Содержание

Как правильно писать рекламные отзывы в интернете — Секрет фирмы

Как писать комментарии правильно

Мы разработали свою стратегию, которой следуем в скрытом маркетинге. Делюсь правилами.

1. Враньё должно быть структурировано

Перед началом проекта менеджер разрабатывает тезисную карту, по которой стоит строить сценарии поведения на форумах и площадках. По этой карте потом работают агенты влияния, которые пишут отзывы.

2. Писать без сценария — всё равно что плясать без музыки

Менеджер подбирает площадки исходя из целевых аудиторий. Например, те же кухни могут выбирать и на тематических сайтах, и на обычных женских форумах, и даже на сайтах по дизайну интерьера. Площадки должны быть разноплановые, и сценарии поведения на них разные. Если это профессиональный форум дизайнеров, то необходимо знать профессиональный сленг и уметь на нём изъясняться. Если женский форум — то писать по правилам этого форума, не выбиваться из стиля.

Под каждую площадку прорабатывается примерный сценарий поведения. Где-то подходящей темы нет и её нужно завести, где-то её нужно оживить. В определённый момент на форуме появляется человек, который задаёт нужный вопрос. И ещё несколько с ним вступают в переписку. В таких переписках нельзя сразу хвалить бренд. Мнения должны быть разными, где-то люди обязательно будут сомневаться или задавать дополнительные вопросы. Вот этими сценариями нужно очень чётко дирижировать. Иначе волшебство будет не очень волшебным.

3. Отзывы должны быть уникальными

Каждый отзыв должен быть максимально естественен. Не вздумайте копировать отзывы с одной площадки и вставлять на другую. Если конкуренты решат вам насолить и проверят в поисковиках, вам придётся потом оправдываться очень долго. Ложь должна быть изящной в каждой мелочи.

4. Писать должны живые люди

Избегайте роботов и безликих бирж по заказу комментариев. Старайтесь, чтобы отзывы вам писали настоящие люди. Но они должны говорить с аудиторией на одном языке. Мы специально отбираем разных по темпераменту и подходу людей — так, скрытый маркетинг получается разнообразным, с разными почерками и поведением, что и должно быть в Сети. При этом каждый отзыв должен решать несколько задач: помимо репутации бренда стоит говорить о преимуществах и иногда пенять на конкурентов.

За своей планетой надо ухаживать. За своими «комментаторами» тоже. Все профили лучше снабжать информацией, фотографиями и, помимо рекламных отзывов, общаться и просто так. У нас, например, есть люди, которые, как маленький принц, раз в две недели проходят по всем своим «подопечным» — комментируют, лайкают, общаются.

5. Естественность подачи

В отзывы необходимо добавлять детали, чтобы люди верили агенту влияния. Сначала мы просто читали отзывы других людей и искали детали и подробности, истории из жизни, которые потом аккуратно вплетали в наши отзывы. Но потом пошли ещё дальше.

Чтобы отзывы получались естественными, мы опрашиваем людей и собираем живые истории о поиске кухни, проблемы, с которыми люди действительно сталкивались. И эти жизненные истории используем в скрытом маркетинге.

6. Технические хитрости

Мы понимаем, что на площадках, на которых будем работать, существует техническая модерация и заказные сообщения запрещены как реклама. Следите за своими IP и не забывайте их менять. И очень важно не перелить сладкой патоки. На один негативный отзыв должно приходиться три нейтральных и два-четыре положительных. Это примерная пропорция, которая работает в Сети.

Отзывы владельцев об автомобилях LADA (ВАЗ) Vesta (Лада Веста) на Авто.ру

Общая оценка

34 модели, 422 отзыва

Повторный отзыв Лада Веста

LADA (ВАЗ) Vesta 1.6 MT (106 л.с.)

Приветствую читателей! Итак, может кто помнит, отзыв о Лада Веста я писал около месяца назад, пару дней назад решил его дополнить и с удивлением обнаружил что он исчез. Может я его нечаянно удалил, мо

Отзыв для тех людей, которые хотят купить данный автомобиль.

LADA (ВАЗ) Vesta 1.8 AMT (122 л. с.)

Добрый день. Первый раз пишу отзыв про автомобиль, так получилось, что буду писать про Весту. В 2017 году замаячила перспектива кап.ремонта старого автомобиля — Пежо 308. На семейном совете было прин

Тест-драйв Авто.ру

Lada, которая смогла: что умеет новая медиасистема Весты от Яндекса

Не ТАЗ

LADA (ВАЗ) Vesta 1.6 MT (106 л.с.)

Всем привет! Хочу поделиться отзывом о своем новом автомобиле Лада Веста. Немного предистории. До покупки владел исключительно иномарками, первый авто был праворукий Suzuki Swift 1.3 АКПП (бешеная таб

Пол года на весте

LADA (ВАЗ) Vesta 1.8 MT (122 л.с.)

Всем доброго времени суток. Решил сделать отзыв о своем новом автомобиле. Так получилось что в конце апреля появилась возможность обновить автомобиль. сразу предупрежу что фанатом “Лады” я не являюсь

Разбор Авто.ру

Какой станет Lada Vesta на платформе Логана: наша версия

Смешанные чувства.

LADA (ВАЗ) Vesta 1.8 AMT (122 л.с.)

Доброго времени суток. На момент покупки с Вестой был уже знаком, уже два года машина была в нашей семье. До нее последняя машина была десятилетняя Калина, проблем с ней никогда не было, поэтому и пр

История Белоснежки

LADA (ВАЗ) Vesta 1.6 MT (106 л.с.)

Покупать или подождать? Наверняка такой вопрос задавали себе желающие купить новинку Российского автопрома в далеком 2015 году. Этот вопрос задавал и я. Горячий пирожок, красавица, первый по настоящем

СВ не кросс. Минусы и плюсы.

LADA (ВАЗ) Vesta SW 1.6 MT (106 л.с.)

М‌инусы: 1. Короткая подушка передних сидений, на рапиде сестры ещё хуже: там в дополнении на стыке двух подушек еще неудобная вставка. ‌2. Зимой мёрзнут щетки внизу лобового, (дефлектор дует чуть в

Веста универсал, 1. 6, мкпп, первые партии.

LADA (ВАЗ) Vesta SW 1.6 MT (106 л.с.)

Пишу очередной отзыв о машине. Как обычно многословно и по разделам. Кому что интеречно – читайте! Покупка. Муки выбора. До весты ездил на Датсун Ми-До (хэчбэк), АКПП (да и чего только не было). При

Веста: детские болячки.

LADA (ВАЗ) Vesta 1.6 MT (106 л.с.)

Приветствую всех читателей! Пришло время обновлять автомобиль, выбор стоял между Солярисом-Рио, Фокусом 3, Крузом, Вестой и Калиной 2. Сравнив все вышеперечисленное, пришел к выводу, что нет смысла

Цена-качество, отличное сочетание!

LADA (ВАЗ) Vesta 1.8 AMT (122 л.с.)

Весту покупал новую у официалов и под заказ. Конкретно хотелось максимальную комплектацию цвет серебро-платина и салон, ну и 1,8 на тот момент по дорогам Твери вообще не попадались. Вот и получил чере

Всё о LADA (ВАЗ) Vesta

Рейтинг модели — 4.4 / 5

Отзывы – Сеть гипермаркетов САМБЕРИ

Выберите гипермаркет, о котором вы пишете отзыв Не выбранг. Уссурийск, ул. Дзержинского, 93Бг. Находка, ул. Спортивная, 2г. Находка, Проспект Мира, 49г. Хабаровск, ул. Серышева, 25г. Хабаровск, ул. Карла Маркса, 202 (ТЦ «Стрелка»)г. Владивосток, ул. Калинина, 8г. Белогорск, ул. Ленина, 30г. Благовещенск, ул. Тенистая, 160 (ТЦ «Флагман»)г. Фокино, ул. Клубная, 15 А (ТЦ «Меридиан»)г. Находка, ул. Школьная, 1б (ТЦ “Апельсин”)г. Владивосток, ул. Русская, 2 Кг. Владивосток, ул. Полетаева, 6 (ТЦ «Седанка сити»)г. Владивосток, ул. Крыгина, 23 (р-н Эгершельд)г. Владивосток, ул. Черемуховая, 15 (ТЦ «Черемушки»)г. Уссурийск, пр. Блюхера, 15 (ДК им. Чумака)г. Уссурийск, ул. Краснознамённая, 224 Аг. Комсомольск-на-Амуре, ул. Дикопольцева, 29/бг. Комсомольск-на-Амуре, ул. Димитрова, 14 (ТЦ “БУМ”)г. Комсомольск-на-Амуре, ул. Кирова, 56 (ТЦ «Выбор»)г. Биробиджан, ул. Шолом-Алейхема, 72г. Биробиджан, ул. Советская, 58 (ТЦ “Великан”)г. Хабаровск, ул. Большая, 88 (ТЦ «Горизонт»)г. Хабаровск, ул. Краснореченская, 90г. Хабаровск, ул. Суворова, 25а (ТЦ «Южный парк»)г. Хабаровск, ул. Воронежская, 31г. Хабаровск, ул. Ленинградская, 28 (ТЦ «Макси Молл»)г. Хабаровск, ул. Батуевская ветка, 20г. Хабаровск, ул. Краснореченская, 92 (ТЦ “Атриум”)г.

Хабаровск, ул. Трехгорная, 98г. Хабаровск, ул. Окружная, 13 А (ТЦ «Простор»)г. Хабаровск, ул. Павла Морозова, 58г. Хабаровск, ул. Шкотова, 15

Содержание отзыва

Ваше имя

Контакты для ответа

Отправить

ОПИСАНИЕ БЛАНКА ПАСПОРТА ГРАЖДАНИНА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ / КонсультантПлюс

Утверждено

Постановлением Правительства

Российской Федерации

от 8 июля 1997 г. N 828

 

КонсультантПлюс: примечание.

Бланки, изготовленные до 16.07.2021, используются до их израсходования, паспорта, оформленные на таких бланках, действительны впредь до их замены в установленные сроки (Постановление Правительства РФ от 15. 07.2021 N 1205).

Список изменяющих документов

(в ред. Постановлений Правительства РФ от 25.09.1999 N 1091,

 

1. Бланк паспорта гражданина Российской Федерации (далее именуется – бланк паспорта) изготавливается по единому образцу с указанием всех реквизитов на русском языке.

2. Бланк паспорта имеет размер 88 x 125 мм, состоит из обложки, приклеенных к обложке форзацев и содержит 20 страниц, из них 14 страниц имеют нумерацию в орнаментальном оформлении, продублированную в центре страницы в фоновой сетке.

Бланк паспорта сшит по всей длине корешка двухцветной нитью с пунктирным свечением в ультрафиолетовом излучении.

Бланк паспорта и вкладыш изготавливаются с использованием специальной бумаги, содержащей 3 вида защитных волокон.

Внутренние страницы бланка паспорта и вкладыш имеют видимое на просвет изображение общего водяного знака, содержащего при рассмотрении в проходящем свете объемные начертания букв “РФ”.

В бумагу девятнадцатой и двадцатой страниц введена защитная металлизированная нить, меняющая цвет в зависимости от угла зрения, отдельные участки нити видны на поверхности девятнадцатой страницы.

(см. текст в предыдущей редакции)

3. Нумерация бланка паспорта состоит из 3 групп цифр. Первые 2 группы, состоящие из 4 цифр, обозначают серию бланка паспорта, третья группа, состоящая из 6 цифр, обозначает номер бланка паспорта.

Нумерация бланка паспорта воспроизведена:

в верхней части второй и третьей страниц, в верхней части левого и правого разворота вкладыша – способом высокой печати;

в нижней части пятой – двадцатой страниц, вкладыша, заднего форзаца и обложки – способом лазерной перфорации. Изображение цифр серии и номера бланка паспорта формируется с помощью прожигаемых лазером в бумаге и переплетном материале видимых на просвет отверстий.

(см. текст в предыдущей редакции)

4. Обложка бланка паспорта изготовлена из износостойкого материала темно-красного цвета. В верхней ее части в две строки размещены слова “Российская Федерация”, в середине воспроизведен золотистый тисненый Государственный герб Российской Федерации (без щита), а под ним – слово “паспорт”.

5. В центре переднего форзаца помещено изображение Московского Кремля, под которым расположены типографский рисунок “розетка”.

(см. текст в предыдущей редакции)

6. В верхней части первой страницы бланка паспорта воспроизведено цветное изображение Государственного герба Российской Федерации. В середине (под гербом) в орнаментальном оформлении напечатаны в три строки слова “паспорт гражданина Российской Федерации”. Под словами расположен типографский рисунок “розетка”. Текст и розетка выполнены металлографическим способом печати.

(см. текст в предыдущей редакции)

7. Текст реквизитов и строки для внесения записей на второй, третьей, шестнадцатой и семнадцатой страницах бланка паспорта расположены параллельно сгибу бланка. Строки для внесения записей наносятся с интервалом 6,6 мм.

(в ред. Постановлений Правительства РФ от 25.09.1999 N 1091, от 05.01.2001 N 7)

(см. текст в предыдущей редакции)

8. В верхней части второй страницы бланка паспорта размещены по центру выполненные офсетным способом печати слова “Российская Федерация”, ниже – слова “Паспорт выдан”, “Дата выдачи”, “Код подразделения”, “Личная подпись”.

(в ред. Постановлений Правительства РФ от 20.12.2006 N 779, от 15.07.2021 N 1205)

(см. текст в предыдущей редакции)

В левом нижнем углу страницы напечатана подстрочная черта для подписи руководителя подразделения, выдавшего паспорт, и отведено место для проставления печати, обозначенное буквами “М.П.”.

(см. текст в предыдущей редакции)

9. Третья страница бланка паспорта предназначена для размещения сведений о личности владельца паспорта. Страница состоит из 2 частей: верхние три четверти страницы – визуальная зона, в которой слева размещена фотография владельца паспорта размером 35 x 45 мм, а справа – следующие реквизиты, выполненные офсетным способом печати:

“Фамилия”;

“Имя”;

“Отчество”;

“Пол”;

“Дата рождения”;

“Место рождения”.

Место для размещения фотографии обозначено уголками. В верхней и нижней частях поля для фотографии располагаются 2 прямоугольные реперные метки черного цвета, которые используются для позиционирования принтера при заполнении бланка. После размещения фотографии реперные метки визуально неразличимы. Нижняя четверть страницы, противоположная сгибу, – зона для внесения машиночитаемых записей.

(см. текст в предыдущей редакции)

С целью защиты сведений о личности:

третья страница при высокой температуре ламинируется пленкой с голографическим изображением;

в правом верхнем углу третьей страницы расположен элемент, имеющий форму окружности, с буквами “РФ”. В зависимости от угла зрения элемент меняет свой цвет с пурпурного на зеленый.

На четвертой странице записи и отметки не производятся.

Машиночитаемая запись содержит в соответствии с требованиями и стандартами, предъявляемыми к машиночитаемым проездным документам, основную информацию, имеющуюся в этом документе: фамилию, имя, отчество, дату рождения (число, месяц, год) владельца паспорта, пол владельца паспорта, серию и номер паспорта, код подразделения, выдавшего паспорт, дату выдачи паспорта, а также обозначения типа документа, государства, выдавшего паспорт, гражданства владельца паспорта.

Правила и способ формирования машиночитаемой записи устанавливаются Министерством внутренних дел Российской Федерации по согласованию с заинтересованными федеральными органами исполнительной власти.

(см. текст в предыдущей редакции)

(см. текст в предыдущей редакции)

10. Страницы бланка паспорта с пятой по двенадцатую предназначены для проставления отметок о регистрации гражданина и снятии его с регистрационного учета по месту жительства. В верхней части пятой страницы с ориентацией по центру размещен реквизит “Место жительства”.

(в ред. Постановлений Правительства РФ от 25.09.1999 N 1091, от 05.01.2001 N 7)

(см. текст в предыдущей редакции)

До 31 декабря 2004 г. на двенадцатую страницу бланка паспорта также вклеиваются фотографии детей – граждан Российской Федерации, не достигших 14-летнего возраста.

11. Тринадцатая страница бланка паспорта предназначена для проставления отметок об отношении гражданина к воинской обязанности. В верхней части тринадцатой страницы с ориентацией по центру размещен реквизит “Воинская обязанность”.

12. Четырнадцатая и пятнадцатая страницы бланка паспорта предназначены для производства отметок о регистрации и расторжении брака. В верхней части четырнадцатой страницы с ориентацией по центру размещен реквизит “Семейное положение”.

13. Шестнадцатая и семнадцатая страницы бланка паспорта предназначены для внесения сведений о детях владельца паспорта, подписи должностного лица, выдавшего паспорт, и проставления печати территориального органа Министерства внутренних дел Российской Федерации. В верхней части семнадцатой страницы бланка паспорта (параллельно сгибу) с ориентацией по центру размещен реквизит “Дети”. На семнадцатой странице с продолжением на шестнадцатую расположена таблица, состоящая из восемнадцати строк и четырех граф (слева направо): “Пол”, “Фамилия, имя, отчество”, “Дата рождения”.

(в ред. Постановлений Правительства РФ от 20.12.2006 N 779, от 07.07.2016 N 644, от 15.07.2021 N 1205)

(см. текст в предыдущей редакции)

14. Восемнадцатая и девятнадцатая страницы бланка паспорта предназначены для внесения отметок о группе крови и резус-факторе владельца паспорта, о его идентификационном номере налогоплательщика, о получении основного документа, удостоверяющего личность гражданина Российской Федерации за пределами территории Российской Федерации, а также о ранее выданных основных документах, удостоверяющих личность гражданина Российской Федерации на территории Российской Федерации.

(см. текст в предыдущей редакции)

(см. текст в предыдущей редакции)

16. В верхней части двадцатой страницы бланка паспорта расположен типографский рисунок – орнаментальная бордюрная полоса с ориентацией по центру, под рисунком напечатан заголовок “Информация для владельца паспорта” и далее воспроизведен следующий текст:

“1. Паспорт является основным документом, удостоверяющим личность гражданина Российской Федерации на территории Российской Федерации.

2. Паспорт обязаны иметь все граждане Российской Федерации, достигшие 14-летнего возраста и проживающие на территории Российской Федерации.

3. По достижении гражданином 20-летнего и 45-летнего возраста, в случае изменения сведений о личности, размещенных на третьей странице паспорта, непригодности паспорта для дальнейшего использования, обнаружения неточности или ошибочности произведенных в паспорте записей либо внесения в него сведений, отметок и (или) записей, не предусмотренных Положением о паспорте гражданина Российской Федерации, паспорт подлежит замене.

4. Паспорт, подлежащий замене в связи с достижением гражданином 20-летнего и 45-летнего возраста, является действительным до оформления нового паспорта, но не более чем 90 дней после дня возникновения указанных обстоятельств.

5. Гражданин обязан бережно хранить паспорт. В случае утраты паспорта необходимо незамедлительно обратиться с заявлением в территориальный орган Министерства внутренних дел Российской Федерации.

6. Изъятие у гражданина паспорта, кроме случаев, предусмотренных законодательством Российской Федерации, запрещается.”.

(см. текст в предыдущей редакции)

17. Гражданин обязан бережно хранить паспорт. Об утрате паспорта гражданин должен незамедлительно заявить в территориальный орган Министерства внутренних дел Российской Федерации.

(в ред. Постановлений Правительства РФ от 20.12.2006 N 779, от 07.07.2016 N 644)

(см. текст в предыдущей редакции)

22. Запрещается изъятие у гражданина паспорта, кроме случаев, предусмотренных законодательством Российской Федерации”.

17. На пятой, седьмой, девятой, одиннадцатой, тринадцатой, пятнадцатой и девятнадцатой страницах напечатано выполненное стилизованными буквами в орнаментальном оформлении слово “Россия”.

(в ред. Постановлений Правительства РФ от 25.09.1999 N 1091, от 05.01.2001 N 7)

(см. текст в предыдущей редакции)

В бланке паспорта могут быть применены специально разработанные вшиваемые или вкладываемые элементы, предназначенные для повышения сохранности вносимых записей или для защиты бланка и произведенных в нем записей от подделок.

 

 

Спектакль «Бердичев» — отзывы зрителей

Спектакль «Бердичев» в театре Маяковкого

Драма в 6 эпизодах, 30 годах и 68 скандалах

Автор пьесы – драматург, прозаик, сценарист Фридрих Горенштейн. В России известен прежде всего своими работами в кино: автор сценариев к фильмам «Солярис» Андрея Тарковского, «Раба любви» Никиты Михалкова и др.

«Бердичев» – сага о послевоенной жизни, охватывающей тридцать лет – с 1945 по 1975 год. В центре повествования – судьба двух сестёр, Рахили и Злоты, и их семьи. Здесь шьют платья на заказ, а также скандалят, проклинают так, что от этих проклятий можно лежать в земле разрезанными на кусочки. Здесь варят варенье и хороший суп «с мука и говяжий жир», а Брофенмахер из горкомхоза хочет носить через эту квартиру свои помои. Но у него это не получится: у Рахили – характер. Рахиль невозмутимо гладит белье и также невозмутимо кричит «Пожар!». И также невозмутимо живет жизнь.

С двумя женщинами проживает злобный подросток Виля (свой характер Горенштейн выписал беспощадно), который тоже постоянно их проклинает. Плача и смеясь, герои говорят «Ой вей з мир! Я имею отрезанные годы!» Об этих отрезанных годах – о жизни – и речь в спектакле. Шифоньер, швейная машинка Зингер, обеденный стол, кровати с железной спинкой, салфетки ришелье – в спектакле живет и дышит послевоенный советский быт, который сохранялся десятилетиями, хоть менялись радиолы и добавлялись холодильники.

Буфет, центр этой бердичевской космогонии, незыблем все 30 лет: потому что буфет – это буфет. На сцене воссоздана и бердичевская водонапорная башня – но уже в театральном макете. Башня сгорала, была разрушена, перекрашена – у нее как и у семьи Капцан-Луцких биография на фоне эпохи.

Режиссер Никита Кобелев: «Это пьеса касается не только еврейской семьи, но и самого понятия семьи. Рахиль, основная героиня, портит жизнь дочери и очень сильно влияет на судьбу своих детей, да и всех окружающих. Но чем больше они стараются стать непохожими на родителей, тем, видимо, больше между ними появляется сходства. История рода – это почти всегда конфликт нового поколения и предыдущего. У Горенштейна он тоже есть. Но сквозь конфликты в этой семье проступает привязанность, любовь, которая глубоко скрыта, возникают очень странные, тонкие связи между людьми, которым пришлось жить долго – в одно время, в одном месте. Спектакль «Бердичев» – это история рода еще и в том смысле, что при всех разрушительных процессах остается стержень отношений и, конечно, остается память.

Они вспоминают тех, кого уж нет, и через одну семью в еврейском городке перед нами встает история XX века».

Дорогие зрители, просим вас обратить внимание, что рассадка зрителей на спектаклях осуществляется 2 через 2 кресла, что обеспечивает соблюдение необходимой дистанции.
В случае, если вы бы хотели приобрести один билет, либо посетить спектакль группой, просим Вас предварительно обратиться в кассу театра.
Помните: если вы приобретаете один билет, рядом с вами может оказаться посторонний человек.

Producer: ГБУК г. Москвы “Московский академический театр им. Вл. Маяковского”

Невропатология для нейрорадиолога: розетки и псевдорозетки

Резюме

РЕЗЮМЕ: Невропатологическая диагностика опухолей головного мозга влечет за собой микроскопическое исследование обычных фиксированных формалином образцов ткани, залитых парафином, хирургически удаленных из рентгенологически определяемого поражения. Предварительный диагноз часто ставится с помощью замороженных срезов, хотя окончательный или окончательный диагноз обычно требует более тщательных исследований. Обычно ткань сначала фиксируется минимум на несколько часов в 10% нейтральном забуференном формалине, обрабатывается с помощью ряда обезвоживающих и очищающих реагентов и заливается в твердый воск, такой как парафин.Последний позволяет тонко разрезать ткань микротомом, переносить на предметное стекло и затем окрашивать красителями, такими как гематоксилин-эозин (H&E), которые контрастируют с различными клеточными элементами. Патологи полагаются на визуальные подсказки, такие как распознавание образов, при исследовании окрашенной ткани под микроскопом, так же как радиологи полагаются на серые образцы плотности и интенсивности на изображениях. Некоторые гистологические паттерны клеточной архитектуры отличительны, если не патогномоничны, тогда как другие менее специфичны, но, тем не менее, значительно сужают дифференциальный диагноз. Точные биологические основы некоторых наблюдаемых микроскопических паттернов изучены плохо, но, тем не менее, их распознавание остается полезным. Хотя были разработаны более продвинутые методы исследования тканей, такие как гистохимическое и иммуногистохимическое профилирование, генетический анализ и электронная микроскопия, микроскопический обзор материала, окрашенного гематоксилином и эозином, остается важным компонентом диагностики опухолей.

Одним из часто встречающихся нейропатологических гистологических архитектурных паттернов, наблюдаемых в некоторых опухолях, является розетка.Цель этого отчета – рассмотреть паттерны розеток и псевдорозеток в контексте таких опухолей, как медуллобластома / примитивная нейроэктодермальная опухоль (PNET), ретинобластома, эпендимома, центральная нейроцитома и пинеоцитома.

Что такое розетки?

Розетки состоят из ореола или спицевого колеса ячеек, окружающих центральный сердечник или ступицу (рис. 1). Центральный узел может состоять из пустого просвета или пространства, заполненного цитоплазматическими отростками. Цитоплазма каждой из клеток розетки часто имеет клиновидную форму с вершиной, направленной к центральному ядру; ядра клеток, участвующих в розетке, расположены по периферии и образуют кольцо или ореол вокруг центра. 1,2 Названный в честь цветочного архитектурного орнамента, этот узор напоминает окна-розы во многих готических соборах (рис. 2). Розетки можно рассматривать как первичные или вторичные проявления архитектуры опухоли. Первичные розетки образуются как характерный образец роста для данного типа опухоли, тогда как вторичные розетки возникают в результате влияния внешних факторов на рост опухоли. Например, в последнем случае регрессивное набухание клеток может центростремительно перемещать цитоплазму, когда ядро ​​сдавливается к периферии. 2 Хотя наличие первичных розеток может указывать на данный диагноз, обычно только это открытие не считается абсолютно патогномоничным для одного конкретного типа опухоли. Неоднозначная терминология и описания в прошлом добавили путанице в использовании этого термина; однако несколько типов первичных розеток обычно распознаются в литературе по патологии.

Розетка Гомера Райта

Розетка Гомера Райта названа в честь Джеймса Гомера Райта (1869–1928), первого директора лаборатории патологии Массачусетской больницы общего профиля и разработчика красителя Райта. 3 Он распознал группу опухолей надпочечников и симпатической нервной системы, которые стали известны как нейробластомы, и описал внутри этих поражений характерное шарообразное расположение клеток, которые окружают сетку волокон (рис. 3). Эти волокна не окрашивались, как те, что связаны с нейроглией, и он предположил, что они представляют собой примитивные нейронные процессы, напоминающие процессы в развивающейся симпатической нервной системе. 4

Типичная розетка Гомера Райта с ее центральным просветом или центром, заполненным волокнистыми отростками, также может быть обнаружена в медуллобластомах и гистологически подобных опухолях, возникающих за пределами мозжечка, обозначенных PNET (рис. 4⇓).Хотя клеточные механизмы, ответственные за образование розеток внутри медуллобластом, и значение этих розеток до конца не изучены, большинство исследователей полагают, что их присутствие указывает на дифференцировку нейронов. 5,6 Тонкий фибриллярный материал, находящийся в центральном просвете розетки Гомера Райта, состоит из нейропиля, который содержит примитивные нейронные отростки или нейриты.

Хотя большинство медуллобластом считаются примитивными, различная степень дифференцировки почти всегда встречается на микроскопическом, иммуногистохимическом и ультраструктурном уровнях. 5–7 Более того, некоторые клетки медуллобластомы в образцах и культурах продемонстрировали микротрубочки, нейросекреторные везикулы с ослабленным ядром и четко центрированные синаптические пузырьки и синаптические соединения, все из которых характерны как для нейробластов, так и для зрелых нейронов. 8,9 Независимо от подтипа медуллобластомы, иммуногистохимические доказательства дифференцировки нейронов обнаруживаются почти во всех случаях с помощью нейрональных маркеров, таких как синаптофизин, нейрон-специфическая энолаза и белок нейрофиламентов. 5,10 Некоторые медуллобластомы могут также демонстрировать другие формы дифференцировки, что демонстрируется присутствием астроцитарного маркера глиального фибриллярного кислого белка. 8,11 Скелетные мышцы и меланоцитарная дифференцировка встречаются значительно реже и определяют варианты медулломиобластомы и меланотической медуллобластомы соответственно.

Хотя значение розетки в медуллобластомах, по-видимому, отражает дифференцировку нейронов в частях в остальном примитивной опухоли, механизм формирования характерного рисунка розетки полностью не понят.Считается, что популяции клеток, проявляющие нейрональную дифференцировку, секретируют поверхностные гликопротеины и гликолипиды, которые опосредуют распознавание и адгезию между клетками. 7,9,12–17 Одна из гипотез состоит в том, что эти липкие поверхностные маркеры клеток заставляют развивающиеся клеточные тела группироваться или агрегироваться, а их примитивные нейриты запутываться. По мере роста клеток клубок нейритов остается в центре, а тела клеток сдавливаются к периферии, что объясняет структуру розетки. 5

Хотя идентификация розеток Гомера Райта в опухоли задней черепной ямки почти патогномонична диагностике медуллобластомы, розетки встречаются только в трети этих опухолей. Более того, розетки Гомера Райта могут быть обнаружены в других опухолях, таких как супратенториальные PNET и пинеобластомы. 18 Для опухолей, состоящих только из примитивных клеток, окончательный диагноз основывается на дополнительных методах, таких как специальные окрашивания и иммуногистохимический анализ.

Flexner-Wintersteiner Rosette

Саймон Флекснер (1863–1946), чей брат Абрахам Флекснер написал знаменитый доклад о реформе медицинского образования, носящий его имя, сам по себе был патологом-новатором. Он был назначен главой отделения патологии, а затем директором только что основанного института Рокфеллера. В дополнение к описанию бациллы, ответственной за дизентерию, Флекснер отметил отличительные кластеры клеток в детской глазной опухоли, которую он назвал ретиноэпителиомой. 19–21 Несколько лет спустя, в 1897 году, австрийский офтальмолог Хуго Винтерштайнер (1865–1946) согласился с наблюдениями Флекснера и отметил, что кластеры клеток напоминают палочки и колбочки. 22 Эти клеточные агрегаты были названы розетками и впоследствии были признаны важными особенностями ретинобластом. Опухолевые клетки, которые образуют розетку Flexner-Wintersteiner, ограничивают центральный просвет, который содержит небольшие цитоплазматические расширения окружающих клеток; однако, в отличие от центра розетки Гомера Райта, центральный просвет не содержит богатого клетчаткой нейропиля (Рис. 5).Как и розетка Гомера Райта, розетка Flexner-Wintersteiner означает особую форму дифференцировки опухоли. 23–26 Это утверждение подтверждается данными электронной микроскопии, согласно которым опухолевые клетки, образующие розетку Flexner-Wintersteiner, имеют ультраструктурные особенности примитивных фоторецепторных клеток. 27 Кроме того, просвет розетки имеет особые окрашивающие свойства, аналогичные свойствам палочек и колбочек. 28 Хотя этот тип розетки особенно характерен для ретинобластом (рис. 6), его также можно увидеть в пинеобластомах и медуллоэпителиомах, где аналогично считается, что они представляют дифференцировку сетчатки. 18,23

Настоящая эпендимальная розетка

Другой образец розетки может быть продемонстрирован в подмножестве эпендимом и был назван «истинной эпендимальной розеткой» 6,29,30 (Рис. 7). В отличие от розеток Гомера Райта и Флекснера-Винтерштайнера пустотелый просвет истинной эпендимальной розетки напоминает просвет канальца и не содержит богатых клетчаткой нейропиля или центральных цитоплазматических выступов. Эти канальцевидные структуры, а также более удлиненные версии, известные как эпендимальные каналы, могут представлять собой попытку опухолевых клеток воспроизвести формирование желудочков с эпендимными оболочками. 6,18 Эта розетка дает убедительные доказательства дифференцировки эпендимы на уровне светового микроскопа. 29 К сожалению, настоящие эпендимные розетки и каналы обнаруживаются только в меньшинстве наиболее хорошо дифференцированных эпендимом и чаще всего в инфратенториальных примерах 29 (Рис. 8). По иронии судьбы подобная структура, известная как эпендимобластная розетка, встречается в редкой форме PNET, известной как эпендимобластома, где они, как полагают, обозначают эпендимальную дифференцировку при очень примитивном злокачественном новообразовании.

Периваскулярная псевдорозетка

Четвертый тип розетки – периваскулярная псевдорозетка. В этом паттерне спицевидное расположение ячеек с конусообразными ячеистыми отростками излучается вокруг стенки расположенного в центре сосуда 2,7,18 (рис. 9). Модификатор «псевдо» отличает этот паттерн от розеток Гомера Райта и Флекснера-Винтерштайнера, возможно, потому, что центральная структура фактически не формируется самой опухолью, а вместо этого представляет собой нативный, неопухолевый элемент.Кроме того, некоторые ранние исследователи спорили об определении центрального просвета, выбирая «псевдо», чтобы указать, что центр не является истинным просветом, а содержит структуры. 31 Тем не менее, этот шаблон остается чрезвычайно полезным с диагностической точки зрения, и модификатор без надобности приводит к путанице. Периваскулярные псевдорозетки встречаются в большинстве эпендимом независимо от степени или варианта. Таким образом, они значительно более чувствительны для диагностики эпендимомы, чем истинные эпендимные розетки 18,30,32 (рис. 10).К сожалению, периваскулярные псевдорозетки также менее специфичны в том смысле, что они также встречаются в медуллобластомах, PNET, центральных нейроцитомах и, реже, в глиобластомах, а также в редких детских опухолях, мономорфных пиломиксоидных астроцитомах.

Причина тенденции некоторых клеток эпендимомы располагаться вокруг кровеносных сосудов плохо изучена. В зависимости от своего местоположения эпендимные клетки могут иметь 2 полюса клеток. Люминальный полюс проецируется на эпендимную выстилку желудочка, а «субмезенхимальный полюс» проецируется на поверхность мозга, демонстрируя глиальные отростки и расположенные на периферии ступни. 33 Фрида и Поллак концептуализируют архитектуру эпендимомы как примитивную нервную трубку, вывернутую наизнанку, с субмезенхимальными полюсами, сходящимися к центральному сосуду, таким образом формируя псевдорозетку, а не центробежно выступающую к мягкой мозговой оболочке. 33 Кровеносные сосуды псевдорозетки часто фиброзные и гиалинизированные. 32

Пинеоцитоматозные и нейроцитарные розетки

Пинеоцитомы и центральные нейроцитомы представляют собой хорошо дифференцированные нейрональные новообразования с небольшими округлыми ядрами, аналогичными тем, которые обычно встречаются во внутреннем зернистом слое мозжечка или зубчатой ​​фасции гиппокампа.Хотя они, вероятно, происходят от немного разных предшественников, гистологические особенности этих двух опухолей практически идентичны, включая их тенденцию к образованию розеток, богатых нейропилем, которые называются пинеоцитоматозными розетками в пинеоцитомах и нейроцитарными розетками в центральной нейроцитоме (рис. ). Обе они очень похожи на розетки Гомера Райта, но в целом они больше и имеют более неправильный контур 34 (рис. 12). Как и в других обсуждаемых типах розеток, обычно считается, что наличие пинеоцитоматозных или нейроцитарных розеток отражает дифференцировку опухоли, в данном случае нейрональной. 35,36 Клетки пинеоцитоматозной и нейроцитарной розеток также считаются гораздо более дифференцированными, чем клетки, образующие розетки Гомера Райта, в том смысле, что ядра немного больше, более округлые, гораздо менее митотически активные и более бледные или менее гиперхроматические. 37 В редких случаях эти розетки могут собираться в лист смежных кластеров, напоминающих полевую каменную мостовую.

Заключение

Таким образом, розетки и псевдорозетки представляют собой гистологический архитектурный паттерн, наблюдаемый в определенных опухолях нервной системы (таблица).Рисунок розетки состоит из ореола или спицевого колеса клеток, окружающих центральное ядро ​​или ступицу, которые могут быть пустыми или содержать волокна, цитоплазматические отростки или кровеносный сосуд. Хотя значение наличия розеток не всегда понимается, большинство специалистов согласны с тем, что они представляют собой различные формы дифференцировки опухолей. Наличие розеток редко, если вообще когда-либо, является патогномоничным для конкретной опухоли, хотя идентификация розеток часто помогает при гистологической диагностике медуллобластомы / PNET, ретинобластомы, эпендимомы, центральной нейроцитомы и пинеоцитомы.

Примечание: В этом выпуске журнала появилась новая рубрика «Специальный отчет». Эта серия коротких патологических описаний будет написана Джеем Виппольдом и сотрудниками Медицинской школы Вашингтонского университета. Первая из серии посвящена розеткам и псевдорозеткам, а за ней ежеквартально будут следовать другие интересные темы, а именно волокна Розенталя; палисадинг / псевдопалисадинг; Бляшки и клубки болезни Альцгеймера; и флуоресцентная гибридизация in situ (FISH).

Роберт М. Квенсер

Рис. 1.

Схема типичной розетки, демонстрирующей ореол клеток, окружающих центральный просвет. Адаптировано из Ellison et al (2004) 34 с разрешения.

Рис. 2.

Пример окна-розы в соборе. Фотография любезно предоставлена ​​соборной базиликой Сент-Луиса, использована с разрешения.

Рис. 3.

Схема розетки Гомера Райта. Ореол клеток окружает центральный узел, содержащий сеть волокон. Адаптировано из Ellison et al (2004) 34 с разрешения.

Рис. 4.

Микрофотография из PNET, демонстрирующая несколько розеток Гомера Райта. Галообразный кластер клеток в каждой розетке окружает центральную область нейропиля, богатого клетчаткой (H&E; исходное увеличение 400 ×).

Рис. 5.

Схема розетки Flexner-Wintersteiner. Ореол клеток окружает почти пустой центральный узел. Небольшие цитоплазматические отростки клеток выступают в просвет.Адаптировано из Ellison et al (2004) 34 с разрешения.

Рис. 6.

Микрофотография ретинобластомы, показывающая несколько розеток Flexner-Wintersteiner. Галообразный кластер клеток в каждой розетке окружает почти пустой центральный просвет, содержащий мелкие цитоплазматические отростки (H&E; исходное увеличение 400 ×). Микрофотография, щедро подаренная доктором Мортоном Смитом, отделением офтальмологической патологии, Вашингтонский университет, Сент-Луис.

Рис. 7.

Схема истинной эпендимальной розетки.Ореол клеток окружает пустой просвет. Адаптировано из Ellison et al (2004) 34 с разрешения.

Рис. 8.

Микрофотография эпендимомы, показывающая несколько истинных эпендимных розеток. Галообразный кластер клеток в каждой розетке окружает пустой центральный просвет (H&E; исходное увеличение 400 ×).

Рис. 9.

Схема периваскулярной псевдорозетки. Ореол клеток окружает кровеносный сосуд. Адаптировано из Ellison et al (2004) 34 с разрешения.

Рис. 10.

Микрофотография эпендимомы, на которой видны 2 видных периваскулярных псевдорозетки. Галообразный кластер клеток в каждой розетке окружает кровеносный сосуд. Обратите внимание на несколько меньших истинных эпендимных розеток (H&E; исходное увеличение 200 ×).

Рис. 11.

Схема нейроцитарной розетки. Эта розетка похожа на розетку Гомера Райта, но центральный богатый клетчаткой островок нейропила больше и имеет более неправильную форму. Адаптировано из Ellison et al (2004) 34 с разрешения.

Рис. 12.

Микрофотография центральной нейроцитомы, содержащей нейроцитарную розетку неправильной формы с центральным нейропилем (H&E; исходное увеличение 400 ×).

Сводка по рисунку розеток и ассоциированным опухолям

Ссылки

  1. Ellison D, Love S, Chimelli L, et al. Патологические реакции в ЦНС . В кн .: Невропатология: справочник по патологии ЦНС. Эдинбург: Мосби, 2004; 3–25

  2. Zulch KJ.Опухоли головного мозга: их биология и патология. 3-е изд. Берлин: Springer-Verlag; 1986: 118–34

  3. Lee RE, Young RH, Castleman B. Джеймс Гомер Райт: биография загадочного создателя пятна Райта по случаю его столетнего юбилея . Am J Surg Pathol 2002; 26: 88–96

  4. Wright JH. Нейроцитома или нейробластома, разновидность опухоли, которая не является общепризнанной . J Exp Med 1910; 12: 556–61

  5. Katsetos CD, Liu HM, Zacks SI. Иммуногистохимические и ультраструктурные наблюдения за розетками Гомера Райта (нейробластами) и «бледными островками» медуллобластом мозжечка человека . Hum Pathol 1988; 19: 1219–27

  6. Rubinstein LJ. Медуллобластома мозжечка: ее происхождение, дифференциация, морфологические варианты и биологическое поведение . В: Винкен П.Дж., Брюн Г.В., ред. Справочник по клинической неврологии. Том 18. Амстердам: Elsevier; 1975: 167–93

  7. Лю Х.М., Бейли О.Т. Невропатология . В: Амадор Л.В., изд. Опухоли головного мозга у молодых. Спрингфилд, штат Иллинойс: Чарльз К. Томас; 1983: 361–456

  8. Герман М.М., Рубинштейн Л.Дж. Дивергентная глиальная и нейрональная дифференцировка в медуллобластоме мозжечка в системе органной культуры: наличие синаптических лент in vitro . Acta Neuropathol 1984; 65: 10–24

  9. Moss TH. Доказательства дифференциации медуллобластом, кажущихся примитивными при световой микроскопии: ультраструктурное исследование .Histopathology 1983; 7: 919–30

  10. Burger PC, Grahmann FC, Bliestle A, et al. Дифференциация медуллобластомы . Acta Neuropathol (Берлин) 1987; 73: 115–23

  11. Barnard RO, Pambakian H. Астроцитарная дифференцировка в медуллобластоме . J Neurol Neurosurg Psychiatry 1980; 43: 1041–44

  12. Nakai J. Исследования механизма, определяющего ход нервных волокон в культуре ткани .Zeitschr Zellforschung 1960; 52: 427–49

  13. Pannese E. Гистогенез спинномозговых ганглиев. Adv Anat Embryol Cell Biol 1974; 47: 7–16

  14. Willis RA. Нервная система и органы чувств . В кн .: На стыке эмбриологии и патологии. Лондон: Баттервортс; 1962: 121–23

  15. Pfenninger KL, Rees RP. От конуса роста к синапсу . В кн .: Баронды Ш. Под ред.Распознавание нейронов. Нью-Йорк: Пленум; 1976: 131–78

  16. Москона AA. Распознавание клеток в эмбриональном морфогенезе и проблема нейрональной специфичности . В кн .: Баронды Ш. Под ред. Распознавание нейронов. Нью-Йорк: Пленум; 1976: 205–26

  17. Gilula NB. Щелевые переходы и контакты ячеек . В: Каркинен-Яаскелайнен М., Саксен Л., Вайс Л., ред. Взаимодействие клеток при дифференцировке. Нью-Йорк: Academic Press; 1977: 325–38

  18. Smith TW, Folkerth RD, Poirer J, et al. Опухоли нервной системы . В: Gray F, De Girolami U, Poirer J, ред. Руководство Эскуроля и Пуаре по базовой невропатологии. Филадельфия: Баттерворт Хайнеманн; 2004; 21–56

  19. Flexner S. Своеобразная глиома (нейроэпителиома?) Сетчатки . Johns Hopkins Hosp Bull 1891; 2: 115–19

  20. Schatski SC. Саймон Флекснер . AJR Am J Roentgenol 1997; 169: 1395–96

  21. Bendiner E. Саймон Флекснер: его «скала» была для лет. Hosp Pract 1988; 23: 213–66

  22. Wintersteiner H. Die zellen der geschwulst . В: Das neuroepithelioma retinae: Eine anatomische und klinishe studie. Лейпциг: Franz Deuticke; 1897: 12–16

  23. McLean IW, Burnier MN, Zimmerman LE et al. Опухоли сетчатки . В кн .: Атлас опухолевой патологии: опухоли глаза и придатков глаза. Вашингтон, округ Колумбия: Институт патологии вооруженных сил; 1994: 97–154

  24. Доносо Л.А., Шилдс С.Л., Ли EY-H. Иммуногистохимия ретинобластомы . Ophthal Paediatr Genet 1989; 10: 3–32

  25. Врабек Т. , Арбизо В., Адамус Г. и др. Палочко-специфические антигены ретинобластомы . Arch Ophthalmol 1989; 107: 1061–63

  26. Кивела Т. Гликоконъюгаты в ретинобластоме: гистохимическое исследование лектина десяти опухолей, фиксированных формалином и залитых парафином . Virchows Arch A 1987; 410: 471–79

  27. Ts’o MOM, Fine BS, Zimmerman LE. Розетки Flexner-Wintersteiner при ретинобластоме . Arch Pathol 1969; 88: 664–71

  28. Zimmerman LE. Ретинобластома и ретиноцитома . В: Spencer WH, ed. Офтальмологическая патология: атлас и учебник. Филадельфия: WB Saunders; 1985: 1292–351

  29. McLendon RE, Enterline DS, Tien RD и др. Опухоли центрального нейроэпителиального происхождения . В: Bigner DD, McLendon RE, Bruner JM, ред. Патология Рассела и Рубинштейна опухолей нервной системы.6-е изд. Лондон: Arnold1998: 307–571

  30. Burger PC, Scheithauer BW. Опухоли нейроглии и эпителия сосудистого сплетения . В кн .: Атлас опухолевой патологии: опухоли центральной нервной системы. Вашингтон, округ Колумбия: Институт патологии вооруженных сил; 1994; 25–159

  31. Rubinstein LJ. Опухоли нейроглиальных клеток . В кн .: Опухоли центральной нервной системы. Вашингтон, округ Колумбия: Институт патологии вооруженных сил; 1970: 19–126

  32. Бейли П. Исследование опухолей, возникающих из клеток эпендимы . Arch Neurol Psychiatry 1924; 11: 1–27

  33. Friede RL, Pollak A. Цитогенетическая основа классификации эпендимом . J Neuropathol Exp Neurol 1978; 37: 103–18

  34. Ellison D, Love S, Chimelli L, et al. Новообразования шишковидной железы . В кн .: Невропатология: справочник по патологии ЦНС. Эдинбург: Мосби; 2004: 677–84

  35. Хирато Дж. , Наказато Ю. Патология опухолей шишковидной железы . J Neuro-oncol 2001; 54: 239–49

  36. Jouvet A, Saint-Pierre G, Fauchon F, et al. Опухоли паренхимы шишковидной железы: корреляция гистологических признаков с прогнозом в 66 случаях . Brain Pathol 2000; 10: 49–60

  37. Burger PC, Scheithauer BW. Опухоли шишковидной железы . В кн .: Атлас опухолевой патологии: опухоли центральной нервной системы. Вашингтон, округ Колумбия: Институт патологии вооруженных сил; 1994: 227–49

  • Получено 20 июля 2005 г.
  • Принято после пересмотра 26 июля 2005 г.
  • Copyright © Американское общество нейрорадиологов

Определение и значение розетки | Словарь английского языка Коллинза

Примеры ‘розетка’ в предложении

розетка

Эти примеры были выбраны автоматически и могут содержать конфиденциальный контент. Подробнее… Он был настоящей звездой с большой голубой розеткой.

Times, Sunday Times (2007)

Ей 38 лет, у нее длинные светлые волосы и большая синяя розетка.

Times, Sunday Times (2010)

Не осталось бы красной розетки.

Солнце (2016)

Повторите процесс, используя все листы фило, чтобы сформировать розетку.

Times, Sunday Times (2013)

Пение красного флага с зеленой розеткой.

Times, Sunday Times (2014)

Желтые соцветия растут из розетки листьев, на каждой по три листочка.

Times, Sunday Times (2011)

Цветы растут из розетки сердцевидных листьев у основания.

Times, Sunday Times (2009)

Сначала очистите ерш от старых мертвых листьев под розеткой.

Times, Sunday Times (2016)

Его цветы кивают на хрупких стеблях, которые растут прямо из розетки листьев в форме сердца.

Times, Sunday Times (2008)

Вырастает из темно-зеленой розетки листьев и может расти большими колониями.

Times, Sunday Times (2015)

Подробнее …

Это сиденья, на которых можно поставить красную или синюю розетку на заднюю часть осла, и он все равно выиграет.

Times, Sunday Times (2009)

Это большие растения, цветы которых поднимаются на длинных стеблях из центра розетки листьев.

Times, Sunday Times (2012)

У него высокий стебель, поднимающийся из розетки из листьев, а наверху стебля висят многие маленькие трубы.

Times, Sunday Times (2013)

Ресторан изысканной кухни удостоен двух розочек ресторанного гида Автомобильной ассоциации Великобритании.

Times, Sunday Times (2016)

Столовая недавно была удостоена трех розочек ресторанного гида Автомобильной ассоциации Великобритании за высокое качество.

Times, Sunday Times (2009)

Оживленный ресторан, удостоенный двух розочек ресторанного гида Автомобильной ассоциации Великобритании, и суши-бар.

Times, Sunday Times (2012)

Его ресторан был удостоен трех розочек ресторанного гида Автомобильной ассоциации Великобритании в прошлом месяце.

Times, Sunday Times (2009)

Листья образуют розетку, длинные, с неровными краями.

Times, Sunday Times (2012)

Большинство из них было посажено в 1980 и 1981 годах в виде отдельных розеток из листьев.

Эддисон, Сидней Сад в стиле пэчворк: неожиданные удовольствия в загородном саду (1990)

У основания растения, принадлежащего к семейству крессовых, есть красивая розетка из листьев.

Times, Sunday Times (2008)

Есть также ресторан, удостоенный двух розочек ресторанного гида Автомобильной ассоциации Великобритании.

Times, Sunday Times (2013)

Простой рецепт и пошаговое руководство

Розетки

Buttercream – это такой простой и великолепный способ украсить торт.

С помощью открытого звездообразного наконечника, такого как Wilton 1M, эти завитки глазури делают ваш торт похожим на настоящий шедевр.

Если эта техника нова для вас, не волнуйтесь! Я прохожу через все, что вам нужно знать ниже, чтобы приготовить идеальный торт с розеткой.

Я решил сделать торт с фиолетовой розеткой, но вы можете раскрасить сливочный крем в любой цвет!

Какой наконечник для глазировки лучше всего подходит для розеток трубопроводов?

Мой лучший наконечник для трубопровода (и, на мой взгляд, лучший наконечник для трубок) для изготовления розеток из сливочного крема – это открытый наконечник в виде звезды.

Разные бренды делают разные версии этого, но наиболее распространенными являются Wilton 1M или Ateco 824.

Я использовал Wilton 1M, чтобы нанести розетки на этот торт, и мне нравится, как они выглядят.

Имея это в виду, вы также можете использовать наконечник с закрытой звездой, такой как Wilton 2D или Ateco 34.

Что нужно для торта из розетки

Одна из лучших особенностей этого дизайна торта – это то, что вам действительно не понадобится тонна инструментов или модного оборудования. Фактически, вам даже не понадобится вращающаяся подставка для торта.

Вам понадобятся:

Как сделать яркую глазурь из сливочного крема

Теперь, когда мы рассмотрели, какие инструменты вам нужны, давайте поговорим о приготовлении красиво окрашенной масляной глазури.

Вы можете сделать это с помощью жидкого пищевого красителя, гелевого пищевого красителя или натурального пищевого красителя (например, этого порошка).

Жидкий пищевой краситель тоже подойдет, но он может испортить консистенцию глазури и придать ей горький вкус, если вы добавите слишком много.

Я рекомендую использовать гелевый пищевой краситель . Пищевой краситель гелевый является концентрированным, поэтому его можно использовать меньше. Пара сквиртов создаст красивый оттенок фиолетового!

Пищевой краситель

также гуще, поэтому он не повлияет на консистенцию глазури.Americolor и Chef Master – мои популярные бренды гелевых пищевых красителей, и я заказываю их на Amazon.

Правильное покрытие крошки для торта с розеткой из сливочного крема

Следующее, что нужно учитывать, – это слой крошки, который представляет собой тонкий слой сливочного крема, которым вы покрываете торт, чтобы удерживать любые крошки. Я уверен, что вы думаете, что пальто из крошки – это пальто из крошки, но на самом деле есть немного стратегии, когда дело доходит до приготовления торта из розетки.

Если вы хотите использовать разноцветный масляный крем для украшения розеток, я настоятельно рекомендую использовать масляный крем того же цвета, чтобы покрыть торт крошкой.Это поможет замаскировать небольшие промежутки между розетками.

Практика ведет к совершенству

Если вам неудобно пользоваться кондитерским мешком или вы раньше не накидывали розетку из сливочного крема, я рекомендую потренироваться на куске пергамента или вощеной бумаги, прежде чем браться за торт.

Прикрепите небольшой кусок пергаментной бумаги к столу и потренируйтесь в движении. Держите кондитерский мешок перпендикулярно стойке и медленно продвигайте спираль, начиная с центра и постепенно выходя наружу.

Как только вы дойдете до конца розетки, прекратите сжимать и продолжайте двигать руками в том же направлении, в котором вы протягивали трубку, пока сливочный крем не отделится от кончика трубочки.

Постарайтесь сосредоточить свои розетки в одном направлении и примерно одинакового размера.

Повторяйте и продолжайте практиковаться, пока не почувствуете себя комфортно при движении. Соскребите глазурь с пергаментной бумаги и положите ее обратно в кондитерский мешок, чтобы избежать отходов.

Как нанести розетки из сливочного крема на торт

Когда вы будете готовы нанести на торт розетки, я рекомендую сделать две равномерно расположенные линии вокруг торта с помощью лопатки со смещением.

Это позволит вам соединить три ровных ряда розеток, которые имеют одинаковый размер и расположены на расстоянии друг от друга.

Чтобы придать вашим розеткам сверхчистый, целостный вид, я рекомендую заканчивать каждую розетку так, чтобы вы могли спрятать хвост под другой розеткой. На этом торте я заканчивал каждую розетку на вершине завитка и спрятал хвосты под розеткой над ней.

Однако вы можете остановить движение, где вам удобно. Только убедитесь, что она соответствует вашему шаблону!

Советы по приготовлению лучшего торта из розетки

  • Охладите коржи в морозильной камере примерно на 20 минут, прежде чем собирать торт . Это облегчает их укладку и заморозку.
  • Выровняйте свою комнатную температуру или размороженные коржи зубчатым ножом , чтобы их было легче складывать.
  • Убедитесь, что у вашего сливочного крема правильная консистенция . Это позволяет вам легко оборачивать розетки и сохранять их форму.
  • Покройте торт крошкой того же цвета (-ов), которого вы собираетесь украсить своими розетками ! Это поможет замаскировать и зазоры между розетками.
  • Охладите торт с крошкой , чтобы розетки оставались на месте, пока вы их протягиваете.
  • Сделайте три равномерно расположенных линии вокруг торта с помощью лопатки со смещением, прежде чем наклеить розетки . Это позволит вам укладывать четыре ровных ряда розеток одинакового размера и расположенных на расстоянии друг от друга.
  • Заканчивайте каждую розетку, где вы можете закрыть хвост, другой розеткой ! Это позволит спрятать хвостик каждой розетки под розеткой рядом с ней.

Советы по приготовлению и хранению торта из розетки

  • Сделайте коржи заранее и заморозьте их .Это разбивает процесс и делает его более доступным.
  • Сделайте глазурь заранее или сэкономьте остатки глазури! Его можно хранить в герметичном контейнере в холодильнике до месяца.
  • Эту глазурь можно хранить в морозильной камере до 3 месяцев! Просто не забудьте хорошо перемешать, когда он растает, чтобы он снова стал красивым и гладким.
  • Замороженный торт может храниться в холодильнике в течение недели или в морозильной камере в течение месяца . Масляный крем удерживает влагу и сохраняет торт свежим и вкусным!

Сообщите мне, что вы думаете

Если вы попробуете этот рецепт торта с розеткой, я буду рад услышать ваше мнение! Пожалуйста, оставьте оценку ниже и комментарий, чтобы сообщить мне свои мысли.

Другие рецепты, которые могут вам понравиться:

Время подготовки 15 минут

Время приготовления 35 минут

Дополнительное время 1 час

Общее время 1 час 50 минут

Состав

Слои шоколадного торта:

  • 2 стакана универсальной муки (260 г)
  • 2 стакана сахарного песка (400 грамм)
  • 3/4 стакана просеянного несладкого какао-порошка (75 г)
  • 2 чайные ложки разрыхлителя (8 граммов)
  • 1 1/2 чайной ложки пищевой соды (9 грамм)
  • 1 чайная ложка соли (6 грамм)
  • 1 стакан очень горячей воды (237 грамм)
  • 2 ч. Л.растворимый кофе эспрессо (6 грамм)
  • 1 стакан пахты (240 г)
  • 1/2 стакана растительного масла (120 г)
  • 2 чайные ложки ванильного экстракта (8 граммов)
  • 1 чайная ложка уксуса (4 грамма)
  • 2 яйца, комнатной температуры (112 грамм)

Пурпурная кремовая глазурь

  • 3 стакана несоленого сливочного масла комнатной температуры (678 грамм)
  • 1 столовая ложка ванильного экстракта (12 грамм)
  • 1 чайная ложка соли (6 грамм)
  • 10 стаканов сахарной пудры (1250 грамм)
  • 1/3 стакана жирных сливок (или сливок для взбивания) (75 г)
  • фиолетовый пищевой краситель

Необходимые инструменты / оборудование

Инструкции

Слои влажного шоколадного торта:

  1. Разогрейте духовку до 350 ° F.Выложите три 8-дюймовых или четыре 7-дюймовых сковороды пергаментными кружками и смажьте антипригарным спреем для выпечки. Если сковород мало, можно выпекать эти слои партиями! Тесто будет прекрасным, если оно постоит при комнатной температуре час или два.
  2. Смешайте 2 стакана универсальной муки, 2 стакана сахара, 3/4 стакана какао для выпечки, 2 чайные ложки разрыхлителя, 1 1/2 чайной ложки пищевой соды и 1 чайную ложку соли в большой миске. Взбейте до однородности.
  3. В отдельной миске среднего размера добавьте 2 чайные ложки растворимого эспрессо или кофе в 1 чашку горячей воды и перемешайте до полного растворения.
  4. Добавьте 1 стакан пахты, 1/2 стакана масла, 2 чайные ложки ванильного экстракта и 1 чайную ложку уксуса в растворимый эспрессо. Быстро перемешайте смесь, чтобы ингредиенты смешались.
  5. Вылейте влажные ингредиенты в сухие. Смешайте вручную до полного растворения.
  6. Вмешайте 2 яйца по одному за раз. Тесто будет тонким, но именно такой консистенции вам нужен!
  7. Равномерно разделите тесто между формами для выпечки и выпекайте примерно 24-27 минут.
  8. Выньте из духовки и дайте пирогам постоять около 5 минут. Осторожно проведите лопаткой со смещением по краю форм для выпечки, чтобы ослабить их.
  9. Поместите коржи в морозильную камеру на 30 минут, чтобы ускорить процесс охлаждения. Когда слои полностью остынут, осторожно переверните сковороды и удалите слои.
  10. Используйте зубчатый нож, чтобы выровнять верхнюю часть слоев. Если вы готовите их заранее, вы можете завернуть их и заморозить.

Пурпурная глазурь для сливочного масла:

  1. Взбейте 3 стакана несоленого сливочного масла на средней скорости с помощью стационарного миксера и лопастной насадки или ручного миксера до однородной массы (1-2 минуты).
  2. Смешайте 1 столовую ложку ванильного экстракта и 1 чайную ложку соли на низкой скорости.
  3. Медленно добавьте 10 стаканов сахарной пудры. На полпути добавьте 1/3 стакана жирных сливок, чтобы глазурь легче перемешивалась.
  4. Продолжайте перемешивать на низкой скорости в течение нескольких минут, пока не будет достигнута желаемая консистенция.
  5. Раскрасьте сливочный крем парой больших капель пурпурного пищевого красителя. Обязательно поскребите стенки и дно миски, чтобы глазурь стала равномерно окрашенной.
  6. Накройте глазурь полиэтиленовой пленкой, чтобы она не покрылась коркой, и отложите в сторону.

Чтобы собрать и украсить этот торт с розеткой:

  1. Сложите коржи и заморозьте их на жиронепроницаемой доске для торта или тарелке. Нанесите немного глазури, чтобы приклеить первый корж на доску.
  2. Покройте каждый слой торта ровным слоем фиолетового сливочного крема, когда будете собирать торт.
  3. Нанесите тонкий слой глазури вокруг торта, используя выступающую глазурь, чтобы полностью покрыть слои торта.
  4. Разгладьте пасту скребком, затем охладите торт в холодильнике (30 минут) или морозильной камере (10 минут), пока глазурь не станет твердой на ощупь.
  5. Поместите оставшуюся глазурь в большой кондитерский мешок с открытым наконечником в виде звезды. Закрепите верхнюю часть пакета резинкой.
  6. С помощью лопатки со смещением нанесите две горизонтальные линии на равном расстоянии друг от друга. Это позволит вам соединить три ровных ряда розеток одинакового размера с правильным интервалом.
  7. Затем используйте нижнюю линию в качестве направляющей для верхней части каждой розетки и протяните ряд розеток вокруг основания торта. Убедитесь, что вы направляете свои розетки в том же направлении, что и вы, и не стесняйтесь делать перерывы, если ваша рука устанет.
  8. Повторите этот процесс и добавьте еще два ряда розеток вокруг торта. Покройте верх торта розетками, работая от края торта к центру.
  9. Чтобы придать вашим розеткам сверхчистый, цельный вид, я рекомендую заканчивать каждую розетку там, где вы планируете соединить центр следующей розетки.Это позволит спрятать хвостик каждой розетки под розеткой рядом с ней.
  10. Охладите торт в холодильнике не менее 30 минут после того, как он будет украшен, чтобы розетки встали на место, прежде чем вы начнете разрезать.

Банкноты

Советы по приготовлению лучшего торта из розетки

  • Охладите коржи в морозильной камере примерно на 20 минут, прежде чем собирать торт, чтобы его было легче складывать и замораживать.
  • Выровняйте свою комнатную температуру или размороженные коржи зубчатым ножом , чтобы их было легче складывать.
  • Убедитесь, что у вашего сливочного крема правильная консистенция , чтобы вы могли легко смазать свои розетки и сохранить их форму.
  • Покройте торт крошкой того же цвета, что вы собираетесь украсить свои розетки ! Это поможет замаскировать и зазоры между розетками.
  • Охладите торт с крошкой , чтобы розетки оставались на месте, пока вы их протягиваете.
  • Сделайте две равномерно расположенные линии вокруг торта с помощью лопатки со смещением, прежде чем обматывать розетки .Это позволит вам укладывать четыре ровных ряда розеток одинакового размера и расположенных на расстоянии друг от друга.
  • Заканчивайте каждую розетку там, где вы планируете провести трубку в центре следующей розетки . Это позволит спрятать хвостик каждой розетки под розеткой рядом с ней.

Как приготовить этот торт-розетку заранее и советы по хранению

  • Сделайте коржи заранее и заморозьте их . Это разбивает процесс и делает его более доступным.
  • Сделайте глазурь заранее или сэкономьте остатки глазури! Его можно хранить в герметичном контейнере в холодильнике до месяца.
  • Эту глазурь можно хранить в морозильной камере до 3 месяцев! Просто не забудьте хорошо перемешать, когда он растает, чтобы он снова стал красивым и гладким.
  • Замороженный торт может храниться в холодильнике в течение недели или в морозильной камере в течение месяца . Масляный крем удерживает влагу и сохраняет торт свежим и вкусным!

Информация о питании

Урожайность

24

Размер порции

1
Количество на порцию Калорий 559 Всего жиров 30 г Насыщенные жиры 16 г Трансжиры 0 г Ненасыщенные жиры 12 г Холестерин 81 мг Натрий 344 мг Углеводы 73 г Волокно 1 г Сахар 62 г Белки 3 г

Невропатология для нейрорадиолога: розетки и псевдорозетки

AJNR Am J Neuroradiol.2006 Mar; 27 (3): 488–492.

FJ Wippold, II

a Отделение нейрорадиологии, Институт радиологии Маллинкродта, Сент-Луис, Мо

c Отделение радиологии, Барнс-Еврейская больница, Сент-Луис, Мо

d Отделение Радиология / ядерная медицина, Медицинская школа Ф. Эдварда Эберта, Медицинский университет униформ, Бетесда, Мэриленд

А. Перри

b Отделение невропатологии, Отделение патологии Медицинской школы Вашингтонского университета, Св.Louis, Mo

a Отделение нейрорадиологии, Институт радиологии Маллинкродта, Сент-Луис, Мо

b Отделение невропатологии, Отделение патологии, Медицинская школа Вашингтонского университета, Сент-Луис, Мо

c Отделение радиологии, Barnes-Jewish Hospital, Сент-Луис, Мо

d Отделение радиологии / ядерной медицины, Медицинская школа Ф. Эдварда Эберта, Unifiform Services University of the Health Sciences, Bethesda, Md

Адресная корреспонденция Францу Дж.Виппольд II, доктор медицины, отделение нейрорадиологии, Институт радиологии Маллинкродта, Медицинский центр Вашингтонского университета, 510 South Kingshighway Blvd, Сент-Луис, MO 63110

Получено 20 июля 2005 г .; Принято 26 июля 2005 г.

Copyright © Американское общество нейрорадиологов Эта статья цитируется в других статьях в PMC.

Abstract

РЕЗЮМЕ: Невропатологическая диагностика опухолей головного мозга включает микроскопическое исследование обычных фиксированных формалином и залитых парафином образцов ткани, хирургически удаленных из рентгенологически определяемого поражения.Предварительный диагноз часто ставится с помощью замороженных срезов, хотя окончательный или окончательный диагноз обычно требует более тщательных исследований. Обычно ткань сначала фиксируется минимум на несколько часов в 10% нейтральном забуференном формалине, обрабатывается с помощью ряда обезвоживающих и очищающих реагентов и заливается в твердый воск, такой как парафин. Последний позволяет тонко разрезать ткань микротомом, переносить на предметное стекло и затем окрашивать красителями, такими как гематоксилин-эозин (H&E), которые контрастируют с различными клеточными элементами.Патологи полагаются на визуальные подсказки, такие как распознавание образов, при исследовании окрашенной ткани под микроскопом, так же как радиологи полагаются на серые образцы плотности и интенсивности на изображениях. Некоторые гистологические паттерны клеточной архитектуры отличительны, если не патогномоничны, тогда как другие менее специфичны, но, тем не менее, значительно сужают дифференциальный диагноз. Точные биологические основы некоторых наблюдаемых микроскопических паттернов изучены плохо, но, тем не менее, их распознавание остается полезным.Хотя были разработаны более продвинутые методы исследования тканей, такие как гистохимическое и иммуногистохимическое профилирование, генетический анализ и электронная микроскопия, микроскопический обзор материала, окрашенного гематоксилином и эозином, остается важным компонентом диагностики опухолей.

Одним из часто встречающихся нейропатологических гистологических архитектурных паттернов, наблюдаемых в некоторых опухолях, является розетка. Цель этого отчета – рассмотреть паттерны розеток и псевдорозеток в контексте таких опухолей, как медуллобластома / примитивная нейроэктодермальная опухоль (PNET), ретинобластома, эпендимома, центральная нейроцитома и пинеоцитома.

Что такое розетки?

Розетки состоят из ореола или спицевого колеса ячеек, окружающих центральный сердечник или ступицу (). Центральный узел может состоять из пустого просвета или пространства, заполненного цитоплазматическими отростками. Цитоплазма каждой из клеток розетки часто имеет клиновидную форму с вершиной, направленной к центральному ядру; ядра клеток, участвующих в розетке, расположены по периферии и образуют кольцо или ореол вокруг центра. 1,2 Названный в честь цветочного архитектурного орнамента, этот узор напоминает окна-розы во многих готических соборах ().Розетки можно рассматривать как первичные или вторичные проявления архитектуры опухоли. Первичные розетки образуются как характерный образец роста для данного типа опухоли, тогда как вторичные розетки возникают в результате влияния внешних факторов на рост опухоли. Например, в последнем случае регрессивное набухание клеток может центростремительно перемещать цитоплазму, когда ядро ​​сдавливается к периферии. 2 Хотя наличие первичных розеток может указывать на данный диагноз, обычно только это открытие не считается абсолютно патогномоничным для одного конкретного типа опухоли.Неоднозначная терминология и описания в прошлом добавили путанице в использовании этого термина; однако несколько типов первичных розеток обычно распознаются в литературе по патологии.

Схема типичной розетки, демонстрирующей ореол клеток, окружающих центральный просвет. Адаптировано из Ellison et al (2004) 34 с разрешения.

Пример окна-розетки собора. Фотография любезно предоставлена ​​соборной базиликой Сент-Луиса, использована с разрешения.

Розетка Гомера Райта

Розетка Гомера Райта названа в честь Джеймса Гомера Райта (1869–1928), первого директора лаборатории патологии Массачусетской больницы общего профиля и разработчика красителя Райта. 3 Он распознал группу опухолей надпочечников и симпатической нервной системы, которые стали известны как нейробластомы, и описал внутри этих поражений характерные шарообразные структуры клеток, которые окружают сетку волокон (). Эти волокна не окрашивались, как те, что связаны с нейроглией, и он предположил, что они представляют собой примитивные нейронные процессы, напоминающие процессы в развивающейся симпатической нервной системе. 4

Схема розетки Гомера Райта.Ореол клеток окружает центральный узел, содержащий сеть волокон. Адаптировано из Ellison et al (2004) 34 с разрешения.

Типичная розетка Гомера Райта с ее центральным просветом или центром, заполненным волокнообразными отростками, также может быть обнаружена в медуллобластомах и гистологически подобных опухолях, возникающих за пределами мозжечка, обозначенных PNETs (). Хотя клеточные механизмы, ответственные за образование розеток внутри медуллобластом, и значение этих розеток до конца не изучены, большинство исследователей полагают, что их присутствие указывает на дифференцировку нейронов. 5,6 Тонкий фибриллярный материал, находящийся в центральном просвете розетки Гомера Райта, состоит из нейропиля, который содержит примитивные нейронные отростки или нейриты.

Микрофотография из PNET, демонстрирующая несколько розеток Гомера Райта. Галообразный кластер клеток в каждой розетке окружает центральную область нейропиля, богатого клетчаткой (H&E; исходное увеличение 400 ×).

Микрофотография ретинобластомы, на которой видны множественные розетки Flexner-Wintersteiner.Галообразный кластер клеток в каждой розетке окружает почти пустой центральный просвет, содержащий мелкие цитоплазматические отростки (H&E; исходное увеличение 400 ×). Микрофотография, щедро подаренная доктором Мортоном Смитом, отделением офтальмологической патологии, Вашингтонский университет, Сент-Луис.

Хотя большинство медуллобластом считаются примитивными, различная степень дифференцировки почти всегда встречается на микроскопическом, иммуногистохимическом и ультраструктурном уровнях. 5–7 Более того, некоторые клетки медуллобластомы в образцах и культурах продемонстрировали микротрубочки, нейросекреторные везикулы с ослабленным ядром и четко центрированные синаптические пузырьки и синаптические соединения, все из которых характерны как для нейробластов, так и для зрелых нейронов. 8,9 Независимо от подтипа медуллобластомы, иммуногистохимические доказательства дифференцировки нейронов обнаруживаются почти во всех случаях с помощью нейрональных маркеров, таких как синаптофизин, нейрон-специфическая энолаза и белок нейрофиламентов. 5,10 Некоторые медуллобластомы могут также демонстрировать другие формы дифференцировки, что демонстрируется присутствием астроцитарного маркера глиального фибриллярного кислого белка. 8,11 Скелетные мышцы и меланоцитарная дифференцировка встречаются значительно реже и определяют варианты медулломиобластомы и меланотической медуллобластомы соответственно.

Хотя значение розетки в медуллобластомах, по-видимому, отражает дифференцировку нейронов в частях в остальном примитивной опухоли, механизм формирования характерного рисунка розетки полностью не понят. Считается, что популяции клеток, проявляющие нейрональную дифференцировку, секретируют поверхностные гликопротеины и гликолипиды, которые опосредуют распознавание и адгезию между клетками. 7,9,12–17 Одна из гипотез состоит в том, что эти липкие поверхностные маркеры клеток заставляют развивающиеся клеточные тела группироваться или агрегироваться, а их примитивные нейриты запутываться.По мере роста клеток клубок нейритов остается в центре, а тела клеток сдавливаются к периферии, что объясняет структуру розетки. 5

Хотя идентификация розеток Гомера Райта в опухоли задней черепной ямки почти патогномонична диагностике медуллобластомы, розетки встречаются только в трети этих опухолей. Более того, розетки Гомера Райта могут быть обнаружены в других опухолях, таких как супратенториальные PNET и пинеобластомы. 18 Для опухолей, состоящих только из примитивных клеток, окончательный диагноз основывается на дополнительных методах, таких как специальные окрашивания и иммуногистохимический анализ.

Flexner-Wintersteiner Rosette

Саймон Флекснер (1863–1946), чей брат Абрахам Флекснер написал знаменитый доклад о реформе медицинского образования, носящий его имя, сам по себе был патологом-новатором. Он был назначен главой отделения патологии, а затем директором только что основанного института Рокфеллера. В дополнение к описанию бациллы, ответственной за дизентерию, Флекснер отметил отличительные кластеры клеток в детской глазной опухоли, которую он назвал ретиноэпителиомой. 19–21 Несколько лет спустя, в 1897 году, австрийский офтальмолог Хуго Винтерштайнер (1865–1946) согласился с наблюдениями Флекснера и отметил, что кластеры клеток напоминают палочки и колбочки. 22 Эти клеточные агрегаты были названы розетками и впоследствии были признаны важными особенностями ретинобластом. Опухолевые клетки, которые образуют розетку Flexner-Wintersteiner, ограничивают центральный просвет, который содержит небольшие цитоплазматические расширения окружающих клеток; однако, в отличие от центра розетки Гомера Райта, центральный просвет не содержит нейропиля, богатого клетчаткой ().Как и розетка Гомера Райта, розетка Flexner-Wintersteiner означает особую форму дифференцировки опухоли. 23–26 Это утверждение подтверждается данными электронной микроскопии, согласно которым опухолевые клетки, образующие розетку Flexner-Wintersteiner, имеют ультраструктурные особенности примитивных фоторецепторных клеток. 27 Кроме того, просвет розетки имеет особые окрашивающие свойства, аналогичные свойствам палочек и колбочек. 28 Хотя этот тип розетки особенно характерен для ретинобластом (), его также можно увидеть в пинеобластомах и медуллоэпителиомах, где аналогично считается, что они представляют дифференцировку сетчатки. 18,23

Схема розетки Flexner-Wintersteiner. Ореол клеток окружает почти пустой центральный узел. Небольшие цитоплазматические отростки клеток выступают в просвет. Адаптировано из Ellison et al (2004) 34 с разрешения.

Истинная эпендимальная розетка

Другой образец розетки может быть продемонстрирован в подмножестве эпендимом и был назван «истинной эпендимальной розеткой» 6,29,30 (). В отличие от розеток Гомера Райта и Флекснера-Винтерштайнера пустотелый просвет истинной эпендимальной розетки напоминает просвет канальца и не содержит богатых клетчаткой нейропиля или центральных цитоплазматических выступов.Эти канальцевидные структуры, а также более удлиненные версии, известные как эпендимальные каналы, могут представлять собой попытку опухолевых клеток воспроизвести формирование желудочков с эпендимными оболочками. 6,18 Эта розетка дает убедительные доказательства дифференцировки эпендимы на уровне светового микроскопа. 29 К сожалению, истинные эпендимные розетки и каналы обнаруживаются только в меньшинстве наиболее хорошо дифференцированных эпендимом и чаще всего в инфратенториальных примерах 29 ().По иронии судьбы подобная структура, известная как эпендимобластная розетка, встречается в редкой форме PNET, известной как эпендимобластома, где они, как полагают, обозначают эпендимальную дифференцировку при очень примитивном злокачественном новообразовании.

Схема истинной эпендимальной розетки. Ореол клеток окружает пустой просвет. Адаптировано из Ellison et al (2004) 34 с разрешения.

Микрофотография эпендимомы, на которой видны несколько настоящих эпендимных розеток. Галообразный кластер клеток в каждой розетке окружает пустой центральный просвет (H&E; исходное увеличение 400 ×).

Периваскулярная псевдорозетка

Четвертый тип розетки – периваскулярная псевдорозетка. В этом шаблоне расположение ячеек со спицами и колесами с конусообразными ячеистыми отростками излучается вокруг стенки расположенного в центре сосуда 2,7,18 (). Модификатор «псевдо» отличает этот паттерн от розеток Гомера Райта и Флекснера-Винтерштайнера, возможно, потому, что центральная структура фактически не формируется самой опухолью, а вместо этого представляет собой нативный, неопухолевый элемент.Кроме того, некоторые ранние исследователи спорили об определении центрального просвета, выбирая «псевдо», чтобы указать, что центр не является истинным просветом, а содержит структуры. 31 Тем не менее, этот шаблон остается чрезвычайно полезным с диагностической точки зрения, и модификатор без надобности приводит к путанице. Периваскулярные псевдорозетки встречаются в большинстве эпендимом независимо от степени или варианта. Таким образом, они значительно более чувствительны для диагностики эпендимомы, чем истинные эпендимальные розетки 18,30,32 ().К сожалению, периваскулярные псевдорозетки также менее специфичны в том смысле, что они также встречаются в медуллобластомах, PNET, центральных нейроцитомах и, реже, в глиобластомах, а также в редких детских опухолях, мономорфных пиломиксоидных астроцитомах.

Схема периваскулярной псевдорозетки. Ореол клеток окружает кровеносный сосуд. Адаптировано из Ellison et al (2004) 34 с разрешения.

Микрофотография эпендимомы, на которой видны 2 видных периваскулярных псевдорозетки.Галообразный кластер клеток в каждой розетке окружает кровеносный сосуд. Обратите внимание на несколько меньших истинных эпендимных розеток (H&E; исходное увеличение 200 ×).

Причина тенденции некоторых клеток эпендимомы располагаться вокруг кровеносных сосудов плохо изучена. В зависимости от своего местоположения эпендимные клетки могут иметь 2 полюса клеток. Люминальный полюс проецируется на эпендимную выстилку желудочка, а «субмезенхимальный полюс» проецируется на поверхность мозга, демонстрируя глиальные отростки и расположенные на периферии ступни. 33 Фрида и Поллак концептуализируют архитектуру эпендимомы как примитивную нервную трубку, вывернутую наизнанку, с субмезенхимальными полюсами, сходящимися к центральному сосуду, таким образом формируя псевдорозетку, а не центробежно выступающую к мягкой мозговой оболочке. 33 Кровеносные сосуды псевдорозетки часто фиброзные и гиалинизированные. 32

Пинеоцитоматозные и нейроцитарные розетки

Пинеоцитомы и центральные нейроцитомы представляют собой хорошо дифференцированные нейрональные новообразования с небольшими округлыми ядрами, аналогичными тем, которые обычно встречаются во внутреннем зернистом слое мозжечка или зубчатой ​​фасции гиппокампа.Хотя они, вероятно, происходят от немного разных предшественников, гистологические особенности этих двух опухолей практически идентичны, включая их склонность к образованию розеток, богатых нейропилем, которые называются пинеоцитоматозных розеток в пинеоцитомах и нейроцитарных розеток в центральной нейроцитоме (). Обе они очень похожи на розетки Гомера Райта, но в целом они больше и имеют более неправильный контур 34 (). Как и в других обсуждаемых типах розеток, обычно считается, что наличие пинеоцитоматозных или нейроцитарных розеток отражает дифференцировку опухоли, в данном случае нейрональной. 35,36 Клетки пинеоцитоматозной и нейроцитарной розеток также считаются гораздо более дифференцированными, чем клетки, образующие розетки Гомера Райта, в том смысле, что ядра немного больше, более округлые, гораздо менее митотически активные и более бледные или менее гиперхроматические. 37 В редких случаях эти розетки могут собираться в лист смежных кластеров, напоминающих полевую каменную мостовую.

Схема нейроцитарной розетки. Эта розетка похожа на розетку Гомера Райта, но центральный богатый клетчаткой островок нейропила больше и имеет более неправильную форму.Адаптировано из Ellison et al (2004) 34 с разрешения.

Микрофотография центральной нейроцитомы, содержащей нейроцитарную розетку неправильной формы с центральным нейропилем (H&E; исходное увеличение 400 ×).

Заключение

Таким образом, розетки и псевдорозетки представляют собой гистологический архитектурный паттерн, наблюдаемый в определенных опухолях нервной системы. Рисунок розетки состоит из ореола или спицевого колеса клеток, окружающих центральное ядро ​​или ступицу, которые могут быть пустыми или содержать волокна, цитоплазматические отростки или кровеносный сосуд.Хотя значение наличия розеток не всегда понимается, большинство специалистов согласны с тем, что они представляют собой различные формы дифференцировки опухолей. Наличие розеток редко, если вообще когда-либо, является патогномоничным для конкретной опухоли, хотя идентификация розеток часто помогает при гистологической диагностике медуллобластомы / PNET, ретинобластомы, эпендимомы, центральной нейроцитомы и пинеоцитомы.

Сводка паттернов розетки и ассоциированных опухолей

нейробластома, медуллобластома, примитивная опухоль, нейроэктодерма ретинобластомы, pineoblastoma, medulloepithelioma девяносто одна тысяча семьдесят шесть
Тип розетки Ассоциированные опухоли
Розетка Гомера Райта Нейробластома, медуллобластома
Правда эпендимной розетка эпендимых девяносто одна тысяча семьдесят шесть
Периваскулярный pseudorosette эпендимые, медуллобластома, примитивные опухоли нейроэктодермальных, центральный neurocytoma, глиобластомы, мономорфное pilomyxoid астроцитомов
Pineocytomatous розетки Pineocytoma девяносто одна тысяча семьдесят шесть
Нейроцитарная розетка Центральная нейроцитома

Примечание: В этом выпуске журнала появилась новая статья под названием «Специальный отчет».Эта серия коротких патологических описаний будет написана Джеем Виппольдом и сотрудниками Медицинской школы Вашингтонского университета. Первая из серии посвящена розеткам и псевдорозеткам, а за ней ежеквартально будут следовать другие интересные темы, а именно волокна Розенталя; палисадинг / псевдопалисадинг; Бляшки и клубки болезни Альцгеймера; и флуоресцентная гибридизация in situ (FISH).

Сноски

Мнения и утверждения, содержащиеся в данном документе, являются частной точкой зрения авторов и не могут рассматриваться как официальные или отражающие точку зрения Министерства обороны США.

Ссылки

1. Эллисон Д., Лав С., Чимелли Л. и др. Патологические реакции в ЦНС . В кн .: Невропатология: справочник по патологии ЦНС. Эдинбург: Мосби, 2004; 3–25

2. Zulch KJ. Опухоли головного мозга: их биология и патология. 3-е изд. Берлин: Springer-Verlag; 1986. : 118–34

3. Ли Р. Х., Янг Р. Х., Кастлман Б. Джеймс Гомер Райт: биография загадочного создателя пятна Райта по случаю его столетней годовщины . Am J Surg Pathol 2002; 26: 88–96 [PubMed] [Google Scholar] 5.Katsetos CD, Лю HM, Zacks SI. Иммуногистохимические и ультраструктурные наблюдения за розетками Гомера Райта (нейробластами) и «бледными островками» медуллобластом мозжечка человека . Хум Патол 1988; 19: 1219–27 [PubMed] [Google Scholar] 6. Рубинштейн LJ. Медуллобластома мозжечка: ее происхождение, дифференциация, морфологические варианты и биологическое поведение . В: Винкен П.Дж., Брюн Г.В., ред. Справочник по клинической неврологии. Том 18. Амстердам: Elsevier; 1975. : 167–93 [Google Scholar]

7.Лю Х.М., Бейли ОТ. Невропатология . В: Амадор Л.В., изд. Опухоли головного мозга у молодых. Спрингфилд, штат Иллинойс: Чарльз С. Томас; 1983. : 361–456

8. Герман М.М., Рубинштейн LJ. Дивергентная глиальная и нейрональная дифференцировка в медуллобластоме мозжечка в системе органной культуры: наличие синаптических лент in vitro . Acta Neuropathol 1984; 65: 10–24 [PubMed] [Google Scholar] 9. Мох TH. Доказательства дифференциации медуллобластом, кажущихся примитивными при световой микроскопии: ультраструктурное исследование .Гистопатология 1983; 7: 919–30 [PubMed] [Google Scholar] 10. Burger PC, Grahmann FC, Bliestle A и др. Дифференциация медуллобластомы . Acta Neuropathol (Берлин) 1987; 73: 115–23 [PubMed] [Google Scholar] 12. Накай Дж. Исследования механизма, определяющего ход нервных волокон в культуре ткани . Zeitschr Zellforschung 1960; 52: 427–49 [PubMed] [Google Scholar] 13. Паннесе Э. Гистогенез спинномозговых ганглиев. Adv Anat Embryol Cell Biol 1974; 47: 7–16 [PubMed] [Google Scholar]

14.Уиллис Р.А. Нервная система и органы чувств . В кн .: На стыке эмбриологии и патологии. Лондон: Баттервортс; 1962. : 121–23

15. Пфеннингер К.Л., Рис Р.П. От конуса роста к синапсу . В кн .: Баронды Ш. Под ред. Распознавание нейронов. Нью-Йорк: Пленум; 1976. : 131–78

16. Москона AA. Распознавание клеток в эмбриональном морфогенезе и проблема нейрональной специфичности . В кн .: Баронды Ш. Под ред. Распознавание нейронов. Нью-Йорк: Пленум; 1976.: 205–26

17. Гилула NB. Щелевые переходы и контакты ячеек . В: Каркинен-Яаскелайнен М., Саксен Л., Вайс Л., ред. Взаимодействие клеток при дифференцировке. Нью-Йорк: Academic Press; 1977. : 325–38

18. Smith TW, Folkerth RD, Poirer J, et al. Опухоли нервной системы . В: Gray F, De Girolami U, Poirer J, ред. Руководство Эскуроля и Пуаре по базовой невропатологии. Филадельфия: Баттерворт Хайнеманн; 2004; 21–56

19. Флекснер С. Своеобразная глиома (нейроэпителиома?) Сетчатки .Johns Hopkins Hosp Bull 1891; 2: 115–19 [Google Scholar] 21. Бендинер Э. Саймон Флекснер: его «рок» был на века . Больница Прак 1988; 23: 213–66 [PubMed] [Google Scholar]

22. Винтерштайнер Х. Die zellen der geschwulst . В: Das neuroepithelioma retinae: Eine anatomische und klinishe studie. Лейпциг: Франц Дойтике; 1897. : 12–16

23. Маклин И. В., Бернир М. Н., Циммерман Л. Е. и др. Опухоли сетчатки . В кн .: Атлас опухолевой патологии: опухоли глаза и придатков глаза.Вашингтон, округ Колумбия: Институт патологии вооруженных сил; 1994. : 97–154

24. Доносо Л.А., Шилдс К.Л., Ли EY-H. Иммуногистохимия ретинобластомы . Офтальмологический педиатр Генет 1989; 10: 3–32 [PubMed] [Google Scholar] 25. Врабец Т., Арбизо В., Адамус Г. и др. Палочко-специфические антигены ретинобластомы . Арка Офтальмол 1989; 107: 1061–63 [PubMed] [Google Scholar] 26. Kivela T. Гликоконъюгаты в ретинобластоме: гистохимическое исследование лектина десяти опухолей, фиксированных формалином и залитых парафином .Арка Вирхова А 1987; 410: 471–79 [PubMed] [Google Scholar] 27. Ts’o MOM, Fine BS, Zimmerman LE. Розетки Flexner-Wintersteiner при ретинобластоме . Арка Патол 1969; 88: 664–71 [PubMed] [Google Scholar]

28. Zimmerman LE. Ретинобластома и ретиноцитома . В: Spencer WH, ed. Офтальмологическая патология: атлас и учебник. Филадельфия: У. Б. Сондерс; 1985. : 1292–351

29. McLendon RE, Enterline DS, Tien RD, et al. Опухоли центрального нейроэпителиального происхождения .В: Bigner DD, McLendon RE, Bruner JM, ред. Патология Рассела и Рубинштейна опухолей нервной системы. 6-е изд. Лондон: Арнольд 1998. : 307–571 [Google Scholar]

30. Burger PC, Scheithauer BW. Опухоли нейроглии и эпителия сосудистого сплетения . В кн .: Атлас опухолевой патологии: опухоли центральной нервной системы. Вашингтон, округ Колумбия: Институт патологии вооруженных сил, 1994; 25–159

31. Рубинштейн LJ. Опухоли нейроглиальных клеток . В кн .: Опухоли центральной нервной системы.Вашингтон, округ Колумбия: Институт патологии вооруженных сил; 1970. : 19–126

32. Бейли П. Исследование опухолей, возникающих из клеток эпендимы . Arch Neurol Psychiatry 1924; 11: 1–27 [Google Scholar] 33. Friede RL, Pollak A. Цитогенетическая основа классификации эпендимом . J Neuropathol Exp Neurol 1978; 37: 103–18 [PubMed] [Google Scholar]

34. Эллисон Д., Лав С., Чимелли Л. и др. Новообразования шишковидной железы . В кн .: Невропатология: справочник по патологии ЦНС.Эдинбург: Мосби; 2004. : 677–84

35. Хирато Дж., Наказато Ю. Патология опухолей пинеальной железы . J Нейро-онкол 2001; 54: 239–49 [PubMed] [Google Scholar] 36. Жуве А, Сен-Пьер Ж, Фошон Ф и др. Опухоли паренхимы шишковидной железы: корреляция гистологических признаков с прогнозом в 66 случаях . Brain Pathol 2000; 10: 49–60 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

37. Burger PC, Scheithauer BW. Опухоли шишковидной железы . В кн .: Атлас опухолевой патологии: опухоли центральной нервной системы.Вашингтон, округ Колумбия: Институт патологии вооруженных сил; 1994. : 227–49

Rosette Formation – обзор

2.2.1 Rosette

GRD – наиболее разрушительное заболевание в Африке к югу от Сахары (SSA). Известно, что он встречается в нескольких африканских странах, включая Малави, Нигерию, Уганду, Сенегал, Буркина-Фасо, Кот-д’Ивуар, Южную Африку, Нигер и Кению (Wangai, Pappu, Pappu, Deom, & Naidu, 2001). В Африке зарегистрированы многочисленные эпидемии розетки, приводящие к значительным потерям урожая (Alegbejo & Abo, 2002; Naidu et al., 1999). Заражение до цветения приводит к потере более 90% урожая. По симптомам розетка подразделяется на хлоротичную розетку, которая повсеместно встречается в АЮС, а зеленая розетка встречается в Западной Африке, Уганде и Анголе; третий, реже встречающийся вид, мозаичная розетка, отмечен только в Восточной и Центральной Африке. Среди трех причинных агентов GRD, GRAV является вирусом-помощником, участвующим в передаче GRV и сателлитной РНК; GRV является вирусом-помощником для репликации сателлитной РНК, а симптомы заболевания вызываются сателлитной РНК.Он также помогает инкапсидации РНК GRV в частицы GRAV по неизвестному механизму (Naidu et al., 1999). Таким образом, три компонента сильно зависят друг от друга и играют решающую роль в биологии и сохранении болезни (Alegbejo & Abo, 2002; Naidu et al., 1999; Taliansky, Robinson, & Murant, 2000). Было изучено разнообразие последовательностей возбудителей розеточных болезней из разных географических регионов (Deom, Naidu, Chiyembekeza, Ntare, & Subrahmanyam, 2000; Wangai et al., 2001). Причинные вирусы постоянно передаются через Aphis craccivora .

GRD можно предварительно диагностировать на фермерских полях на основе характерных симптомов. В лаборатории диагностика GRD основана на посеве сока на тестируемые растения, такие как Chenopodium amaranticolor , тройной сэндвич-ELISA с антителами, дот-блот-гибридизацию, гель-электрофорез для сателлитной РНК и анализ RT-PCR (Blok et al., 1995 ; Breyel et al., 1988; Naidu, Robinson, & Kimmins, 1998; Rajeswari, Murant, & Massalski, 1987).

Эпидемиология GRD сложна, поскольку она включает взаимодействия между двумя различными вирусами и сателлитной РНК, вектором тли и растением-хозяином в нескольких областях SSA. Ни один из трех агентов розеточного комплекса не передается через семена, и поэтому первичная инфекция вносится в урожай вирулосодержащими тлями, которые, вероятно, происходят от несезонных добровольцев арахиса и самосевных растений. Вторичное распространение происходит из источников внутри культуры. Распространение GRD осложняется тем, что одна тля не всегда может передавать три вирусных агента (Naidu, Miller, Mayo, Wesley, & Reddy, 2000).Растения, которые проявляют симптомы, но не имеют GRAV, не играют никакой роли в распространении болезни, поскольку CP GRAV требуется для инкапсидации и передачи GRV и сателлитной РНК. Следовательно, количество растений, которые обладают всеми тремя возбудителями, играет решающую роль во вторичном распространении болезни на данном поле, в то время как количество растений, которые демонстрируют типичные симптомы GRD, влияет на урожайность.

Несколько подходов к управлению GRD включают применение пестицидов для сокращения популяций переносчиков, методы культивирования сельскохозяйственных культур для задержки начала и распространения как переносчика, так и болезни (обзор Alegbejo & Abo, 2002; Naidu et al., 1999; Нтаре, Олорунджу и Валияр, 2002; Олорунджу и Нтар, 2003; Thresh, 2003). Борьба с тлей-переносчиками путем опрыскивания посевов арахиса инсектицидами может эффективно контролировать болезнь (Davies, 1975). Многие фермеры с ограниченными ресурсами не могут позволить себе пестициды и не контролируют GRD в АЮС. Ранний посев может позволить посеву укорениться до того, как популяция тли достигнет своего пика, и, таким образом, снизит заболеваемость. Густые насаждения препятствуют заражению тлей, поскольку тля предпочитает легкие, воздушные условия.Тем не менее, без сочетания этих подходов был достигнут лишь ограниченный успех.

Источники устойчивости к GRD были впервые выявлены у староместных сортов арахиса позднеспелого типа Вирджиния в Западной Африке. Устойчивость к этому заболеванию была выявлена ​​и у раннеспелых испанских типов. Устойчивые типы Вирджиния использовались в селекционной программе по всей SSA, что привело к развитию нескольких устойчивых сортов (например, RMP 12, RMP 91, KH 241-D и RG 1). Было обнаружено, что устойчивость этих сортов эффективна как против хлоротичной, так и против зеленой розетки и определяется двумя независимыми рецессивными генами (Nigam & Bock, 1990).Однако эти многолетние сорта не получили широкого распространения. Позднее были выпущены раннеспелые хлоротичные устойчивые к розетке испанские типы (90–110 дней), подходящие для разнообразных экосистем SSA (Bock, Murant, & Rajeswari, 1990; Naidu et al., 1999; Subrahmanyam, Hildebrand, Naidu, Reddy, & Singh , 1998). Большинство линий раннеспелого арахиса, оцененных в Нигерии в 2001 и 2002 годах, показали устойчивость к GRD, пятнистости на ранних и поздних листьях (Iwo & Olorunju, 2009). Из девяти селекционных линий арахиса, обладающих высокой урожайностью и устойчивостью ко всем трем болезням, ICGV-IS-96805 хорошо показал себя в четырех местах и ​​может широко выращиваться в АЮР.Эти генотипы показали устойчивость к GRV, но не к GRAV (Olorunju, Kuhn, Demski, Misari, & Ansa, 1991, 1992; Subrahmanyam et al., 1998). Было показано, что устойчивость к GRV разрушается при высоком давлении посевного материала и / или неблагоприятных условиях окружающей среды. Большинство более ранних исследований наследования устойчивости к болезням было основано на визуальных симптомах и применимо только к GRV и его сателлитной РНК, но не к GRAV. Иммунитет ко всем трем причинным компонентам GRD был идентифицирован у диких видов Arachis (Murant, Kumar, & Robinson, 1991; Subrahmanayam, Naidu, Reddy, Kumar, & Ferguson, 2001).

Dwivedi, Gurtu, Chandra, Upadhyaya и Nigam (2003) определили разнообразие AFLP среди выбранной устойчивой к розетке зародышевой плазмы арахиса (ICGs 3436, 6323, 6466, 9558, 9723, 10347, 11044, 11968 и 12876) и одной чувствительной ( ICG 7827) образец арахиса для идентификации ДНК-маркеров, связанных с устойчивостью к GRD. Устойчивость к вектору тли была идентифицирована в генотипе арахиса ЕС 36892 и в племенной линии ICG 12991, которая, как было показано, контролируется одним рецессивным геном. Herselman et al.(2004) впервые сообщили об идентификации молекулярных маркеров, тесно связанных с устойчивостью тли и GRD, и построили первую частичную генетическую карту для культивируемого арахиса с использованием массового сегрегантного анализа и анализа AFLP.

Были предприняты попытки использовать резистентность, вызванную патогенами (PDR) (репликаза GRAV, гены CP и / или последовательности, происходящие от сателлитной РНК), для развития устойчивой устойчивости к GRD (Taliansky, Ryabov, & Robinson, 1998). В настоящее время неизвестно, находятся ли какие-либо трансгенные линии арахиса, обладающие устойчивостью к GRD, на стадии дерегулирования в будущем (Reddy, Sudarshana, Fuchs, Rao, & Thottappilly, 2009).

Что такое узор розетки?

Если вы когда-либо внимательно смотрели на что-то, напечатанное на коммерческой офсетной машине, вы могли заметить, что изображения и цвета, которые вы видите на бумаге, не такие, какими кажутся. Красные на самом деле не красные, а синие – не синие. Вместо этого они представляют собой комбинации точек, которые, если смотреть рядом друг с другом в плотные группы, создают впечатление сплошных цветов и изображений. Этот процесс известен как полутоновое изображение, и это важный метод для всей современной печати.

Эффект муара

Чтобы создать эту иллюзию непрерывных тонов, две или более полутоновых сеток разного цвета накладываются друг на друга с разной степенью «охвата», чтобы создать широкий спектр видимых оттенков. Этот процесс использовался для создания заданий цветной печати с 1800-х годов, но у него есть обратная сторона: перекрытие сеток таким образом может создать непривлекательный артефакт, известный как муаровый узор. Этот эффект хуже всего, когда полутоновые сетки выровнены, слегка повернуты или не совмещены.

Чтобы противодействовать этому эффекту, принтеры поворачивают свои полутоновые сетки как минимум на 30 ° относительно друг друга, чтобы минимизировать отвлекающие эффекты муара, и это может привести к получению несколько более приятного артефакта, известного как розетка.

Разъяснение узора розетки

Так что же такое розетка? Узор розетки можно наблюдать при просмотре распечатанного изделия в лупу или увеличительное стекло, и с определенной точки зрения он почти напоминает разноцветный букет роз.Есть два распространенных типа узоров розетки: точечно-центрированные и четкие-центрированные.

Как следует из названия, «точечно-центрированную» розетку можно определить по «точке», видимой в середине рисунка «роза». Этот тип розетки имеет тенденцию показывать менее заметный узор за счет небольшой потери гаммы и деталей теней. Он также более подвержен смене цвета из-за неправильной регистрации. Этот шаблон обычно используется для заданий более низкого качества (100 lpi и ниже).

Другой вид – это розетки «с открытым центром», которые создаются путем смещения одного из триадных цветов на половину ряда точек от других цветов.Хотя эта розетка дает немного более заметный узор, она, как правило, сохраняет детали в тенях и препятствует смещению цвета. Этот шаблон лучше подходит для более качественных заданий (150 lpi и выше).

Нежная как роза

Как видите, печать – деликатный процесс, который легко может привести к сбою. Поскольку несколько сеток расположены под разными углами, создавая тонкие узоры и изображения, малейшая ошибка может испортить задание на печать, что может привести к нежелательным расходам, таким как повторная печать и потеря клиентов.Как и на розу, приятно смотреть, и запах чернил сладкий, но шип легко уколоть. Так что в следующий раз, когда вы посмотрите на что-то, напечатанное офсетным способом, найдите время, чтобы оценить мастерство – и остановитесь, чтобы понюхать розы.

Хотите узнать больше о процессе печати? Или, может быть, вы достаточно наслушались и просто хотите уже что-то напечатать? В любом случае, мы здесь для вас!

Эритроциты, инфицированные плазмодиями, индуцируют секрецию IGFBP7 с образованием розеток типа II и избегают фагоцитоза

[Примечание редакции: план авторов по исправлениям был одобрен, и авторы подали официальную пересмотренную заявку.]

Ниже приводится довольно длинный «список» ключевых проблем, связанных как с экспериментальными подходами, так и с интерпретацией данных.

1) Наблюдение за тем, что IGFB7, высвобождаемый из моноцитов и линии клеток моноцитов THP-1, опосредует розетку, основано на интерпретации данных, показанных на Фигуре 3 (нейтрализующие антитела) и экспериментах по нокдауну гена (Фиг.8). Что касается эксперимента с нейтрализующим антителом, похоже, что отсутствует надлежащий контроль. Авторы включили изотипические контроли, но не заявили, были ли контроли в концентрациях, аналогичных анти-IGFB7 Ab.Кроме того, контроль IgG направлен против NID1, а не является неспецифическим IgG. Было бы полезно показать розетку без CSMT на рисунке, чтобы обеспечить основу. Возможно, что различия в эффекте Abs не связаны с блокировкой конкретных рецепторов, а скорее отражают различия в свойствах Abs.

Все используемые в работе антитела имели рабочую концентрацию 25 мкг / мл, включая изотипические контроли. Приносим извинения за упущение этого вопроса.Мы добавили информацию соответственно:

«… Специфичность ингибирования розетки антителами была подтверждена экспериментами с использованием контрольных изотипов антител при той же рабочей концентрации (25 мкг / мл) (Рисунок 7 – приложение к рисунку 1A)».

Были включены изотипические контроли, чтобы исключить неспецифичность антител. Как показано на нашей фигуре 7 – рисунок в приложении 1А, присутствие этих контрольных изотипов антител не влияло на способность IGFBP7 вызывать большее розетение, и присутствие только этих изотипов антител также не оказывало значительных изменений в скорости розеток.Использование anti-NID1 в эксперименте также действовало как внутренний контроль для эксперимента из-за его отрицательного эффекта.

Мы добавили скорости розетки без CSMT (контроль) на все графики на Рисунке 3.

Мы не согласны с тем, что наблюдаемый эффект не был связан со специфическим блокированием рецепторов, поскольку мы включили в эксперименты правильные типы изотипов антител. Пожалуйста, обратитесь к рисунку 7 – приложение к рисунку 1A для этого и к таблице основных ресурсов для антител, которые мы использовали в этом исследовании.

2) IGFB7 был идентифицирован как фактор, который опосредует розетку, но неясно, проявляет ли IGFB7 такую ​​же чувствительность к теплу, что и активность надосадочной жидкости (рис. 1). Авторы не проводили никаких экспериментов, которые показали бы, являются ли концентрации IGFB7, обнаруженные в супернатанте клеток THP1, аналогичными тем, которые опосредуют розетку.

Эксперименты на рисунке 2D (тот, который включал тепловую обработку супернатанта культуры) показали, что тепловая обработка снижает, но не полностью ослабляет эффект розетки-стимуляции супернатанта, демонстрируя участие нескольких игроков в розеточной стимуляции.Мы не пытались утверждать, что IGFBP7 термостабилен. Это был процесс расшифровки игроков розеточной стимуляции с нуля. Мы провели эксперимент по термообработке (рисунки 4E-F), чтобы показать, что стимулирующий розетку эффект нашей рекомбинантной суспензии IGFBP7 не связан с потенциальным небелковым загрязнением продукта, что также подразумевает, что белок не является термостабильным. Это также соответствует рисунку (рис. 2D), что существует такая большая разница в розеточной стимуляции (P = 0.0009) между неотапливаемым и обогреваемым отсеками, поскольку IGFBP7 играет важную роль в этом явлении.

Мы действительно выполнили количественное определение IGFBP7, секретируемого THP-1, в культуральный супернатант (рис. 8B). Воздействие на паразитов 1x 10 5 клеток THP-1 в течение 24 часов было достаточным для стимуляции секреции этими клетками большего количества IGFBP7 (от исходного уровня ~ 10 нг / мл до ~ 20 нг / мл). Супернатант культуры, который мы использовали для анализа розетки, состоял из 1х 10 6 клеток.

Рисунок 1 B: добавлены аутологичные лейкоциты.Почему это важно для аутологичных клеток? Если розетка была настолько зависимой, как авторы пытаются заявить о IGFBP7, это не должно иметь значения, являются ли это аутологичными или гетерологичными клетками?

В начале эксперимента мы вообще ничего не знали о IGFBP7 и изо всех сил старались спланировать эксперименты, которые минимизировали бы мешающие факторы как можно лучше. Поэтому мы использовали аутологичные клетки. Но впоследствии мы использовали клетки от здоровых доноров (рис. 1C) и все же увидели рост розетки.Следовательно, после этого потребность в аутологичных клетках была снята.

Рисунок 1C: Это аутологичные клетки?

Рисунок 1C: 3 донора и 4 паразита должны дать 12 точек данных, но только 10 нанесены на график.

Использовано 3 донора на 3 паразитов (9 участков). Вскоре после эксперимента мы получили клетки от другого донора, и в тот день сотрудник случайно разморозил клинический изолят P. falciparum [RDM00036, как указано в разделе «Материалы и методы»], который не был использован для ее исследования малярии vivax.Таким образом, мы набрали донорские клетки и нежелательный P. falciparum и получили график 10 th на графике.

На рисунке 1D отсутствует статистическая проверка.

Мы действительно выполнили двусторонний дисперсионный анализ с помощью теста множественного сравнения Тьюки для этого. Наносить звездочки на решетку было слишком грязно. Поэтому мы ставим звездочки на подписи к рисункам, поскольку все паразиты показали одинаковую степень значимости (в пределах одной категории звездочки) для всех сравнений.

3) Другая проблема связана со вторым важным выводом, а именно, что фактор фон Виллебранда и тромбоспондин-1 необходимы для воздействия рекомбинантного IGFB7 на розетку. Вовлечение этих двух факторов должно происходить, когда они добавляются в насыщающих концентрациях. В противном случае каждый фактор мог бы действовать через один и тот же механизм. Таким образом, необходимо продемонстрировать зависимость доза-ответ для фактора фон Виллебранда и тромбоспондина и розеток.

Мы провели такие эксперименты с эффектом доза-эффект для VWF (рис. 7D) и TSP-1 (рис. 7F), зафиксировав дозу IGFBP7 на уровне 100 нг / мл.Фактически, именно в ходе эксперимента на рисунке 7D мы поняли, что в этом участвует еще один игрок, полученный из сыворотки. И с помощью эксперимента на фиг. 7F, фиксируя рабочие концентрации IGFBP7 и VWF, мы проверили эффект TSP-1 при 10 нг / мл и 500 нг / мл. Мы определили рабочие концентрации VWF и TSP-1 на основе обзора литературы. Для здоровых людей уровни VWF в сыворотке колеблются от 0,48 до 1,24 МЕ / мл, тогда как у людей с основными патологическими состояниями уровни VWF могут быть намного выше (> 300 МЕ / мл) (Terpos et al., 2013; Kasritis et al., 2016). Поэтому мы установили рабочие концентрации VWF на уровне 2 МЕ / мл. Диапазон сообщаемых концентраций TSP-1 в сыворотке крови у здоровых людей сильно различается: в одном исследовании сообщалось о диапазоне от 0 до 12060 нг / мл (Rouanne et al., 2016). Уровни TSP-1 в сыворотке крови здоровых людей, полученные в другом исследовании, варьировались в зависимости от статуса ожирения, при этом у лиц, не страдающих ожирением, уровни TSP-1 в сыворотке крови составляли 162,7 ± 34,5 нг / мл, а у лиц с ожирением – уровни TSP-1 в сыворотке крови, равные 162,7 ± 34,5 нг / мл. 220.9 ± 46,7 нг / мл (Liu et al., 2015). Перед экспериментом на Фигуре 7F мы уже обнаружили, что третий игрок, полученный из сыворотки, требовался только в низкой концентрации, где даже 2% обогащенной сывороткой среды RPMI1640 было достаточно для поддержки опосредованного IGFBP7 розетения. Имея эту информацию, в эксперименте использовались две рабочие концентрации TSP-1, то есть 10 нг / мл и 500 нг / мл.

На протяжении всей рукописи авторы говорят о «сывороточных факторах». Но единственное, что я могу найти, когда речь идет о сборе крови, – это гепарин лития.Это означает плазмы , а не сыворотки . Так действительно ли эта статья посвящена плазменным факторам?

Мы собрали паразитосодержащие упакованные клетки крови, которые не должны быть коагулированы вакутейнерами с антикоагулянтом лития и гепарином. Но для приготовления питательной среды (такой же, как экспериментальная среда) мы используем простые пробирки, которые позволяют крови свертываться, затем собирают сыворотку и используют в качестве обогащения для RPMI1640. Впоследствии, когда мы заменили сыворотку на Альбумакс в качестве обогащения среды, стимуляция розетки, опосредованная IGFBP7, не наблюдалась.Следовательно, «сывороточный фактор» – подходящее слово для использования в этом контексте.

Рисунок 3: В целом P. vivax дает намного больше розеток, чем P. falciparum . Какое этому объяснение?

Похоже, это свойство высокой розетки распространено среди популяции P. vivax или, по крайней мере, в Таиланде. Об этом сообщили Chotivanich et al. два десятилетия назад (Chotivanich et al., 1998) и нашей группой несколько лет назад (Lee et al., 2014). Мы не знаем причины этого. Это может быть признаком географического происхождения, но, скорее всего, это общая черта для P. vivax , поскольку розетка обычно обнаруживается и у P. vivax из Нового Света (Marin-Menendez et al. ., 2013, PLoS Negl Trop Dis 7: e2155).

4) В экспериментах по изучению чувствительности к ферментам (трипсин на рисунке 5 и гепариназа на рисунке 6) авторы не удаляют фермент перед тестированием на розетку. Кроме того, авторы сообщают о влиянии концентрации фермента, а не активности фермента.Используемые ферменты не являются чистыми, поэтому необходимо учитывать неспецифические эффекты.

Мы не согласны с рецензентом. Мы упомянули этапы стирки в разделе «Материалы и методы». Анализ розеток проводили в условиях, свободных от этих ферментов. Сообщение о концентрации трипсина в работах, связанных с розеточными лигандами Plasmodium spp. всегда делалось таким образом (Crabb et al., 1997, Cell 89: 287). Поскольку имеющиеся на рынке растворы ферментов не являются 100% трипсином, представление значений веса / объема на основе расчетов после обращения к информационному листу продукта должно быть лучшим способом представления.Мы понимаем, что при использовании растворов трипсина может существовать основной риск неспецифичности. Следовательно, мы использовали другие подходы для расшифровки вовлеченных розеточных лигандов.

5) Авторы используют широкий спектр линий паразитов и изолятов от пациентов, и в полученных результатах наблюдается значительная неоднородность. Необходимо лучше объяснить рациональность использования различных лабораторных изолятов. Также следует уточнить, что клинические изоляты, скорее всего, являются клональными.

Наше намерение состояло в том, чтобы сгенерировать данные, которые могут максимально точно представить фактическую популяцию паразитов, которую мы изучали, поэтому мы использовали клинические изоляты. Однако в ходе этого исследования количество случаев быстро уменьшилось. Многие основные лабораторные линии паразитов, которые в течение многих лет культивировались на средах, обогащенных Альбумаксом, утратили способность к розетке. Хотя некоторые из них смогли показать розетку после длительного периода культивирования в средах, обогащенных сывороткой (например,грамм. 3D7, CS2), скорость их розеток всегда была на низком уровне без очистки субпопуляции, образующей розетки (которая нам не нужна, поскольку такая очистка может не отражать фактическую популяционную динамику паразитов) в каждом цикле культивирования. Поэтому мы решили адаптировать как можно больше клинических изолятов к условиям культивирования in vitro и использовали их для экспериментов в этом исследовании.

Мы не знаем и не можем предполагать, как делает обозреватель, что культуры, полученные из клинических изолятов, являются клональными, поскольку мы не оценивали уровень их клональности.

6) Паразит, экспрессирующий VAR2CSA – могут ли авторы подтвердить, что он экспрессировал VAR2CSA? А как насчет CS2_WT?

Для линий паразитов, экспрессирующих VAR2CSA NF54, VAR2CSA_WT и NF54_T934D, было выполнено секвенирование для проверки целостности VAR2CSA и наличия ожидаемых мутаций. Пожалуйста, обратитесь к рисунку 4 недавно опубликованной статьи (Dorin-Semblat et al., 2019) для получения более подробной информации.

Для CS2_WT мы провели анализ трипсина. Схема переваривания такая же, как и для Var2CSA (антитело против САР) (изображение ответа автора 1).Поскольку это фактически часть другого исследования, мы не хотим включать этот рисунок в качестве рисунка или дополнительного рисунка для этой рукописи.

7) На рисунке 5D клинический изолят имеет очень низкую розетку по сравнению со многими другими использованными изолятами. Могут ли авторы предположить, почему это может быть так?

Эксперимент на рис. 5D был проведен на поздних стадиях цикла, которые, как объяснено в рукописи, являются стадией развития, на которой PfEMP1 является единственным поверхностно экспрессируемым розеточным лигандом.Хотя поверхностная экспрессия уже инициируется на этой стадии развития, поверхностная экспрессия розеточных лигандов достигает оптимального состояния только через несколько часов (поздняя стадия трофозоитов). Следовательно, скорость розетания IRBC в этом эксперименте (в котором использовались поздние кольцевые стадии по сравнению с остальными экспериментами, в которых использовались зрелые / поздние стадии) была ниже.

8) Линия экспрессии VAR2CSA особенно бедна розеткой. Это говорит о том, что на уровни розеток может влиять экспрессированный PfEMP1.Было бы интересно, если бы авторы могли дать некоторое представление об этом. Например, чем отличается FVT402 от 3D7 или MK183?

Мы согласны с рецензентами, что это важный и интересный аспект, учитывая, что 3D7 является линией паразитов африканского происхождения, тогда как FVT402 и MKK183 – это тайские изоляты. Мы полагаем, что это выходит за рамки текущего исследования, поскольку объединение всей этой информации в одну рукопись будет слишком сложным и отвлечет от основного фокуса этой работы: розетки, опосредованной IGFBP7.

9) Авт. Предполагают, что PfEMP1 является лигандом паразита, который обеспечивает это розетение через TSP1. Однако очевидно, что уровни розеток различаются между изолятами и линиями.

Различные изоляты и линии могут иметь разную насыщенность / уровни IRBC, экспрессируемого на поверхности PfEMP1. Это может быть одной из причин наблюдаемых различий в скорости розеток. Кроме того, сыворотки, которые мы использовали для обогащения среды, а также эритроциты, которые мы использовали при культивировании, были от разных людей.Это может способствовать наблюдаемым вариациям. На протяжении многих лет мы изо всех сил старались использовать постоянные условия и материалы для экспериментов. Однако это аспекты, которые мы не можем контролировать. Тем не менее, важно подчеркнуть, что вместе TSP-1 и VWF способствуют опосредованному IGFBP7 розетированию в тестируемых изолятах и ​​линиях.

10) На рис. 6 авторы показывают, что на розетку влияют клинические изоляты, и на это влияет me анти-CR1. Этот результат несколько удивителен, поскольку он предполагает, что все паразиты экспрессируют CR1-связывающий PfEMP1.Разве это не только подмножество PfEMP1, связывающее CR1? Могут ли авторы это объяснить?

Не все набранные изолятов P. falciparum показали сильное розеточное ингибирование антителами против CR1. Однако некоторые показали резкое снижение скорости образования розеток антителами. В совокупности набор данных показал значительную разницу. Возможной причиной может быть неспецифическое ингибирование, такое как стерическое затруднение. Однако здесь это маловероятно, поскольку наши данные из P.vivax показали, что одно и то же антитело незначительно влияет на скорость их розетения. Наш шаблон набора данных по-прежнему укладывается в утверждение, что только подмножество PfEMP1 розетки через привязку CR1.

11) На рисунке 7 и в подразделе «Кофакторы сывороточного происхождения в IGFBP7-опосредованном розетке» авторы, по-видимому, утверждают, что крупные белки удалялись с помощью фильтра 0,45 микрон. Заявление неточно. Более вероятно, что авторы удаляют крупные белковые агрегаты.

Мы благодарим рецензента за это, это было исправлено:

«Все описанные выше эксперименты проводились с использованием среды, обогащенной человеческой сывороткой на 20%. Однако фильтрация сыворотки с помощью фильтра 0,45 мкм отменила индуцированное IGFBP7 розетение (фигура 7A). Эти результаты показали, что другие белковые агрегаты или мультимеры большого размера, полученные из сыворотки, могут потребоваться для опосредованного IGFBP7 эффекта розетения ».

12) В эксперименте, изображенном на рисунке 8, отсутствуют элементы управления.Эксперименты по нокдауну, опосредованному лентивирусными векторами, требуют контроля нецелевых эффектов. Необходимо иметь два вектора shRNA, нацеленных на разные последовательности одного и того же гена. Авторы представляют только одну. Также может возникнуть некоторая путаница в отношении техники, поскольку в подразделе «Нокдаун экспрессии IGFBP7 с помощью THP-1 с использованием трансдукции РНКи» говорится, что использовалась миРНК, и правильным термином должно быть шРНК.

Изменено:

«… клетки THP-1 трансдуцировали shRNA лентивирусными векторами, специфичными…»

13) Пытаясь быть краткими и краткими, авторы приводят очень мало экспериментальных деталей – особенно касающихся того, как эксперимент решает конкретный вопрос в основном тексте.Это очень затрудняет понимание работы тем, кто не является экспертом в данной области. Хотя в разделе «Материалы и методы» представлена ​​вся необходимая информация, он очень подробный и поэтому затрудняет и утомляет поиск нужной информации. Например, «использование зимозана А» для многих читателей не предоставит релевантной информации для интерпретации результатов. Другие опасения возникли по поводу ясности всей рукописи. Ниже приведены несколько примеров, которые могут сбить с толку.При проверке того, содержит ли бесклеточный супернатант биологически активное вещество, необходимо исследовать серийные разведения, а затем использовать для химической характеристики разведения, приводящие к 50% активности. Если фактор высококонцентрирован в надосадочной жидкости, потери из-за температуры, например, могут не наблюдаться. Пожалуйста, измените предложение в подразделе «Влияние супернатантов культур THP-1 и фракционирование супернатантов», так как оно сбивает с толку.

Мы последовали совету и добавили больше «мостов», чтобы объяснить или оправдать необходимость последующих экспериментов, которые были проведены после предыдущих.

Мы добавили краткое описание зимозана A:

«… Мы предположили, что опосредованное IGFBP7 розетение может быть стратегией, используемой паразитами для предотвращения фагоцитоза. Чтобы проверить это, мы провели контрольный эксперимент с использованием зимозана A (комплекс белок-углевод, полученный из клеточной стенки дрожжей, обычно используемый в анализах фагоцитоза) и показали, что IGFBP7 сам по себе не подавляет фагоцитозную способность THP-1 (рис. 8E). . »

Внесены изменения:

«Фракционирование CSMT на водную и липидную фракции показало, что факторы, стимулирующие розетку, находились в водной фракции (рис. 2А).Впоследствии мы дополнительно фракционировали водную фракцию на фракции с высокой и низкой молекулярной массой (с пороговым значением 30 кДа). Обе водные субфракции индуцировали розетку у P. falciparum и P. vivax (рисунки 2B и 2C), демонстрируя, что стимуляция розетки опосредована множественными секретируемыми гидрофильными факторами, преимущественно размером ≤ 30 кДа (особенно для P . falciparum ) ».

14) Наконец, есть возражение против характеристики розетки, изучаемой здесь, как розетки “типа II” и отличия ее от розетки “типа I”.В разделе «Введение» авторы пишут: «Мы также показали, что опосредованное IGFBP7 розетирование отличалось от ранее описанного розетения (определяемого здесь как розетирование типа I), где оно (мы называем розеткой типа II) требовало появления дополнительных сывороточных факторов. , в дополнение к взаимодействию между лигандом паразитарного происхождения на поверхности IRBC и рецептором на поверхности URBC ». Потребность в сывороточных факторах при розетке была описана ранее. Например, Стивенсон и его коллеги провели обширные исследования α-2-макроглобулина, который сам по себе может вызывать розетку, в то время как другим белкам требуется несколько факторов вместе, чтобы быть эффективными.Не могли бы авторы пересмотреть этот момент и просто назвать розетку «типом II» просто розеткой?

Причина, по которой мы переопределяем розетки как «тип I» и «тип II», заключается в том, что классический тип I – это розетка, включающая прямое взаимодействие между розеточным лигандом и розеточным рецептором. Однако розетка типа II включает другие факторы, которые объединяют розеточный лиганд и рецептор, без которых скорость розетки упала бы до базовых уровней, вносимых розетками типа I.Подчеркнем, что мы не претендуем на роль первооткрывателей этого явления. В самом деле, как описано в рукописи, фактор комплемента d, а также макроглобулин, упомянутый рецензентом, также являются стимуляторами розетки. Однако эти факторы не являются ни лигандами, ни рецепторами, которые сами по себе тоже могут образовывать стабильные розетки. Следовательно, мы думаем, что важно различать два типа розеток.

Комментарий авторов о том, что они фактически использовали сыворотку, а не плазму, сбивает меня с толку и заставляет меня усомниться в результатах относительно фактора фон Виллебранда.

а) Когда образуется сыворотка, кровь свертывается. Активируются тромбоциты, активируются факторы свертывания и используется фактор фон Виллебранда. Итак, сколько же ФВ остается в сыворотке крови? Обычно, когда VWF измеряется у людей, он всегда измеряется в плазме. Часто в литературе у людей возникают трудности с разделением сыворотки и плазмы, как, например, в Ogawa et al., 2001, где заголовок содержит «сыворотка», но когда я читаю в материалах и методах, что на самом деле использовалось, это плазма.Также в статье Kastritis et al., 2016 они говорят об «сывороточных уровнях VWF» в названии, но когда я читал материалы и методы, они использовали HemosIL, для функционирования которого требуется плазма.

В данной статье авторы не показали, что в их сыворотке есть какой-либо VWF, они просто утверждают, что наблюдаемый эффект обусловлен действием антител против VWF. И это антитело (кроличий поликлональный 6994) распознает как бычий, так и человеческий VWF. Итак, как мы узнаем, что антитело не вступает в перекрестную реакцию с чем-то еще в анализе?

б) Они использовали Альбумакс II, который содержит <1% IgG.В Альбумаксе I содержится менее 0,1% IgG, что означает, что, вероятно, в Альбумаксе II присутствует почти 1% IgG. Существуют ли также другие более крупные белки, такие как фактор Виллебранда? Альбумакс производится из бычьей сыворотки. Если в сыворотке крови человека все еще должен быть ФВ, в чем я сомневаюсь, исходя из вышеизложенных соображений, он также может присутствовать в Альбумаксе.

Итак, в заключение, если авторы собираются и дальше утверждать, что есть эффект из-за VWF, я хотел бы видеть его измеренным в их культуральной среде.

Мы количественно оценили уровни VWF в средах, используемых в этом исследовании. Мы взяли образцы сывороток двух основных источников сыворотки и подготовили питательные среды. Результаты представлены на Рисунке 7 – в приложении к рисунку 1B. Уровень VWF в нашей обогащенной сывороткой среде был адекватным (выше 0,125 МЕ / мл), чтобы поддерживать опосредованное IGFBP7 розетение. Среда, обогащенная альбумаксом, и простая среда показали уровень VWF (если таковой имеется), который был ниже предела обнаружения набора для ELISA (2.56 x 10 -5 МЕ / мл). Мы также включили эту информацию в текст:

«… Наконец, мы количественно оценили количество VWF, необходимое для облегчения опосредованного IGFBP7 розетирования. При добавлении IGFBP7 и TSP-1 в среду, дополненную Альбумаксом, достаточно низкого уровня VWF, равного 0,125 МЕ / мл, для значительного увеличения скорости розеток с оптимальным приростом, достигнутым при 0,5 МЕ / мл (рис. 7G). Фактически, среда с 20% -ным обогащением сыворотки, которую мы использовали для этого исследования, содержала VWF выше 0.125 МЕ / мл (Рисунок 7 – приложение к рисунку 1B) ».

Мы хотели бы воспользоваться этой возможностью, чтобы не согласиться с комментарием о том, что сыворотка не содержит VWF. В буклете набора для ELISA, который мы использовали, сыворотка также отмечена как один из подходящих образцов для VWF. Исходя из предложенного разведения, сыворотка кажется лучше, чем плазма, для восстановления низкого уровня VWF.

Кроме того, было проведено сравнение количественного определения VWF с использованием плазмы и сыворотки, и уровни VWF в плазме и сыворотке не показали значительной разницы (P = 0.752) (Kovacevic et al., 2019. Atherosclerosis, 290 , 31-36. Doi: 10.1016 / j.atherosclerosis.2019.09.003).

Контрольные эксперименты по детонации в THP1

Как и было обещано в предыдущем раунде опровержения, мы также провели трансдукцию кшРНК, чтобы отключить неродственный ген (гликофорин C) на THP-1, используя те же лентивирусные векторы с той же молекулярной основой, произведенные той же компанией (Sigma), что и контроль. На экспрессию IGFBP7 с помощью GlyC-KD THP-1 не влияет нокдаун GlyC, и клетки секретируют больше IGFBP7 при воздействии паразитов.

Кроме того, мы также количественно оценили уровень IGFBP7 в культуральном супернатанте THP-1-WT, IGFBP7-KD-THP-1 и GlyC-KD-THP-1 и использовали их для анализа розетки на P. falciparum. , наряду с использованием в эксперименте антитела против IGFBP7 человека. Мы переписали раздел, чтобы включить это в текст:

«Клетки THP-1 трансдуцировали shRNA лентивирусными векторами, специфичными для IGFBBP7, и векторами, специфичными для неродственного белка, гликофорина C. Нетрансдуцированные клетки служили дикими типами (THP-1_WT).[…] Важно отметить значительную разницу между группами супернатантов культур «THP-1_WT_URBC» и «THP-1_WT_IRBC» (P = 0,0018), а также «GlyC-KD_THP-1_URBC» и «GlyC-KD_THP-1_IRBC» (P = 0,0013), но не между «IGFBP7-KD_THP-1_URBC» и «IGFBP7-KD THP-1_IRBC» (P = 0,6011) убедительно свидетельствует о том, что IGFBP7 может быть одним из ключевых продуктов, секретируемых моноцитарными клетками в ответ на воздействие паразитов, тогда как другие факторы, участвующие в стимуляции розетки, могут секретироваться на исходном уровне с присутствием паразитов или без них (Рисунок 8 – приложение к рисунку 2B).”

https://doi.org/10.7554/eLife.51546.sa2 .

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *