокой энергией -индуцированная фрагментация диссоциации с энергией столкновения 35% и окном изоляции 1. 6  Да. Фрагменты были обнаружены с помощью МС/МС в ионной ловушке со скоростью сканирования, установленной на «Быстрое» (целевое значение автоматической регулировки усиления 1 ×10  4 и максимальное время ввода 250 мс). Фрагментированные предшественники динамически исключались в течение 30 с.

Для образцов LUX-MS с контролем антител, полученных в режиме DIA, пептиды разделяли с помощью обращенно-фазовой хроматографии на колонке для ВЭЖХ (внутренний диаметр 75 мкм, New Objective), которая была заполнена на месте 15-сантиметровой неподвижной фазой. (ReproSil-Pur C18-AQ, 1.9 мкм) и подключен к нанопоточной ВЭЖХ с автоматическим пробоотборником (EASY-nLC 1200, Thermo Scientific). ВЭЖХ соединяли с масс-спектрометром Orbitrap Fusion Tribrid (Thermo Scientific), снабженным источником ионов с наноэлектроспреем (Thermo Scientific). Пептиды наносили на колонку со 100% буфером А (99,9% H 2 O, 0,1% FA) и элюировали при постоянной скорости потока 250 нл/мин с 70-минутным линейным градиентом от 6 до 28% буфера B. (99,9% ACN, 0,1% FA) с последующим 4-минутным переходом от 28 до 50% буфера B.После градиента колонку промывали в течение 10 мин 98% буфером В, 4 мин 10% буфером В и 8 мин 98% буфером В. Напряжение электрораспыления устанавливали на 4,0 кВ, а температуру капилляра — на 320°С. Обзорное сканирование, полученное на орбитальной ловушке с разрешением 120 000, максимальным временем инжекции 50  мс и целью АРУ 3 × 10 6 , сопровождалось 24 предварительными окнами с фрагментацией при энергии столкновения 28% и получением спектров МС/МС в орбитальная ловушка с разрешением 30 000. Время впрыска было установлено на автоматический режим, цель AGC — 1 × 10 6 , а диапазон масс — 300–1700 m/z.Для спектральной библиотеки образцы были дополнительно измерены на платформе Q-Exactive Plus в режиме DDA, как описано выше. (внутренний диаметр 75 мкм, новый объектив), которая была заполнена неподвижной фазой диаметром 30 см (ReproSil-Pur C18-AQ, 1,9 мкм) и подключена к нанопоточной ВЭЖХ с автоматическим пробоотборником (EASY-nLC 1200). , Термо Сайентифик). ВЭЖХ соединяли с масс-спектрометром Orbitrap Fusion Lumos Tribrid (Thermo Scientific), снабженным источником ионов с наноэлектроспреем (Thermo Scientific).Пептиды наносили на колонку со 100% буфером А (99,9% H 2 O, 0,1% FA) и элюировали при постоянной скорости потока 250 нл/мин 240-минутным нелинейным градиентом от 4–58% буфера B. (80% ацетонитрила, 0,1% жирной кислоты). После градиента колонку промывали в течение 10 мин 98% буфером В, 4 мин 1% буфером В. Напряжение электрораспыления устанавливали на 3,6 кВ, а температуру капилляра — на 320°С. Обзорное сканирование, полученное на орбитальной ловушке с разрешением 120 000, максимальным временем инжекции 50  мс и целью АРУ 4 × 10 5 , сопровождалось 80 окнами-предшественниками с фрагментацией при энергии столкновения 27% и получением спектров МС/МС в орбитальная ловушка с разрешением 30 000.Время впрыска было установлено на автоматический режим, цель AGC — 1 × 10 6 , а диапазон масс — 350–2000 m/z. Для спектральной библиотеки повторы освещенных и неосвещенных условий были объединены и проанализированы на одной и той же приборной установке в режиме DDA с использованием универсального метода с одинаковым градиентом и энергией столкновения 27% и 30%.

Анализ данных

Необработанные файлы, полученные в режиме DDA, были проверены в соответствующих проверенных SwissProt базах данных белков, содержащих распространенные загрязнители, с использованием Comet (v.2015.01) в рамках Trans Proteomic Pipeline v.4.7 (SPC/ISB Seattle). Требовалось, чтобы пептиды были полностью триптичными с максимум двумя пропущенными сайтами расщепления, карбамидометилированием в качестве фиксированной модификации и окислением метионина в качестве динамической модификации. Допуск по массе прекурсора и фрагмента был установлен на 20 ppm и 1 Da (ионная ловушка MS2) или 0,02 Da (орбитальная ловушка MS2) соответственно. Белки, идентифицированные как минимум двумя протеотипическими пептидами, количественно определяли путем интеграции хроматографических следов пептидов с использованием Progenesis QI v. 4.0 (Нелинейная динамика). Попадания загрязняющих веществ были удалены, а белки отфильтрованы, чтобы получить коэффициент ложного обнаружения <1%. Обилие сырого белка было экспортировано на основе неконфликтующих пептидов.

Для анализа DIA необработанные файлы для спектральных библиотек, полученные в режиме DDA, были проверены в соответствующих проверенных SwissProt базах данных белков, содержащих распространенные загрязнители, с использованием поисковой системы Sequest HT в составе Thermo Proteome Discoverer версии 2.4 (Thermo Scientific). Требовалось, чтобы пептиды были полностью триптичными с не более чем двумя пропущенными расщеплениями.Карбамидометилирование было установлено как фиксированная модификация цистеина. Окисление метионина и N-концевое ацетилирование задавали как вариабельные модификации. Для данных SILAC меченные изотопами аргинин (+10 Да) и лизин (+8 Да) были установлены в качестве переменных модификаций. Допуск моноизотопного пептида был установлен на 10 ppm, а допуск по массе фрагмента был установлен на 1 Да (ионная ловушка MS2) или 0,02 Да (орбитальная ловушка MS2). Идентифицированные белки оценивали с помощью Percolator и фильтровали с использованием настройки высокой достоверности пептидов в Protein Discoverer.Затем результаты анализа были импортированы в Spectronaut v.13 (Biognosys AG, Шлирен, Швейцария) для создания спектральных библиотек с фильтрацией для высоконадежной идентификации на уровне пептидов и белков. Необработанные файлы, полученные в независимом от данных режиме сбора данных, были проанализированы с использованием Spectronaut v.13 с настройками по умолчанию. Был применен фильтр протеотипичности «только группа белков», а извлеченные количества признаков были экспортированы из Spectronaut с использованием опции «Фильтрация количественных данных».В вычислительной среде R (v.3.4.0) кратные изменения содержания белка (выраженные в log2) рассчитывались с использованием линейной модели со смешанными эффектами и проверялись на статистическую значимость с использованием двустороннего теста t с соответствующей степенью достоверности. свобода в пакете R MSstats (v.3.8.6) 90 . Для белков человека локализация на клеточной поверхности была установлена ​​путем сопоставления идентификаций белков с in silico человеческим поверхностным 17 . Для всех других организмов локализация на клеточной поверхности была сделана на основе аннотаций термина UniProt GO, таких как «клеточная поверхность», «клеточная мембрана» или «секретируемый».Значительно обогащенные белки (кратность изменения численности >1,5 и значение p <0,05) рассматривались как кандидаты на острую близость конструкции лиганд- или антитело-SOG. Сеть взаимодействия поверхности CD20 была создана с использованием Cytoscape (v.3.7.1) 94 . Информация о топологии белков была получена и визуализирована с помощью интерактивного веб-инструмента PROTTER 95 . Белковые структуры визуализировали с использованием системы молекулярной графики PyMOL (v.2.4.0, Schrödinger, LLC). Данные масс-спектрометрии визуализировали с помощью ggplot2 (v. 3.3.2). Интерактивные графики вулканов были созданы с использованием R-скрипта собственной разработки с использованием пакета plotly (https://plotly-r.com). Трехмерная модель лотка для пипеток на рис. 1 была создана Томасом Сплеттстессером (www.scistyle.com). Все остальные схематические изображения были созданы с помощью веб-инструмента BioRender (https://biorender.com/).

Сводка отчета

Дополнительная информация о дизайне исследования доступна в Кратком отчете об исследовании природы, связанном с этой статьей.

ADDR2-LED Контроллер Dmx Декодер Dmx-Relays | Светодиоды, контроллеры, лампочки, лампы, пиксели, модули

Детали

ADDR2-LED ADDR2-LED DMX-контроллер DMX-реле ИСПОЛЬЗОВАНИЕ для светодиодов Контроллер для светодиодной ленты

Мы поставляем высококачественные DMX-контроллеры и декодеры в США, Великобританию, Европу и мир уже более 10 лет.Пожалуйста, выберите и закажите контроллеры и светильники DMX по вашему желанию. Если вам нужны индивидуальные лампы DMX, пожалуйста, свяжитесь с нами. Мы будем производить для вас.



УПРАВЛЕНИЕ УПРАВЛЕНИЯ: 1 кусок ADDR2-LED DMX Контроллер DMX-Реле Декодер

Отличный выбор для Green Life, CE и ROHS

Обработка & Доставка и отслеживание

В основном посылка будет отправлена ​​в течение 1-3 рабочих дней после получения оплаты.Если вам нужны товары срочно, пожалуйста, свяжитесь с нами, чтобы узнать дату доставки сразу после или до того, как вы разместили заказ. Пожалуйста, свяжитесь с [email protected]

Наш веб-сайт очень прост в использовании, вы можете разместить заказ без регистрации, стоимость доставки зависит от веса заказанной вами продукции. Вы можете легко выбрать способ доставки (UPS/DHL/Fedex/экономическая доставка) при оформлении заказа. Мы всегда предложим вам онлайн-номер отслеживания по электронной почте.

Все продукты будут хорошо упакованы для каждого заказа, чтобы убедиться, что вы быстро получите все продукты в отличном состоянии.Мы еженедельно доставляем сотни посылок в США, Великобританию, Францию, Германию, Италию, Швейцарию, Испанию, Канаду, Швецию и другие страны Европы, и мы показываем вам следующие фотографии, которые мы сделали прямо перед тем, как упаковать посылки.

Заказ и оплата

Мы обеспечиваем наших клиентов высококачественной продукцией, быстрой доставкой и профессиональным обслуживанием. у заказов есть номер для отслеживания, и ни у одного из них нет проблем с возвратом средств или чем-то еще, это хорошая ссылка на наши продукты и услуги: (мы закрыли имя и адрес электронной почты, чтобы защитить конфиденциальность наших клиентов) .

Мы предлагаем высококачественные продукты и обслуживание, поэтому многие клиенты становятся нашими постоянными клиентами после того, как они первые покупки , вот некоторые случаи для вашей справки:

У нас есть доступ к дополнительным продуктам, которых еще нет на этом сайте. Если вам нужно что-то еще, пожалуйста, напишите нам, мы проверим его наличие и свяжемся с вами в ближайшее время.

Пожалуйста, свяжитесь с нами [email protected] Мы ответим быстро и профессионально.

Вы также можете отправить нам список товаров, которые хотите купить, и мы составим предложение, а затем отправим вам счет-фактуру Paypal, чтобы сделать покупки проще.

Мы еженедельно доставляем сотни посылок в Великобританию, США, Германию, Данию, Австрию, Канаду, Францию, Испанию и другие страны, пользуемся хорошей репутацией благодаря высокому качеству и быстрой доставке.

Вы всегда найдете светодиодные ленты, светодиодные контроллеры, блоки питания для светодиодов, аксессуары для светодиодов у Szdealer.ком

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


Настройка браузера на прием файлов cookie

Существует множество причин, по которым файл cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее распространенные причины:

  • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки браузера, чтобы принять файлы cookie, или спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
  • Ваш браузер спрашивает, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файл cookie.
  • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Попробуйте другой браузер, если вы подозреваете это.
  • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы это исправить, установите правильное время и дату на своем компьютере.
  • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Предоставить доступ без файлов cookie потребует от сайта создания нового сеанса для каждой посещаемой вами страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в файле cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, если вы не решите ввести его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступ к остальной части вашего компьютера, и только сайт, создавший файл cookie, может его прочитать.

Китай производитель беспроводной системы вызова, цифровой пейджер, поставщик пейджинговой системы

Beijing Yueqi Science & Technology Co., Ltd. со штаб-квартирой в Пекине является ведущим поставщиком систем вызова и высокотехнологичным предприятием, объединяющим независимые научно-исследовательские и опытно-конструкторские мощности, независимую интеллектуальную собственность и независимые производственные мощности.

Мы уже давно занимаемся разработкой, производством и продажей систем вызова и посвятили себя решению проблем, связанных с вызовами, и предлагаем …

Beijing Yueqi Science & Technology Co. , Ltd. со штаб-квартирой в Пекине является ведущим поставщиком систем вызова и высокотехнологичным предприятием, объединяющим независимые научно-исследовательские и опытно-конструкторские мощности, независимую интеллектуальную собственность и независимые производственные мощности.

Мы давно занимаемся разработкой, производством и продажей систем вызова и занимаемся решением проблем, связанных с вызовами, и предлагаем различные решения.В настоящее время наши продукты можно найти во многих местах и ​​они успешно решают сложные задачи для операторов. Наши продукты были одобрены как рынком, так и пользователями, а сама Yueqi стала лидером в индустрии пейджеров и одним из самых профессиональных разработчиков и производителей систем вызова. Благодаря нашему давнему сотрудничеству с техническими командами Китайской академии наук и Шанхайского университета Цзяотун, Yueqi может похвастаться ведущей командой по исследованиям и разработкам и выдающимися возможностями исследований и разработок внутри страны.

Наша продукция была разработана и произведена после тщательного изучения рынка и изучения спроса и предложения, поэтому ее характеристики, внешний вид и функции основаны на развитии рынка и потребительском спросе. Наши продукты напоминают внешний вид и цветовой дизайн продуктов корейской телефонной системы и унаследовали такие особенности отечественных продуктов, как сильный сигнал, стабильная работа и широкое применение. Они наилучшим образом отвечают требованиям рынка и удовлетворяют потребности клиентов.У них самый полный ассортимент, самый красивый внешний вид и лучшие характеристики и качество.

мРНК-вакцина для иммунотерапии рака | Молекулярный рак

  • Пантин Дж., Баттивалла М. Опрокидывание яблока CAR-T (Т-клеточная терапия химерными антигенными рецепторами) – устойчивость требует инноваций в США. Бр Дж Гематол. 2020;190(6):851–3.

    ПабМед Статья Google ученый

  • “>

    Hargadon KM, Johnson CE, Williams CJ.Терапия блокадой иммунных контрольных точек при раке: обзор одобренных FDA ингибиторов иммунных контрольных точек. Int Immunopharmacol. 2018;62:29–39.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Guo C, Manjili MH, Subjeck JR, Sarkar D, Fisher PB, Wang XY. Терапевтические противораковые вакцины: прошлое, настоящее и будущее. Adv Рак Res. 2013; 119: 421–75.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Чивер М.А., Хигано CS.PROVENGE (Sipuleucel-T) при раке предстательной железы: первая терапевтическая противораковая вакцина, одобренная FDA. Клин Рак Рез. 2011;17(11):3520–6.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Папахристофилу А., Хипп М.М., Клинкхардт У. , Фрух М., Себастьян М., Вайс С. и др. Оценка фазы Ib самоадъювантной иммунотерапии активного рака на основе мРНК на основе протамина, BI1361849 (CV9202), в сочетании с местной лучевой терапией у пациентов с немелкоклеточным раком легкого IV стадии.J Иммунный рак. 2019;7(1):38.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Риттиг С.М., Хеншель М., Веймер К.Дж., Хайне А., Мюллер М.Р., Бруггер В. и др. Долгосрочная выживаемость коррелирует с иммунологическим ответом у пациентов с почечно-клеточным раком, получавших иммунотерапию на основе мРНК. Онкоиммунология. 2016;5(5):e1108511.

    ПабМед Статья КАС Google ученый

  • Фагфури Э., Пурфарзи Ф., Фагфури А.Х., Абдоли Шадбад М., Хаджиасгарзаде К., Барадаран Б.Последние разработки вакцин на основе РНК в иммунотерапии рака. Мнение Эксперта Биол Тер. 2020: 1–8.

  • Van Nuffel AM, Wilgenhof S, Thielemans K, Bonehill A. Преодоление ограничения HLA в клинических испытаниях: иммунный мониторинг терапии DC, нагруженной мРНК. Онкоиммунология. 2012;1(8):1392–4.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Вольф Дж.А., Мэлоун Р.В., Уильямс П., Чонг В., Аксади Г., Яни А. и др.Прямой перенос генов в мышцы мышей in vivo. Наука. 1990; 247 (4949, часть 1): 1465–8.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Сон С., Нам Дж., Зенков И., Очил Л.Дж., Сюй И., Шитц Л. и др. Сахарные нанокапсулы с отпечатанными микробными молекулярными структурами для вакцинации мРНК. Нано Летт. 2020;20(3):1499–509.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Парди Н., Хоган М.Дж. , Портер Ф.В., Вайсман Д.мРНК-вакцины – новая эра в вакцинологии. Nat Rev Drug Discov. 2018;17(4):261–79.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Блум К., ван ден Берг Ф., Арбутнот П. Самоамплифицирующиеся РНК-вакцины от инфекционных заболеваний. Джин Тер. 2020: 1–13.

  • Флемминг А. Вакцины: самоамплифицирующаяся РНК в липидных наночастицах: вакцина нового поколения? Nat Rev Drug Discov. 2012;11(10):748–9.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Шахин У., Муйк А., Дерхованесян Э., Фоглер И., Кранц Л.М., Вормер М. и др. Вакцина против COVID-19 BNT162b1 вызывает реакции человеческих антител и Т-клеток Th2. Природа. 2020; 586 (7830): 594–9.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • “>

    Джексон Л.А., Робертс П.С., Грэм Б.С. Вакцина мРНК SARS-CoV-2 – предварительный отчет.Ответить N Engl J Med. 2020;383(12):1191–2.

    КАС пабмед Google ученый

  • Кобб М. Кто открыл информационную РНК? Карр Биол. 2015;25(13):R526–32.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Linares-Fernandez S, Lacroix C, Exposito JY, Verrier B. Адаптация мРНК-вакцины для уравновешивания врожденного/адаптивного иммунного ответа. Тренды Мол Мед. 2020;26(3):311–23.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Kranz LM, Diken M, Haas H, Kreiter S, Loquai C, Reuter KC, et al. Системная доставка РНК в дендритные клетки использует противовирусную защиту для иммунотерапии рака. Природа. 2016; 534(7607):396–401.

    ПабМед Статья КАС Google ученый

  • “>

    Пулит-Пеналоза Ю.А., Щербик С.В., Бринтон М.А. Для активации экспрессии гена Oas1a с помощью IFN типа I требуются как STAT1, так и STAT2, тогда как для активации Oas1b требуется только STAT2.Вирусология. 2012;425(2):71–81.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Кумар П., Суини Т.Р., Скабкин М.А., Скабкина О.В., Хеллен К.У., Пестова Т.В. Ингибирование трансляции членами семейства IFIT определяется их способностью избирательно взаимодействовать с 5′-концевыми областями cap0-, cap1- и 5’ppp-мРНК. Нуклеиновые Кислоты Res. 2014;42(5):3228–45.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Де Бекелер А., Грутен Дж., Де Кокер С.Интерфероны типа I модулируют CD8(+) Т-клеточный иммунитет к мРНК-вакцинам. Тренды Мол Мед. 2017;23(3):216–26.

    ПабМед Статья КАС Google ученый

  • “>

    Broos K, Van der Jeught K, Puttemans J, Goyvaerts C, Heirman C, Dewitte H, et al. Опосредованная частицами внутривенная доставка мРНК антигена приводит к сильным антиген-специфическим Т-клеточным ответам, несмотря на индукцию интерферона I типа. Молекулярные нуклеиновые кислоты. 2016;5(6):e326.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Де Беккелер А., Поллард С., Ван Линт С., Руз К., Ван Хёке Л., Нэссенс Т. и другие. Интерфероны типа I нарушают способность вакцин мРНК Lipoplex вызывать цитолитические Т-клеточные ответы. Мол Тер. 2016;24(11):2012–20.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Поллард С., Рейман Дж., Де Хаес В., Веррье Б., Ван Галк Э., Нэссенс Т. и другие.IFN типа I противодействует индукции антиген-специфических иммунных ответов путем доставки мРНК-вакцин на основе липидов. Мол Тер. 2013;21(1):251–9.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Л. Мяо, Л. Ли, Ю. Хуанг, Д. Делькассян, Дж. Чахал, Дж. Хань и др. Доставка мРНК-вакцин с гетероциклическими липидами повышает противоопухолевую эффективность за счет STING-опосредованной активации иммунных клеток. Нац биотехнолог. 2019;37(10):1174–85.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Оберли М.А., Райхмут А.М., Доркин Дж.Р., Митчелл М.Дж., Фентон О.С., Якленец А. и др.Липидные наночастицы способствовали доставке мРНК для мощной иммунотерапии рака. Нано Летт. 2017;17(3):1326–35.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Muttach F, Muthmann N, Rentmeister A. Синтетическое кэпирование мРНК. Beilstein J Org Chem. 2017;13(1):2819–32.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • “>

    Шуман С. Каталитическая активность субъединиц фермента, покрывающих мРНК коровьей оспы, коэкспрессируется в Escherichia coli.Дж. Биол. Хим. 1990;265(20):11960–6.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Fuchs AL, Neu A, Sprangers R. Общий метод быстрого и экономичного крупномасштабного производства 5′-кэпированной РНК. РНК. 2016;22(9):1454–66.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Рыдзик А.М., Кулис М., Лукашевич М., Ковальска Дж., Зуберек Дж., Дарзынкевич З.М. и соавт.Синтез и свойства аналогов кэпа мРНК, содержащих имидодифосфатный фрагмент, которые в значительной степени имитируют структуру природного кэпа, но устойчивы к ферментативному гидролизу. Биоорг Мед Хим. 2012;20(5):1699–710.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • “>

    Шлаке Т., Тесс А., Фотин-Млечек М., Каллен К.Дж. Разработка технологий мРНК-вакцины. РНК биол. 2012;9(11):1319–30.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Vaidyanathan S, Azizian KT, Haque AKMA, Henderson JM, Hendel A, Shore S, et al.Истощение уридина и химическая модификация повышают активность мРНК Cas9 и снижают иммуногенность без очистки ВЭЖХ. молярные тер-нуклеиновые кислоты. 2018;12:530–42.

    КАС Статья Google ученый

  • Дженсен С., Томсен А.Р. Распознавание РНК-вирусов: обзор рецепторов врожденного иммунитета, участвующих в распознавании инвазии РНК-вируса. Дж Вирол. 2012;86(6):2900–10.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Рингард М., Маршан В., Декроли Э., Моторин Ю. , Беннассер Ю.FTSJ3 представляет собой РНК-2′-O-метилтрансферазу, рекрутируемую ВИЧ, чтобы избежать врожденного иммунного восприятия. Природа. 2019;565(7740):500-+.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Цао Дж., Хэ Л.Дж., Лин Г.Ю., Ху К.К., Дун Р., Чжан Дж. и др. Кэп-зависимый фактор инициации трансляции, eIF4E, является мишенью оуабаин-опосредованного ингибирования HIF-1 альфа. Биохим Фармакол. 2014;89(1):20–30.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Уизенанд Дж., Азизян К., Хендерсон Дж., Шор С., Шин Д., Лебедев А. и др.Соображения по дизайну и производству cGMP терапевтических средств с мРНК. Плакат Trilink Biotechnol. https://www.trilinkbiotech.com/media/contentmanager/content/mRNA_OTS1.pdf.

  • Weissman D. Терапия транскриптом мРНК. Эксперт Rev Вакцины. 2015;14(2):265–81.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Орландини фон Ниссен А.Г., Полеганов М.А., Рехнер С., Плашке А., Кранц Л.М., Фессер С. и соавт. Улучшение доставки терапевтического гена на основе мРНК с помощью 3′-UTR, увеличивающих экспрессию, идентифицированных скринингом клеточной библиотеки.Мол Тер. 2019;27(4):824–36.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Цзя Л., Мао Ю., Цзи К., Дерш Д., Юделл Д.В., Цянь С.Б. Расшифровка транслируемости и стабильности мРНК из 5’UTR. Nat Struct Mol Biol. 2020;27(9):814–21.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Тесс А., Грунд С., Муи Б.Л., Хоуп М.Дж., Баумхоф П., Фотин-Млечек М. и др.Сконструированная последовательность мРНК без химических модификаций нуклеозидов обеспечивает эффективную белковую терапию у крупных животных. Мол Тер. 2015;23:С55–С.

    Артикул Google ученый

  • Лима С.А., Чипман Л.Б., Николсон А.Л., Чен Ю.Х., Йи Б.А., Йео Г.В. и др. Короткие поли(а)-хвосты являются консервативным признаком высокоэкспрессированных генов. Nat Struct Mol Biol. 2017;24(12):1057–63.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Уиллис Э., Парди Н., Паркхаус К., Муи Б.Л., Тэм Ю.К., Вайсман Д. и др.Вакцинация мРНК с модифицированными нуклеозидами частично преодолевает ингибирование материнскими антителами иммунных ответов de novo у мышей. Sci Transl Med. 2020;12(525):eaav5701.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Шарифния З., Бандехпур М., Каземи Б., Заргами Н. Дизайн и разработка модифицированной мРНК, кодирующей коровый антиген вируса гепатита С: возможное применение в производстве вакцин. Иран Биомед Дж.2019;23(1):57–67.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Парди Н., Вайсман Д. Нуклеозидно-модифицированные мРНК-вакцины против инфекционных заболеваний. Методы Мол Биол. 2017;1499:109–21.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • О С, Кесслер Дж.А. Дизайн, сборка, производство и трансфекция синтетических модифицированных мРНК. Методы.2018; 133:29–43.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Карико К., Мурамацу Х., Людвиг Дж., Вайсман Д. Создание оптимальной мРНК для терапии: очистка ВЭЖХ устраняет иммунную активацию и улучшает трансляцию нуклеозид-модифицированной мРНК, кодирующей белок. Нуклеиновые Кислоты Res. 2011;39(21):e142.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • “>

    Карико К., Бакштейн М., Ни Х., Вайсман Д.Подавление узнавания РНК толл-подобными рецепторами: влияние модификации нуклеозидов и эволюционное происхождение РНК. Иммунитет. 2005;23(2):165–75.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Карико К., Мурамацу Х., Уэльс Ф.А., Людвиг Дж., Като Х., Акира С. и др. Включение псевдоуридина в мРНК дает превосходный неиммуногенный вектор с повышенной трансляционной способностью и биологической стабильностью. Мол Тер.2008; 16 (11): 1833–40.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Аранго Д., Стерджилл Д., Альхусаини Н., Диллман А.А., Свит Т.Дж., Хэнсон Г. и др. Ацетилирование цитидина в мРНК способствует эффективности трансляции. Клетка. 2018;175(7):1872-+.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • “>

    Wang H, Hu X, Huang M, Liu J, Gu Y, Ma L и др.Mettl3-опосредованное метилирование мРНК m(6)a способствует активации дендритных клеток. Нац коммун. 2019; 10(1):1898.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Weissman D, Pardi N, Muramatsu H, Kariko K. ВЭЖХ-очистка транскрибированной in vitro длинной РНК. Методы Мол Биол. 2013; 969:43–54.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Байерсдорфер М., Борос Г., Мурамацу Х., Махини А., Влаткович И., Шахин У. и др.Простой метод удаления примеси дцРНК из транскрибируемой in vitro мРНК. молярные тер-нуклеиновые кислоты. 2019;15:26–35.

    Артикул КАС Google ученый

  • Shivalingam A, Taemaitree L, El-Sagheer AH, Brown T. Скварамиды и мочевины: гибкий подход к полимеразо-совместимой сборке нуклеиновых кислот. Angew Chem Int Ed Eng. 2020;59(28):11416–22.

    КАС Статья Google ученый

  • Hassett KJ, Benenato KE, Jacquinet E, Lee A, Woods A, Yuzhakov O, et al.Оптимизация липидных наночастиц для внутримышечного введения мРНК-вакцин. молярные тер-нуклеиновые кислоты. 2019; 15:1–11.

    КАС Статья Google ученый

  • Ислам М.А., Райс Дж., Рисор Э., Зоуп Х., Тао В., Лим М. и др. Наночастицы мРНК-вакцины с импульсным адъювантом для иммунопрофилактического и терапевтического подавления опухолей у мышей. Биоматериалы. 2021;266:120431.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Луо М., Ван Х., Ван З., Цай Х., Лу З., Ли И. и др.STING-активирующая нановакцина для иммунотерапии рака. Нац Нанотехнолог. 2017;12(7):648–54.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • “>

    Miao L, Lin J, Huang Y, Li L, Delcassian D, Ge Y, et al. Синергетические липидные композиции для опосредованной рецептором альбумина доставки мРНК в печень. Нац коммун. 2020;11(1):2424.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Де Кирсмакер Б., Клэрхаут С., Карраско Дж., Бар И., Корталс Дж., Вильгенхоф С. и др.TriMix и мРНК опухолевого антигена, электропорация вакцины дендритных клеток плюс ипилимумаб: связь между активацией Т-клеток и клиническими ответами при распространенной меланоме. J Иммунный рак. 2020;8(1):e000329.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Bonehill A, Tuyaerts S, Van Nuffel AM, Heirman C, Bos TJ, Fostier K, et al. Повышение стимулирующей способности Т-клеток дендритных клеток человека путем совместной электропорации с CD40L, CD70 и конститутивно активной TLR4, кодирующей мРНК. Мол Тер. 2008;16(6):1170–80.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Хьюитт С.Л., Бай А., Бейли Д., Итикава К., Зелински Дж., Карп Р. и др. Устойчивый противораковый иммунитет при внутриопухолевом введении мРНК IL-23, IL-36gamma и OX40L. Sci Transl Med. 2019;11(477):eaat9143.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Брито Л.А., Коммаредди С., Майоне Д., Уэмацу Ю., Джовани С., Берланда Скорца Ф. и др.Самоамплифицирующиеся мРНК-вакцины. Ад Генет. 2015; 89: 179–233.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Johanning FW, Conry RM, LoBuglio AF, Wright M, Sumerel LA, Pike MJ, et al. Полинуклеотидный вектор мРНК вируса Синдбис обеспечивает пролонгированную экспрессию гетерологичного гена высокого уровня in vivo. Нуклеиновые Кислоты Res. 1995;23(9):1495–501.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Райнер Ю.О., Дрыга С.А., Камруд К.И.Альфавирусные переносчики и вакцинация. Преподобный Мед Вирол. 2002;12(5):279–96.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Циммер Г. РНК-репликоны – новый подход к иммунопрофилактике вируса гриппа. Вирусы. 2010;2(2):413–34.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Хекеле А., Бертолет С., Арчер Дж., Гибсон Д.Г., Палладино Г., Брито Л.А. и др.Быстро производимая вакцина SAM((R)) против гриппа H7N9 является иммуногенной для мышей. Новые микробы заражают. 2013;2(8):e52.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • “>

    Бернштейн Д.И., Рип Э.А., Катен К., Уотсон А., Смит К., Норберг П. и др. Рандомизированное двойное слепое испытание фазы 1 вакцины с репликоном альфавируса против цитомегаловируса у взрослых добровольцев, не инфицированных ЦМВ. вакцина. 2009;28(2):484–93.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Лундстрем К.Самореплицирующиеся РНК-вирусы для РНК-терапии. Молекулы. 2018;23(12):3310.

    Центральный пабмед Статья КАС пабмед Google ученый

  • Vogel AB, Lambert L, Kinnear E, Busse D, Erbar S, Reuter KC, et al. Самоамплифицирующиеся РНК-вакцины обеспечивают такую ​​же защиту от гриппа, как и мРНК-вакцины, но в гораздо меньших дозах. Мол Тер. 2018;26(2):446–55.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Блэкни А.К., Чжу Ю. , Маккей П.Ф., Бутон Ч.Р., Йеоу Дж., Тан Дж. и др.Большой — это красиво: улучшенная доставка saRNA и иммуногенность за счет биоразлагаемого катионного полимера с более высокой молекулярной массой. АКС Нано. 2020;14(5):5711–27.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Гил А.Дж., Верма А., Оттен Г.Р., Шоу К.А., Хекеле А., Банерджи К. и др. Невирусная доставка самоамплифицирующихся РНК-вакцин. Proc Natl Acad Sci U S A. 2012;109(36):14604–9.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Manara C, Brazzoli M, Piccioli D, Taccone M, D’Oro U, Maione D, et al.Совместное введение РНК, экспрессирующей GM-CSF, является мощным инструментом для повышения эффективности вакцин на основе SAM. вакцина. 2019;37(30):4204–13.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • “>

    Лу Г., Андерлуцци Г., Шмидт С.Т., Вудс С., Галлорини С., Браззоли М. и др. Доставка самоамплифицирующихся мРНК-вакцин с помощью катионных липидных наночастиц: влияние выбора катионных липидов. J Управление выпуском. 2020;325:370–9.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Андерлуцци Г., Лу Г., Галлорини С., Браззоли М., Джонсон Р., О’Хаган Д.Т. и др.Изучение влияния конструкции системы доставки на эффективность самоамплифицирующихся РНК-вакцин. Вакцины (Базель). 2020;8(2):212.

    КАС Статья Google ученый

  • Beissert T, Perkovic M, Vogel A, Erbar S, Walzer KC, Hempel T, et al. Стратегия трансамплифицирующей РНК-вакцины для индукции мощного защитного иммунитета. Мол Тер. 2020;28(1):119–28.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • “>

    Ковальски П.С., Рудра А., Мяо Л., Андерсон Д.Г.Доставка мессенджера: достижения в технологиях доставки терапевтической мРНК. Мол Тер. 2019;27(4):710–28.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Крампс Т., Элберс К. Введение в РНК-вакцины. Методы Мол Биол. 2017; 1499:1–11.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Цзэн С., Чжан С., Уокер П.Г., Донг Ю.Технологии приготовления и доставки мРНК-вакцин. В кн.: Актуальные проблемы микробиологии и иммунологии. Берлин, Гейдельберг: Springer; 2020 г. https://doi.org/10.1007/82_2020_2172020_217.

  • Semple SC, Akinc A, Chen J, Sandhu AP, Mui BL, Cho CK, et al. Рациональный дизайн катионных липидов для доставки миРНК. Нац биотехнолог. 2010;28(2):172–176.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • “>

    Джаяраман М., Анселл С.М., Муи Б.Л., Там Ю.К., Чен Дж.С., Ду С.Ю. и др.Максимизация эффективности липидных наночастиц siRNA для подавления активности печеночных генов in vivo. Angew Chem Int Edit. 2012;51(34):8529–33.

    КАС Статья Google ученый

  • Акинц А., Зумбюль А., Гольдберг М., Лещинер Э.С., Бусини В., Хоссейн Н. и др. Комбинаторная библиотека липидоподобных материалов для доставки терапевтических средств РНКи. Нац биотехнолог. 2008;26(5):561–9.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Донг Ю., Лав К.Т., Доркин Дж.Р., Сирирунгруанг С., Чжан И., Чен Д. и др.Липопептидные наночастицы для эффективной и селективной доставки миРНК грызунам и приматам. Proc Natl Acad Sci U S A. 2014;111(11):3955–60.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • “>

    Maier MA, Jayaraman M, Matsuda S, Liu J, Barros S, Querbes W, et al. Биоразлагаемые липиды, позволяющие быстро устранять липидные наночастицы для системной доставки терапевтических средств РНК-интерференции. Мол Тер. 2013;21(8):1570–8.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Уайтхед К.А., Доркин Дж.Р., Вегас А.Дж., Чанг П.Х., Вейше О., Мэтьюз Дж. и др. Разлагаемые липидные наночастицы с предсказуемой активностью доставки миРНК in vivo. Нац коммун. 2014;5:4277.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Fenton OS, Kauffman KJ, Kaczmarek JC, McClellan RL, Jhunjhunwala S, Tibbitt MW, et al.Синтез и биологическая оценка ионизируемых липидных материалов для доставки РНК-мессенджера в В-лимфоциты in vivo. Adv Mater. 2017;29(33). https://doi.org/10.1002/adma.201606944.

  • Fenton OS, Kauffman KJ, McClellan RL, Appel EA, Dorkin JR, Tibbitt MW, et al. Биоинспирированные алкениламиноспирты Ионизируемые липидные материалы для высокоэффективной доставки мРНК in vivo. Adv Mater. 2016;28(15):2939–43.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Кроммелин Д.А., Анкордокви Т.Дж., Волкин Д.Б., Джискот В., Мастробаттиста Э.Обращаясь к холодной реальности стабильности мРНК-вакцины. Дж. Фарм. 2021;110(3):997–1001.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Zhang X, Zhao W, Nguyen GN, Zhang C, Zeng C, Yan J и др. Функционализированные липидоподобные наночастицы для доставки мРНК in vivo и редактирования оснований. Научная реклама 2020;6(34):eabc2315.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • “>

    Li B, Luo X, Deng B, Wang J, McComb DW, Shi Y и др.Оптимизация ортогонального массива липидоподобных наночастиц для доставки мРНК in vivo. Нано Летт. 2015;15(12):8099–107.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Акита Х., Ишиба Р., Тогаси Р., Танге К., Накаи Ю., Хатакеяма Х. и др. Нейтральная липидная наночастица типа оболочки, состоящая из рН-активируемого и липидоподобного материала на основе витамина Е, в качестве платформы для переносчика гена, нацеленного на почечно-клеточную карциному.J Управление выпуском. 2015; 200:97–105.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Хоу С., Чжан С., Чжао В., Цзэн С., Дэн Б., МакКомб Д.В. и др. Липидные наночастицы витаминов обеспечивают адоптивный перенос макрофагов для лечения бактериального сепсиса с множественной лекарственной устойчивостью. Нац Нанотехнолог. 2020;15(1):41–6.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Конвей А., Мендель М., Ким К., Макговерн К., Бойко А., Чжан Л. и др.Невирусная доставка мРНК нуклеазы цинковых пальцев обеспечивает высокоэффективное редактирование генома in vivo нескольких терапевтических генов-мишеней. Мол Тер. 2019;27(4):866–77.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Сабнис С., Кумарасингхе Э.С., Салерно Т., Михай С., Кетова Т., Сенн Дж.Дж. и др. Новая серия аминолипидов для доставки мРНК: улучшенное эндосомальное ускользание и устойчивая фармакология и безопасность у приматов, отличных от человека.Мол Тер. 2018;26(6):1509–19.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • “>

    Рамасвами С., Тонну Н., Тачикава К., Лимфонг П., Вега Дж. Б., Кармали П. П. и др. Системная доставка матричной РНК фактора IX для заместительной белковой терапии. Proc Natl Acad Sci U S A. 2017;114(10):E1941–E50.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Финн Дж.Д., Смит А.Р., Патель М.С., Шоу Л., Юнисс М.Р., ван Хетерен Дж. и др.Однократное введение липидных наночастиц CRISPR/Cas9 обеспечивает надежное и стойкое редактирование генома in vivo. Cell Rep. 2018;22(9):2227–35.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Thevenot J, Troutier AL, David L, Delair T, Ladaviere C. Стерическая стабилизация липидно-полимерных частиц с помощью поли(этиленгликоль)-липидов. Биомакромолекулы. 2007;8(11):3651–60.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • “>

    Витцигманн Д., Кулкарни Дж.А., Леунг Дж., Чен С., Куллис П.Р., ван дер Мил Р.Технология липидных наночастиц для терапевтической регуляции генов в печени. Adv Drug Deliv Rev. 2020; 159: 344–63.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Кауфман К.Дж., Доркин Дж.Р., Ян Дж.Х., Хартлейн М.В., ДеРоса Ф., Мир Ф.Ф. и др. Оптимизация составов липидных наночастиц для доставки мРНК in vivo с дробным факторным и окончательным дизайном скрининга. Нано Летт. 2015;15(11):7300–6.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Dahlman JE, Kauffman KJ, Xing Y, Shaw TE, Mir FF, Dlott CC, et al.Наночастицы со штрих-кодом для высокопроизводительного открытия целевых терапевтических средств in vivo. Proc Natl Acad Sci U S A. 2017;114(8):2060–5.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • “>

    Sato Y, Hatakeyama H, Sakurai Y, Hyodo M, Akita H, Harashima H. ​​pH-чувствительный катионный липид облегчает доставку липосомальной siRNA и подавляет активность генов in vitro и in vivo. J Управление выпуском. 2012;163(3):267–76.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Гиллерон Дж., Кербес В., Зайгерер А., Бородовский А., Марсико Г., Шуберт У. и другие. Анализ на основе изображений доставки siRNA, опосредованной липидными наночастицами, внутриклеточного транспорта и эндосомального побега. Нац биотехнолог. 2013;31(7):638–46.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Сахай Г., Кербес В., Алаби С., Эльтухи А., Саркар С., Зуренко С. и др.Эффективность доставки siRNA липидными наночастицами ограничена эндоцитарной рециркуляцией. Нац биотехнолог. 2013;31(7):653–8.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • “>

    Wittrup A, Ai A, Liu X, Hamar P, Trifonova R, Charisse K, et al. Визуализация липидного высвобождения siRNA из эндосом и нокдауна гена-мишени. Нац биотехнолог. 2015;33(8):870–6.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Сато Ю., Кинами Ю., Хашиба К., Харашима Х.Различная кинетика поглощения липидных наночастиц печенью между рецептором аполипопротеина Е/липопротеина низкой плотности и путем пути рецептора N-ацетил-d-галактозамина/асиалогликопротеина. J Управление выпуском. 2020; 322: 217–26.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Ван Ф., Сяо В., Эльбахнасави М.А., Бао С., Чжэн Ц., Гонг Л. и др. Оптимизация длины линкера конъюгатов манноза-холестерин для усиленной доставки мРНК в дендритные клетки с помощью липосом.Фронт Фармакол. 2018;9:980.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • “>

    Эверс М.Дж., Кулкарни Дж.А., ван дер Меел Р., Каллис П.Р., Вейдер П., Шиффелерс Р.М. Современный дизайн и технологии быстрого смешивания липидных наночастиц для доставки нуклеиновых кислот. Малые методы. 2018;2(9):1700375.

    Артикул КАС Google ученый

  • Belliveau NM, Huft J, Lin PJ, Chen S, Leung AK, Leaver TJ, et al.Микрожидкостный синтез сильнодействующих липидных наночастиц предельного размера для доставки миРНК in vivo. Молекулярные нуклеиновые кислоты. 2012;1:e37.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Kaczmarek JC, Patel AK, Kauffman KJ, Fenton OS, Webber MJ, Heartlein MW, et al. Полимерно-липидные наночастицы для системной доставки мРНК в легкие. Angew Chem Int Ed Eng. 2016;55(44):13808–12.

    КАС Статья Google ученый

  • “>

    Патель А.К., Качмарек Дж.С., Бозе С., Кауфман К.Дж., Мир Ф., Хартлейн М.В. и др.Ингаляционные наноформулированные полиплексы мРНК для производства белка в эпителии легких. Adv Mater. 2019;31(8):e1805116.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Ковальски П.С., Капассо Палмьеро У., Хуанг Ю., Рудра А., Лангер Р., Андерсон Д.Г. Ионизируемые аминополиэфиры, синтезированные посредством полимеризации третичных аминоспиртов с раскрытием кольца, для селективной доставки мРНК в ткани. Adv Mater. 2018;30(34):1801151.

    Артикул КАС Google ученый

  • Dahlman JE, Barnes C, Khan O, Thiriot A, Jhunjunwala S, Shaw TE, et al. Доставка эндотелиальной миРНК in vivo с использованием полимерных наночастиц с низкой молекулярной массой. Нац Нанотехнолог. 2014;9(8):648–55.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • “>

    Хан О.Ф., Ковальски П.С., Долофф Дж.С., Цосие Дж.К., Бактаватчалу В., Винн С.Б. и др.Доставка эндотелиальной миРНК у нечеловеческих приматов с использованием ионизируемых низкомолекулярных полимерных наночастиц. Научная реклама 2018;4(6):eaar8409.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Маккалоу К.С., Милона П., Томанн-Харвуд Л., Демулен Т., Энглезу П., Сутер Р. и др. Доставка самоамплифицирующейся репликон-РНК-вакцины в дендритные клетки с помощью синтетических наночастиц. Вакцины (Базель). 2014;2(4):735–54.

    Артикул Google ученый

  • Чахал Дж. С., Хан О. Ф., Купер С. Л., МакПартлан Дж. С., Цоси Дж. К., Тилли Л. Д. и др. Наночастицы дендример-РНК создают защитный иммунитет против летального вируса Эбола, гриппа h2N1 и токсоплазмы гондии при однократном введении. Proc Natl Acad Sci U S A. 2016;113(29):E4133–42.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Ислам М.А., Сюй Ю., Тао В., Убеллакер Дж.М., Лим М., Аум Д. и др.Восстановление подавления роста опухоли in vivo посредством системной доставки мРНК PTEN, опосредованной наночастицами. Нат Биомед Инж. 2018;2(11):850–64.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Kaczmarek JC, Kauffman KJ, Fenton OS, Sadtler K, Patel AK, Heartlein MW, et al. Оптимизация разлагаемых полимерно-липидных наночастиц для мощной системной доставки мРНК в эндотелий легких и иммунные клетки.Нано Летт. 2018;18(10):6449–54.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • McKinlay CJ, Benner NL, Haabeth OA, Waymouth RM, Wender PA. Улучшенная доставка мРНК в лимфоциты благодаря разнообразным липидным библиотекам высвобождаемых переносчиков, изменяющих заряд. Proc Natl Acad Sci U S A. 2018;115(26):E5859–E66.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Haabeth OAW, Blake TR, McKinlay CJ, Waymouth RM, Wender PA, Levy R.Вакцинация мРНК высвобождаемыми переносчиками с изменяющим заряд индуцирует Т-клеточный ответ человека и излечивает развившиеся опухоли у мышей. Proc Natl Acad Sci U S A. 2018;115(39):E9153–E61.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • McKinlay CJ, Vargas JR, Blake TR, Hardy JW, Canada M, Contag CH и др. Высвобождаемые транспортеры с изменением заряда (CART) для доставки и высвобождения мРНК у живых животных.Proc Natl Acad Sci U S A. 2017;114(4):E448–E56.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • “>

    Scheel B, Teufel R, Probst J, Carralot JP, Geginat J, Radsak M, et al. Толл-подобная рецептор-зависимая активация нескольких типов клеток крови человека протамин-конденсированной мРНК. Евр Дж Иммунол. 2005;35(5):1557–66.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Себастьян М., Папахристофилу А., Вайс С., Фрух М., Катомас Р., Хильбе В. и др.Исследование фазы Ib по оценке самоадъювантной мРНК-вакцины против рака (RNAactive (R)) в сочетании с местным облучением в качестве консолидирующего и поддерживающего лечения для пациентов с немелкоклеточным раком легкого IV стадии. БМК Рак. 2014;14:748.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Sebastian M, Schroder A, Scheel B, Hong HS, Muth A, von Boehmer L, et al. Фаза I / IIa исследования иммунотерапии рака на основе мРНК CV9201 у пациентов с немелкоклеточным раком легкого стадии IIIB / IV. Рак Иммунол Иммунотер. 2019;68(5):799–812.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Кублер Х., Шил Б., Гнад-Фогт У., Миллер К., Шульце-Земанн В., фон Дорп Ф. и др. Самоадъювантная вакцинация мРНК у пациентов с распространенным раком простаты: первое исследование фазы I/IIa на людях. J Иммунный рак. 2015;3:26.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • McCarthy HO, McCaffrey J, McCrudden CM, Zholobenko A, Ali AA, McBride JW, et al.Разработка и характеристика самособирающихся наночастиц с использованием биоинспирированного амфипатического пептида для доставки генов. J Управление выпуском. 2014; 189:141–9.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Удхаякумар В.К., Де Беккелер А., МакКэффри Дж., Маккрадден К.М., Киршман Дж. Л., Вановер Д. и др. Нанокомплексы мРНК на основе богатых аргинином пептидов эффективно стимулируют цитотоксический Т-клеточный иммунитет, зависящий от амфипатической организации пептида.Adv Healthc Mater. 2017;6(13). https://doi.org/10.1002/adhm.201601412.

  • Белл Г.Д., Ян Ю., Леунг Э., Криссансен Г.В. Трансфекция мРНК проникающим в клетку пептидом Xentry-protamine усиливается антагонистом TLR E6446. ПЛОС Один. 2018;13(7):e0201464.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Zhang R, Tang L, Tian Y, Ji X, Hu Q, Zhou B и др. Липосомы, модифицированные DP7-C, усиливают иммунный ответ и противоопухолевый эффект мРНК-вакцины на основе неоантигена.J Управление выпуском. 2020; 328: 210–21.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Татешита Н., Миура Н., Танака Х. , Масуда Т., Оцуки С., Танге К. и др. Разработка носителя мРНК липоплексного типа, состоящего из ионизируемого липида с каркасом витамина Е и пептида KALA, для использования в качестве противораковой вакцины ex vivo на основе дендритных клеток. J Управление выпуском. 2019;310:36–46.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Лу Б., Де Кокер С., Лау С.Й., Хеннинк В.Е., Мастробаттиста Э.Полиплексы мРНК с постконъюгированными пептидами GALA эффективно нацеливаются, трансфицируют и активируют антигенпрезентирующие клетки. Биоконьюг Хим. 2019;30(2):461–75.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Брито Л.А., Чан М., Шоу К.А., Хекеле А., Карсильо Т., Шефер М. и др. Катионная наноэмульсия для доставки РНК-вакцин нового поколения. Мол Тер. 2014;22(12):2118–29.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • “>

    Liu L, Wang Y, Miao L, Liu Q, Musetti S, Li J и др.Комбинированная иммунотерапия нановакциной мРНК MUC1 и блокадой CTLA-4 эффективно ингибирует рост трижды негативного рака молочной железы. Мол Тер. 2018;26(1):45–55.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Ле Муаник А., Малар В., Бенвеню Т., Лемьегре Л., Берчел М., Жафрес П.А. и др. Доклиническая оценка триманнозилированных липополиплексов мРНК в качестве терапевтических противораковых вакцин, нацеленных на дендритные клетки. J Управление выпуском.2018; 278:110–21.

    ПабМед Статья КАС Google ученый

  • Персано С., Гевара М.Л., Ли З., Май Дж., Феррари М., Помпа П.П. и др. Липополиплекс потенцирует противоопухолевый иммунитет при вакцинации на основе мРНК. Биоматериалы. 2017;125:81–9.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • “>

    Олс С., Ян Л., Томпсон Э.А., Пушпарадж П., Тран К., Лян Ф. и др.Путь введения вакцины изменяет перенос антигена, но не врожденный или адаптивный иммунитет. Cell Rep. 2020;30(12):3964–71 e7.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Парди Н., Туишиме С., Мурамацу Х., Карико К., Муи Б.Л., Там Ю.К. и др. Кинетика экспрессии мРНК, модифицированной нуклеозидами, доставляемой в липидных наночастицах мышам различными путями. J Управление выпуском. 2015; 217:345–51.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Li M, Zhao M, Fu Y, Li Y, Gong T, Zhang Z и др.Улучшенная интраназальная доставка мРНК-вакцины за счет преодоления назального эпителиального барьера внутри- и парацеллюлярным путями. J Управление выпуском. 2016; 228:9–19.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • “>

    Guo Y, Lei K, Tang L. Доставка неоантигенной вакцины для персонализированной противоопухолевой иммунотерапии. Фронт Иммунол. 2018;9:1499.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Ван Линт С., Ренманс Д., Бруос К., Геталс Л., Менхаут С., Бентейн Д. и другие.Внутриопухолевая доставка мРНК TriMix приводит к активации Т-клеток путем перекрестного представления дендритных клеток. Рак Иммунол Рез. 2016;4(2):146–56.

    ПабМед Статья КАС Google ученый

  • Jansen Y, Kruse V, Corthals J, Schats K, van Dam PJ, Seremet T, et al. Рандомизированное контролируемое клиническое исследование фазы II аутологичных дендритных клеток, полученных из моноцитов, с электропорацией мРНК (TriMixDC-MEL) в качестве адъювантного лечения пациентов с меланомой стадии III/IV, у которых нет признаков заболевания после резекции макрометастазов. Рак Иммунол Иммунотер. 2020;69(12):2589–98.

    ПабМед Статья КАС Google ученый

  • Wilgenhof S, Van Nuffel AMT, Benteyn D, Corthals J, Aerts C, Heirman C, et al. Фаза IB исследования внутривенной синтетической мРНК-электропорации иммунотерапии дендритных клеток у предварительно леченных пациентов с прогрессирующей меланомой. Энн Онкол. 2013;24(10):2686–93.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Хуо М., Чжао Ю., Саттерли А.Б., Ван Ю., Сюй Ю., Хуан Л.Целенаправленная доставка основания сунитиниба к опухоли улучшает вакцинотерапию прогрессирующей меланомы за счет ремоделирования микроокружения опухоли. J Управление выпуском. 2017; 245:81–94.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Граббе С., Хаас Х., Дикен М., Кранц Л.М. , Ланггут П., Сахин У. Превращение противораковых вакцин с наночастицами в клиническое применение: тематическое исследование с РНК-липоплексами для лечения меланомы. Наномедицина (Лондон).2016;11(20):2723–34.

    КАС Статья Google ученый

  • Ши Ю. Клинический перевод наномедицины и биоматериалов для иммунотерапии рака: прогресс и перспективы. Adv Ther. 2020;3(9):9.

    Google ученый

  • Батич К.А., Митчелл Д.А., Хили П., Херндон Дж.Э. 2-й, Сэмпсон Дж.Х. Один, два, три раза вывод: воспроизводимость испытаний вакцины на дендритных клетках, направленных против цитомегаловируса при глиобластоме.Клин Рак Рез. 2020;26(20):5297–303.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Chen X, Yang J, Wang L, Liu B. Персонализированная неоантигенная вакцинация синтетическими длинными пептидами: последние достижения и перспективы на будущее. Тераностика. 2020;10(13):6011–23.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Кафри Г., Гартнер Дж.Дж., Закс Т., Хопсон К., Левин Н., Пария Б.К. и др.мРНК-вакцино-индуцированный неоантиген-специфический Т-клеточный иммунитет у пациентов с раком желудочно-кишечного тракта. Джей Клин Инвест. 2020;130(11):5976–88.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Отт П.А., Ху З.Т., Кескин Д.Б., Шукла С.А., Сунь Дж., Бозым Д.Дж. и др. Иммуногенная персональная неоантигенная вакцина для больных меланомой. Природа. 2017;547(7662):217-+.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Шахин У., Дерхованесян Э., Миллер М., Клоке Б.П., Саймон П., Лоуэр М. и др.Персонализированные РНК-мутаномные вакцины мобилизуют полиспецифический терапевтический иммунитет против рака.

  • Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.