Содержание

Холодильник бирюса инструкция по эксплуатации :: bestamaspound

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Эксплуатации.00 РЭ. Поддон. Барьер Крышка Опора регулировочная. Скачайте бесплатно руководство по эксплуатации холодильника Бирюса 149. Перед. Началом. Эксплуатации. Настоятельно. Рекомендуем. Вам. Ознакомиться. С. Настоящим. Руководством. В каждом доме есть холодильник, но не у каждого пользователя сохранилось руководство по.

Эксплуатации холодильника Бирюса 228 3. Бирюса 129 Холодильник инструкция, паспорт, описание, мануал, руководство, форум, Инструкция по эксплуатации. Скачать руководство по эксплуатации холодильника Бирюса Е. Холодильник двухкамерный Бирюса 135инструкция по эксплуатации. Холодильник Бирюса инструкция на русском языке бесплатно.

Правила безопасности:. По мнению специалистов, любая инструкция содержит несколько ключевых нюансов. ЭКСПЛУАТАЦИЯ Модели холодильников с электронным блоком с дисплейной индикацией Бирюса 125, 129, 130. Холодильники БИРЮСАинструкции по эксплуатации. Инструкция. Устройство. Размер. БИРЮСА 6. Холодильник. Как правило, к.

Конструкция. Холодильных. Приборов. Как правило, к любой модели холодильника Бирюса прилагается подробная инструкция по его эксплуатации. Прежде всего, речь идет о высоком качестве всего холодильного оборудования. Инструкция по эксплуатации холодильника Бирюса Е. Руководство по эксплуатации. При эксплуатации холодильника соблюдайте.

Любой модели холодильника Бирюса прилагается подробная инструкция по его эксплуатации. Установка холодильника 2. ЭКСПЛУАТАЦИЯ 7. Установка холодильника 2. ЭКСПЛУАТАЦИЯ 7. Холодильники Бирюса: инструкция по применению и мнения покупателей. Бирюса прилагается подробная инструкция по его эксплуатации. Бытовые холодильники Бирюса 6, Бирюса руководство по.

 

Вместе с Холодильник бирюса инструкция по эксплуатации
часто ищут

 

холодильник бирюса как регулировать температуру.

устройство холодильника бирюса.

холодильник бирюса 18с инструкция.

холодильник бирюса температурный режим.

холодильник бирюса 6 инструкция.

холодильник бирюса 22 инструкция.

холодильник бирюса настройка температуры.

холодильник бирюса 2 инструкция

 

Читайте также:

 

Вормил инструкция для профилактики

 

Должностная инструкция делопроизводителя в доу

 

Инструкция по медицинскому применению препарата аугментин

 

Инструкция По Эксплуатации Морозильной Камеры Бирюса 14

МОРОЗИЛЬНИК «БИРЮСА- 9», МОРОЗИЛЬНИК «БИРЮСА- 1. МШИ 1. 20. Морозильник «Бирюса- 9» предназначен для быстрого замораживания свежих пищевых продуктов и их длительного хранения в домашних условиях.

Морозильная камера конструктивно разделена на четыре секции. В двух из них установлены откидные барьеры, а в двух других — выдвижные корзины. На верхней плоскости морозильника смонтирован сервировочный столик с пластиковым покрытием. Морозильник работает в режимах «Замораживание» и «Хранение». На наружной поверхности сервировочного столика предусмотрена сигнализация о режиме работы морозильника. Устройство морозильника. Морозильник (рис.

Подробные характеристики морозильника-шкафа Бирюса 14 ЕK, Холодильники; Бирюса. Минимальная температура в морозильной камере?

Инструкция По Эксплуатации Морозильной Камеры Бирюса 148

Мануал холодильника марки БИРЮСА содержит информацию по уходу и.

Инструкция БИРЮСА 14 EK морозильная камера - руководство по .

Инструкция По Эксплуатации Морозильной Камеры Бирюса 145с

В верхней части камеры расположено отделение быстрого замораживания продуктов. Морозильник имеет два режима работы: «Замораживание» и «Хранение». Работой морозильника управляет блок управления и сигнализации, встроенный в столик 4, и терморегулятор, установленный на задней стенке шкафа.

В блок управления и сигнализации входят переключатель режимов работы 6 с подсветкой (оранжевая лампа) и две индикаторные лампы — 7 (зеленая) и 8 (красная). Тут же расположена информационная табличка 5.

Дверь морозильника в закрытом положении плотно прилегает к шкафу благодаря специальной магнитной вставке, которая находится в баллоне эластичного уплотнителя. Морозильник «Бирюса- 1. Бирюса- 1. 2» и отличается от него в основном увеличенной толщиной теплоизоляции стенок шкафа и двери, конструкцией хо­лодильного агрегата (рис. С включением морозильника загораются встроенные в окантовку столика зеленая и красная лампы.

Перед началом эксплуатации настоятельно рекомендуем. Бирюса 14E. 6

. с верхним расположением морозильной камеры. «Бирюса 153E» . Мануал холодильника марки БИРЮСА содержит информацию по уходу и Инструкция БИРЮСА 14 EK морозильная камера - руководство по.

Зеленая лампа указывает на подачу напряжения в морозильник и горит постоянно, а красная сигнализирует о повышенной температуре в камере морозильника и гаснет при достижении нужной температуры. В окантовке столика имеется переключатель быстрого замораживания, который можно устанавливать в положение «Замораживание» или «Хранение». При установке переключателя в положение «Замораживание» загорается оранжевая лампа, морозильник работает непрерывно при минимальной температуре. При установке переключателя в положение «Хранение» оранжевая лампа гаснет и морозильник переводится на цикличную работу. Температура, необходимая для обеспечения сохранности замороженных продуктов, поддерживается автоматически при помощи терморегулятора с постоянной настройкой. Настройку терморегулятора осуществляют таким образом, чтобы плоскость лыски на оси терморегулятора совпадала с метками на кожухе. Отклонения устраняют поворотом оси терморегулятора 3 (рис.

Устройство морозильника. Морозильник выполнен в виде напольного шкафа

, внутри которого имеется камера с резервуарами 1 и 2 (рис. 1.) . МОРОЗИЛЬНИК «БИРЮСА-9» МОРОЗИЛЬНИК « БИРЮСА - 14 » МШИ 120. Книги, инструкции,пособия по ремонту холодильников · Датчики реле температуры Морозильная камера конструктивно разделена на четыре секции. Бирюса 146 KL Морозильная Камера Инструкция, описание, мануал, руководство, форум, Инструкция по эксплуатации. по эксплуатации. Бесплатно. Windows 7, 8, XP, Vista | Android | iOS1203043. 14, pdf, 1.15MB. Загрузить.

Режим работы морозильника рассчитан на непрерывную работу герметичного компрессора при замораживании. Электрическая схема морозильника показана на рис.

 

 

 

2-х камерный холодильник Бирюса W380NF по выгодной цене

Объем холодильной камеры240 л
Размораживание камерысистема No Frost
Система охлаждениямногопоточная система Air Flow для стабильного поддержания температуры
Температурный режимот 0 до 8 °C
Количество полок4 полки, из них 3 переставляемые по высоте
Материал полокзакаленное стекло (нагрузка до 40 кг)
Ящики для овощей1 ящик - Fresh Zona с регулятором влажности
Дверные корзины4 шт
Внутренние освещениеLED-подсветка на задней стенке
Принадлежности2 подставки для яиц; масленка
Объем камеры130 л
Размораживание камерысистема No Frost
Температура храненияне более -18 °C
Количество отделений4 выдвижных ящика
Возможность замораживанияне менее 5 кг/сутки
Время сохранения температуры при отключении электроэнергиивремя повышения температуры от -18 до -9 °C - не менее 17 часов
Дополнительные функцииуправление режимом замораживания
Класс энергопотребленияA
Климатический классST, температура окружающего воздуха +16. ..+38 °C
Потребление электроэнергии1,12 кВт*ч/24 часа
Номинальная потребляемая мощность115 Вт
Номинальное напряжение220 В / 50 Гц

Холодильник Бирюса 130 позиционирует себя как один из самых ярких показателей того, как должен выглядеть отличный бюджетный холодильник. Ведь самые главные признаки, по которым судят холодильники расположенные в этом классе, это лаконичность в дизайне, качество, экономичность и простота в ремонте. Со всеми этими пунктами прекрасно справляется Бирюса 130. Если рыть по сусекам этого аппарата, можно найти множество плюсовых качеств, которые превосходят по параметрам иных холодильников. Во-первых, экономичность. Бирюса 130 распологает классом энергопотребления В, что для холодильника данного уровня, просто бесподобный результат.

Количество употребляемой анергии в год, у холодильника Бирюса 130 составляет 405 кВтч. Действительно внушительный показатель, не так ли? Холодильник, кстати, имеет довольно приемлемый дизайн, который можно назвать универсальным. Нижнее расположение морозилки уже давно стало классикой, для большинства пользователей, а белый, без лишних элементов корпус, четко впишется какую угодно кухню, каким бы не был ее ремонт, и расстановка мебели. Два компрессора и электронный блок управления холодильником, никак не влияют на потребление энергии, что является еще одним успехом разработчиков Бирюса 130. Холодильник имеет высоту 190 сантиметров, и кушает изобутан (хладагент R600a). Морозильная камера Бирюса 130 имеет ручное размораживание, а холодильная камера устройства обладает автоматической системой оттаивания. Морозильник может развивать температуру до -18 градусов по Цельсию, и замораживать в сутки до 12 килограмм продуктов. В холодильнике реализована комплексная система оповещений, при различных ситуациях.
Этот холодильник «подскажет» вам, что вы случайно не закрыли дверцу Бирюса 130 звуковым и световым сигналом, а так же, вы будете в курсе изменения температуры в камерах, аналогичным способом. Холодильник Бирюса 130 имеет прекрасный показатель в объеме. Его морозилка занимает 100 литров, а холодильная камера – 245 литров. Но самое главное, как мы уже говорили, это простота в ремонте. Холодильники Бирюса 130 можно отремонтировать даже самостоятельно! Конечно же, серьезные поломки вы сами не устраните, однако некоторые мелочи, руководствуясь разделом «ремонт», что в инструкции, вы легко приведете в рабочее состояние. На крайний случай, производитель дает гарантию на свою продукцию, и вы можете воспользоваться бесплатным ремонтом на протяжении трех лет, однако если устройство сломалось гораздо позже, как это обычно бывает… В таком случае у вас только один выход. Обратиться в ремонтную компанию, такую как наша фирма, и мы быстро обслужим вас, проведем необходимую диагностику и ремонт холодильника в считанные часы.
Большинство поломок, можно устранить на дому, но если необходим вывоз устройства на ремонтную базу, мы с легкостью организуем это дело. Ремонт холодильников Бирюса 130 с нашей помощью покажется вам незаметным, и уже через несколько дней, даже самые сложные поломки будут устранены. Кроме прочего, мы предоставляем гарантийный срок на новые детали, которые устанавливаем в ваш холодильник, на один, а то и на два года, в зависимости от детали, поэтому мы отвечаем за наших сотрудников и за их работу в полной мере.

 

 

        

Холодильник бирюса инструкция

Холодильник: купить холодильник б/у объявления на olx. Kz.
Оао «кзх «бирюса»::руководства по эксплуатации.
Бирюса 6 8 10 14 151 153 05. 22. 0000. 00ðý.
Холодильник бирюса – инструкции по эксплуатации на русском. Инструкция по эксплуатации и паспорт холодильника "бирюса 1". Инструкция: холодильник 134 от бирюса // инструкции на.

Технические характеристики холодильник бирюса 110.

Инструкция: холодильник бирюса 135 // инструкции на holodocs.
Горит восклицательный знак на дисплее холодильника.

Морозильная камера б. У холодильники olx. Kz.

Ремонт холодильника бирюса ( часть 2 ) / refrigerator repair.

Бирюса 10 инструкция, характеристики, форум.

Не уходит вода в холодильнике. [1] конференция ixbt. Com.

Бирюса 8.

Пылесос audra типа пн-600у4. Только руководство по. Холодильник "бирюса".Онлайн консультация по ремонту холодильников. Samsung rl34ecms комментарии. Мнение. Обсуждение.

Двухкамерный холодильник бирюса 130 инструкция.

Скачать музыку пиратская станция Трудности ассимиляции mkv скачать Скачать нба 2к15 торрент на пк Ленинград припев экспонат скачать А нам не холодно скачать честный

Amazon.com: Сетчатый ошейник KRUZ PET KZA102-18S для маленьких, средних и больших собак, регулируемый воротник на шее, мягкий, легкий, воздухопроницаемый, удобная посадка - малиново-розовый

Легкий и дышащий

Мягкие, легкие и дышащие шейные ошейники для вашей собаки. Воздушная сетка состоит из равномерно расположенных отверстий, которые создают воздухопроницаемый эффект и обеспечивают превосходный комфорт по сравнению с воротниками из нейлона и полиэстера. Сетчатый ошейник для собак сохранит прохладу и комфорт вашего друга. Идеальный воротник для повседневной носки, который будет стильно смотреться на шее пушистого друга.

Комфорт для вашей собаки

Обеспечивает ультра удобную посадку для вашего питомца за счет уменьшения нагрузки на область шеи, когда ваша собака тянет.Идеальный ошейник для тренировок или прогулок с приятелем, позволяющий держать все под контролем. Оснащен прочным D-образным кольцом, которое идеально подходит для легкого крепления поводка или идентификационной бирки для идентификации вашей собаки.

Регулируется для всех размеров

Доступны ошейники трех размеров для маленьких, средних и крупных собак. Полностью регулируемые воротники с тройным скольжением, которые позволяют легко регулировать размер для правильной посадки. Прочная пластиковая пряжка, которая быстро закрывается и остается закрытой. Наши ошейники идеально подходят для смелого заявления и являются одними из самых забавных ошейников, которые вы когда-либо найдете.

Прочные всепогодные ошейники

Состоящие из двухслойной воздушной сетки высокой плотности для повышения прочности на разрыв и прочной строчки гарантирует, что эти манжеты выдержат высокое давление тяги, а также будут устойчивы к истиранию.Эти всепогодные ошейники готовы к занятиям на свежем воздухе и рассчитаны на долговечность.

Lego Shell Tanker Truck Инструкция по сборке Цифровая инструкция Строительные игрушки Игрушки и хобби

Lego Shell Tanker Truck Инструкция по сборке Цифровая инструкция

Инструкция по сборке автоцистерны Lego Shell - Цифровая инструкция. Это ЦИФРОВАЯ инструкция по сборке грузовика LEGO Shell Tunker. Вы не имеете права передавать, переиздавать, копировать или распространять бесплатно или для прибыли создание этой модели или инструкции.- 3D-инструкции по сборке подвижных элементов в файле Lego Digital Designer. Состояние :: Новое: Совершенно новый, неиспользованный, неоткрытый, неповрежденный предмет (включая предметы ручной работы). См. Список продавца для получения полной информации. См. Все определения условий: /.





Lego Shell Автоцистерна инструкция по сборке Цифровая инструкция

Официальная лицензия - все изображения являются собственностью Фотобиблиотеки Mirrorpix. Наша индивидуальная майка - это красивая мужская одежда. Напечатанная в США и изготовленная в Перу из лучшего мягкого хлопка.Изоляция с двойными стенками для сохранения горячих напитков горячими и холодных напитков. В НАЛИЧИИ Mezco One 12 Ghostbusters Deluxe Box Set Action Figure, плотная акварельная бумага Fine Art (210 г / м2), чехол для мобильного телефона имеет откидную крышку с магнитной защелкой, поэтому вы можете быстро достать мобильный телефон из сумки. 【Послепродажное обслуживание】 Если есть какие-либо проблемы с качеством или вы обнаружите, что одежда непригодна для ношения после покупки. 4 Hand of Emrakul ~ Near Mint Rise of the Eldrazi 4x x4 Playset MTG Magic Colorl. И этого более чем достаточно, чтобы каждый день устанавливать какие-то мелочи, а также игольчатые ролики для автомобильного и промышленного применения.всевозможные значащие подарки, подходящие для дня рождения, Maisto Stylers 1960 Ford Starliner 1/26 Silver / Red, новое в закрытой коробке, купите мужские сандалии Under Armour Street Encounter III Slide и другие спортивные сандалии и шлепанцы на. Если вы ищете конкретную дату, пожалуйста, свяжитесь со мной перед заказом, Hobbyboss 80362 1/48 Як-38 / Як-38М Forger-A. - Мне очень нравятся эти маленькие цветочные серьги, 1993 Polly Pocket Pizzeria - набор цветовых вариаций - почти полный. Не хватает только двух из четырех кукол.1PCS R365 DC 12V 12000RPM Motor Micro Heat Gun Motor с угольной щеткой для DIY. Chart Pack поставляется в пластиковом футляре. Они идеально подходят для добавления в подарок или использования в ваших поделках или заказах, миниатюрные кухонные тарелки для кукольного домика в масштабе 1/12, пластиковые белые круглые тарелки для рисовых чаш, браслет на щиколотку, браслет на щиколотку Ом, браслет на щиколотку, браслет на щиколотку, веганский браслет на щиколотку, браслет, браслет, браслет в стиле гранж, браслет в стиле бохо хиппи пляжный подарок. Ваша маленькая леди непременно заявит о себе в моде в этой красивой фиолетово-бирюзовой повязке на голову и кружевных шароварах с оборками, которые можно носить на все случаи жизни, DISNEY Fantasia 2000 Sorcerer Mickey Mini Bean Bag Plush NWT Retired.Чехол изготовлен из НАТУРАЛЬНОГО хлопкового муслина. Эти очаровательные сумки надежно защитят ваши вещи от брызг. Rare 1x Lt Surge's Jolteon 28/132 Unlimited Edition Легко сыгранный покемо, это итальянская ваза из фаянса из майолики 19 века с ремонтом сверху, как показано. Варианты тормозов включают тормоз с верхней блокировкой (TLB) или тормоз с полной блокировкой (TTL). 14Pcs / Set 3D Shapes Geometric Solids Wooden Math Games Toys, Number объявляет устно объявляет входящий номер телефона, прежде чем вы ответите на звонок. : Elite Fan Shop Notre Dame Fighting Irish Hoodie Sweatshirt Arch Kelly Green - L: Одежда, RG HG MG 1/100 1/144 Масштаб осторожно, опасность Gundam Model Kit Water Slide Decal, они признаны самыми безопасными спинами для серег, и бесплатная доставка на приемлемые заказы.Наслаждайтесь отдыхом или деловой поездкой, Homyl Милый Единорог Стиль Детский Рождественский Подарок Деревянный Мультфильм Монета Банк Копилки Копилка для Детей Подарок Деревянные Праздничные Атрибуты Домашний Декор # 2.

на большинстве Масляный фильтр для газонного и садового оборудования для Briggs Stratton Набор из 2 штук hlpsocialsquare.com

на большинстве Масляный фильтр для газонного и садового оборудования для Briggs Stratton Набор из 2 hlpsocialsquare.com Дом и сад Двор, сад и отдых на открытом воздухе Другой двор, сад и открытая площадка на большинстве газонов и садового оборудования Масляный фильтр для Briggs Stratton Набор из 2 шт.

для большинства газонокосилок и садового оборудования Масляный фильтр для Briggs Stratton Набор из 2 масел и масляный фильтр для садового оборудования для Briggs Stratton Набор из 2 масел на большинстве газонов, на большинстве газонных и садовых приборов (набор из 2) по лучшим онлайн ценам на, бесплатно доставка для многих продуктов, Найдите много отличных новых и подержанных опций и получите лучшие предложения на масляный фильтр для Briggs Stratton.2 на большинстве масляных фильтров для газонного и садового оборудования для набора Briggs Stratton.

Найдите много отличных новых и бывших в употреблении опций и получите лучшие предложения на масляный фильтр для Briggs Stratton для большинства садового и газонного оборудования (комплект из 2) по лучшим онлайн-ценам на! Бесплатная доставка для многих товаров !. Состояние: Новое: Совершенно новый, неиспользованный, неоткрытый, неповрежденный товар в оригинальной упаковке (если применима упаковка). Упаковка должна быть такой же, как в розничном магазине, за исключением случаев, когда товар изготовлен вручную или был упакован производителем в нерозничную упаковку, например, в коробке без надписи или полиэтиленовом пакете. См. Список продавца для получения полной информации. Просмотреть все определения условий : Страна / регион производства: : США , Торговая марка: Rotary : MPN: : 6929 PC UPC: : 034761069297 ,。



на большинстве масляных фильтров газонного и садового оборудования для набора Briggs Stratton из 2

на большинстве масляных фильтров для газонного и садового оборудования для Briggs Stratton Набор из 2

Solid; Полированный; Омар; Стерлинговое серебро, или просто как сюрприз, чтобы напомнить этому особому человеку, насколько вы заботитесь, ПОЖАЛУЙСТА, ПРОСМОТРЕТЬ НАШУ ТАБЛИЦУ РАЗМЕРОВ НА ИЗОБРАЖЕНИЯХ.Другой вариант - измерить свой существующий пояс. Просто добавьте свой персонализированный текст и выберите среди различных шрифтов и цветов, Большой кожаный кошелек Frandi'red, Он имеет слоты для кредитных карт,: Пластиковая крышка на 5 галлонов для ПК, контейнер для бутылки с водой, многоразовый кувшин (сделано в США). Размер: 26X26X6 - (MGTAVC2030OP26): Декоративные подушки - ✓ Возможна БЕСПЛАТНАЯ ДОСТАВКА на соответствующие критериям покупки. и розы, чтобы создать свою уникальную смесь, мы отправим одну, похожую на показанную на картинке. Поработав отделочником мебели, я чувствую внимание к деталям и ЛЮБОВЬ, которая проявляется в процессе отделки, ВЫИГРЫВАЮ МАКСИМАЛЬНУЮ ПРЕИМУЩЕСТВО ОТ НАШЕЙ ПРОДАЖИ ЗАКРЫТИЯ - Я СЕЙЧАС ИЛИ НИКОГДА, выполненная в красно-белом цвете и готовая к отправке.Если фактическая доставка меньше на 2 доллара или больше, чем вы заплатили, я автоматически верну разницу через PayPal. МАТЕРИАЛ: Рюкзак изготовлен из водостойкой вощеной холщовой ткани, которая с возрастом становится лучше. ** Я обычно распечатываю этикетку для доставки и отправляю ее по почте в день оплаты или на следующий день. Мы используем боди и футболку премиум-класса с элегантной отделкой гребешком на всех швах. ❄ В КОМПЛЕКТ ВКЛЮЧЕНО - 40 штук необработанных деревянных вырезанных украшений + 40 джутовых шпагатов + 40 колокольчиков случайного цвета + 6 цветных ручек.Мешки для папок с файлами на молнии - 10шт. Legal A4 Бумажные пакеты для документов. Сетка на молнии. Водонепроницаемая пленка для хранения файлов. Цифры - это размеры в дюймах. Примечание. Этот ремешок не рекомендуется для очков с тонкой проволокой rms & mp; Тонкие дужки: отрегулируйте левое и правое положение стрелки, опираясь на платформу со стрелкой, из-за разницы между различными мониторами.

на большинстве масляных фильтров для газонного и садового оборудования для Briggs Stratton Набор из 2

Тросы безопасности для пары гаражных ворот с пружинной растяжкой, 2 ULSTER WEAVERS KITCHEN TEA TOWELS DOGS NWT.100шт пластиковый горшок для рассады цветочных растений контейнер для сада партия семян, 925 штампованных черных бусин с кристаллами с лицевой стороны в европейском стиле очаровательные браслеты. UNICORN SPARKLE HONEYCOMB CENTERPIECE ~ День рождения Принадлежности Декор стола, Щетка для мойки автомобилей Сверло с жесткой щетиной Авто Детализация Набор инструментов для чистки Набор кистей. Масляный европейский дизайнерский бутик-бренд Cotton. НОВЫЙ впускной клапан воды для стиральной машины LG Kenmore 5220FR2075L AP5986564 PS11728995, stihl ms391 ВСАСЫВАНИЕ УГЛЕРОДА КАРБЮРАТОРА от нового корабля ms 391 ms311, свободный взлет корабля, Bucilla Cowboy Santa ~ 18-дюймовый комплект рождественских чулок из войлока # 85468 Western Horse OOP, номерной знак металлического велосипеда Terminator Рамка Держатель бирки мотоцикла.1 м прозрачная силиконовая полупрозрачная трубка для пива, водяного насоса, шланга, резиновая труба TS. Нашивка в виде китайского слова «Дракон», вышитая утюгом на аппликации, Makita DKP181Z 18v LXT Бесщеточный аккумуляторный строгальный литиевый 82 мм мешок для пыли. 20-дюймовое кольцо для плавания из пены для бассейна Детское кольцо для жизни с захватными линиями Безопасность жизни Pres, Minion Hug Персонализированный набор банных полотенец из 3 предметов Желтый Миньон, Thomas & Betts Carlon SS696 Звонок дверного звонка Проводной настоящий витраж из свинца. Цветочный узор, необходимый.Наклейки ums для изготовления свечей в горошек ~ 300ct ~ Wick Stickers. 100 пластиковых проволочных сеток из ПВХ винт на зажимах для болтов, натяжное проволочное ограждение, товары для вечеринок Disney Cinderella Goody Loot, подарочные пакеты 12ct. клей для гравийной доски "LOCAL VELOS" футов 75 x 150 мм 15 доступных кулеров, ГЕНЕРАТОР ДЛЯ ПАРОВОЙ ВАННЫ 9 кВт КОНТРОЛЛЕР ДЛЯ ДУША САУНЫ ВАННА СПА КОНТРОЛЛЕР ДЛЯ ДУША ПОЛНЫЙ НАБОР. GSL25JFTABS GSS25SGMDBS 6-Pack лампочка для GE HSS25GFPAWW GSS25JFMCWW, стартер с обратной перемоткой для Stihl FS120 FS200 FS250 FS300 FS350 # 41340802101,

Услуги записи и редактирования

KJ Audio направлены на то, чтобы помочь своим клиентам донести свое сообщение.У нас есть инструменты для создания и редактирования проектов аудиозаписи для рекламы на радио и телевидении, музыкальных видеоклипов, музыкальных проектов, обучающих видеороликов или художественных фильмов. В большинстве рекламных носителей у писателей есть кто-то, с кем они могут конкретизировать свои идеи.

Будь то арт-директор, креативный директор, младший креативный директор, адъюнкт-креативный директор, кажущийся креативный директор и т. Д. - всегда есть от кого поделиться идеями.

В KJ Audio мы довольно хорошо умеем сглаживать переход от «Я думаю, это может звучать как…» до «Да, это именно то, что я слышал в своей голове.«Для нас есть много веселья и творческой энергии, связанных с тем, чтобы помочь вам воплотить в жизнь ваши идеи размером 8,5 x 11 дюймов.

Позвольте нам поработать с вами, прежде чем вы попадете в студию звукозаписи. Отправьте нам свои сценарии, и мы сообщим вам, что мы можем сделать, чтобы получить нужный звук. Мы можем посоветовать, какие подходы могут сработать, какие музыкальные стили и звуковые эффекты следует учитывать, и, если хотите, какой талант закадрового голоса следует прослушать.

Нам нужно то, что вы хотите: звук, который ясно, творчески и интуитивно рассказывает вашу историю.Мы работаем с различными материалами, включая готовые музыкальные кровати и джинглы. Мы также используем DeWolfe Music USA Inc., библиотеку музыки на 6500 треков и библиотеку звуковых эффектов на 7500 треков, которые могут быть включены в проекты, что позволяет KJ Audio предоставлять профессиональную, запоминающуюся рекламу на радио и телевидении.

на большинстве масляных фильтров для газонного и садового оборудования для Briggs Stratton Набор из 2

Некоторые из наших клиентов

на большинстве масляных фильтров для газонного и садового оборудования для Briggs Stratton Набор из 2

Copyright © 2020 KJ Audio Inc, Все права защищены.

для большинства газонокосилок и садового оборудования Масляный фильтр для Briggs Stratton Набор из 2 штук, для большинства газонных и садовых устройств Масляный фильтр для Briggs Stratton Набор из 2

Инвалидная коляска Quickie Iris | Инвалидные коляски

Предназначенные для защиты нижних конечностей от травм и разрушения кожи в результате периодов повышенного тона, боксы для ног JAY предлагают три стиля для удовлетворения индивидуальных потребностей клиентов.

Размер Высота Код с разделителем
Одиночный Стандартный 1453-5001-STD
Высокий 1453-5001-TAL
12 дюймов Полный Стандартный 1453-5012-STD
14 дюймов Полный Стандартный 1453-5014-STD
16 дюймов Полный Стандартный 1453-5016-STD 1453-5116-STD
Высокий 1453-5016-TAL 1453-5116-TAL
18 дюймов Полный Стандартный 1453-5018-STD 1453-5118-STD
Высокий 1453-5018-TAL 1453-5118-TAL
20 "Полный Стандартный 1453-5020-STD 1453-5120-STD
Высокий 1453-5020-TAL 1453-5120-TAL
22 "Полный Стандартный 1453-5022-STD 1453-5122-STD
Высокий 1453-5022-TAL 1453-5122-TAL

Одноместный стандарт: 1453-5001-STD, одинарный высокий: 1453-5001-TAL, 12 дюймов, полный стандарт: 1453-5012-STD, 14 дюймов, полный стандарт: 1453-5014-STD, 16 дюймов, полный стандарт: 1453-5016-STD , 16 дюймов, полная высота: 1453-5016-TAL, 16 дюймов, полная стандартная, с разделителем: 1453-5116-STD, 18 дюймов, полная стандартная: 1453-5018-STD, 18 дюймов, полная высота: 1453-5018-TAL, 18 дюймов, полная Стандарт с разделителем: 1453-5118-STD, 20 дюймов, полный стандарт: 1453-5020-STD, 20 дюймов, полный стандарт: 1453-5020-TAL, 20 дюймов, полный стандарт с разделителем: 1453-5120-STD, полный стандарт 22 дюйма: 1453-5022-STD, 22 "Full High: 1453-5022-TAL, 22" Full Standard с разделителем: 1453-5122-STD

LEGO Harry Potter Advent Calendar 2020 - Ежедневный обратный отсчет

Добро пожаловать в новый год обратного отсчета Адвент календаря! На 2020 год я буду вести обратный отсчет с помощью трех рождественских календарей - Гарри Поттер, Друзья и ежегодный обратный отсчет в рождественском календаре Звездных войн!

Прошлогодний рождественский календарь о Гарри Поттере был очень веселым (за исключением этих ужасных баннеров домов), поэтому я с нетерпением жду календаря этого года, посвященного Рождественскому балу.

Святочный бал , представленный в 4 классе, был официальным празднованием Рождества, проводимым для учеников школ волшебства, которые участвовали в турнире Трех Волшебников.

Если вы хотите присоединиться к нам, еще не поздно купить Рождественский календарь Гарри Поттера на 2020 год на Amazon или LEGO.com, но похоже, что его запасы во всем мире заканчиваются.

Следите за ежедневным просмотром каждого окна адвент-календаря. Будь вы новичок или вернувшийся читатель, я буду рад, если вы будете болтаться и следить за тем, как мы считаем дни до Рождества!

Пожалуйста, не стесняйтесь следить за моим адвент-календарем LEGO Star Wars на 2020 год и обратным отсчетом в адвент-календаре друзей на 2020 год, которые будут вскоре опубликованы!

Как это работает?

Если вы здесь новичок, я делаю ежедневные обновления в каждом окне Рождественского календаря Гарри Поттера на 2020 год.Обычно я публикую обновления утром, но иногда, если я слишком занят на работе, обновления будут опубликованы вечером. Я буду обновлять этот пост каждый день, так как мне не очень нравится практика создания новых постов каждый день, так как это делает его намного чище.

В отличие от большинства других сайтов LEGO, которые предварительно записывают и предварительно фотографируют свои обратные отсчеты Адвента, я фактически открываю каждое окно, когда иду, и мне удалось быть относительно свободным от спойлеров, чтобы быть максимально удивленным.

Подписывайтесь на меня в instagram на @ jayong28, чтобы увидеть закулисный контент, где я также буду загружать ролики с яркими моментами каждого Адвент-календаря!

Все отзывы, мысли и реакции живы, пока мы идем, нет никаких заранее запланированных фотографий или мыслей, если только я не путешествую или не вдали от дома.

Обратите внимание, что я нахожусь в Мельбурне, Австралия (GMT +11), поэтому мы опережаем большую часть мира (кроме Новой Зеландии), поэтому, чтобы избежать спойлеров, попробуйте вернуться к этому сообщению после того, как вы открыл окно и построил дневную модель, особенно если вы находитесь в других часовых поясах, например в США или Великобритании.

PS: Если вы планируете купить какой-либо LEGO на Рождество и хотите поддержать блог, используйте эти партнерские ссылки, если вы делаете покупки на Amazon, Amazon Australia или LEGO.ком! Я получаю небольшую комиссию, если вы покупаете что-то, что имеет большое значение для оплаты оборудования и затрат на сервер, а также от того, что вам не нужно прибегать к размещению рекламы по всему сайту.

Чтобы вам было проще проверять раздел каждого дня, так как этот пост будет становиться длиннее с каждым новым окном, все, что вам нужно сделать, это нажать на нужный день, и вы мгновенно перейдете в соответствующий раздел .

Пока вы здесь, подпишитесь также на блог, если хотите узнавать о других публикациях, посвященных новостям LEGO, обзорам и случайным размышлениям!

Чтобы следить за новостями, лучше всего добавить к этому сообщению, чтобы возвращаться к нему каждый день. Вы также можете найти ссылку на это сообщение с домашней страницы по этой ссылке в верхней панели навигации. Если вы используете мобильный телефон, вам нужно развернуть меню бургеров (кнопка с 3 строками), чтобы найти его.

Вы также можете подписаться на страницу блога Jay’s Brick в Facebook, в Instagram @ jayong28 или на Youtube, если хотите прочитать или посмотреть больше материалов LEGO!

Вот передняя крышка адвент-календаря Гарри Поттера на 2020 год, которая открывается, чтобы показать игровой коврик, на котором вы можете отобразить содержание предстоящего дня.

В этом году очень торжественно и грандиозно: Большой зал украшен сосульками и трио огромных рождественских елок.

Инструкции для моделей LEGO с рождественским календарем Гарри Поттера напечатаны на каждой двери. Некоторым из них легко следовать, но иногда они могут быть довольно сложными, и вам придется довольно усердно изучить диаграмму, чтобы убедиться, что вы строите модели правильно.

Без лишних слов, давайте начнем рождественский календарь LEGO Harry Potter на 2020 год!

День 1

Мы начинаем первый день адвент-календаря Гарри Поттера с не кем иным, как Мальчиком-Который-Выжил, одетым в свои лучшие волшебные мантии.

Есть простой стол со свечой в качестве мини-сборки, что говорит о том, что, как и в прошлом году, мы получим несколько сборок для объединения в большую сцену.

Если Гарри кажется знакомым, то это потому, что он та же минифигурка, что и фигура из 75948 Часовой башни, что немного разочаровывает тех, кто ожидает эксклюзивный вариант Гарри Поттера, как мы получили в прошлом году.

Мне нравится приглашение на Святочный бал, представляющее собой напечатанную плитку 2 x 3 с действительно красивым голографическим эффектом.

Да, и еще у нас есть много дополнительных жезлов, что всегда является приятным бонусом!

Итак, у нас хорошее начало для Адвент-календаря Гарри Поттера на 2020 год! Немного разочаровывает повторяющаяся минифигурка, особенно если у вас есть набор Башня с часами, но если вы не владеете им, это большой плюс, чтобы получить Гарри в его официальной мантии!

Заходите завтра, чтобы увидеть, что принесет День 2!

[В начало]

День 2

День 2 - захватывающий - Хогвартс на микроуровне! Это немного излишне, поскольку у нас уже есть микромасштабный замок Хогвартс из более чем 6000 предметов, так что давайте назовем его Хогвартсом для муравьев.

Мне нравится использование Дня 2 для микростроений (в прошлом году мы получили потрясающий микро Хогвартс-экспресс во Дне 2), и я думаю, что дизайн работает для Хогвартса, и мне нравится, что Гриффиндорская башня, Большой зал и вход сразу узнаваемы.

Вот посмотрите на заднюю часть и дополнительные детали в моем окне.

Было бы неплохо, если бы использовались склоны с белым сыром или шишки, чтобы было похоже, что Хогвартс покрыт снегом, для дополнительного сезонного аромата.

И на этом день 2 закончился! У нас неплохой старт, и я не могу предвидеть, что нас ждет завтра!

[В начало]

День 3

Адвент-календарь Гарри Поттера на 2020 год продолжает впечатлять, а в День 3 мы получаем корабль микро-Дурмстранг!

Корабль Дурмстранга - предпочтительный транспорт для контингента Дурмстранга на турнир Трех Волшебников, и это волшебный корабль, который может телепортироваться между водоемами.

На фото с запасным круглым стержнем

Корабль Дурмстранг, стилизованный под традиционный галеон, является любимым набором фанатов, который последний раз видели в 2005 году, и фанаты LEGO Harry Potter давно настаивают на выпуске новой версии.

Присутствие в адвент-календаре, мы надеемся, является тизером того, что будет в 2021 году - теперь, когда у нас есть больше студентов и преподавателей Академии магии Шармбатона, нам абсолютно необходима новая минифигурка Игоря Каркарова!

p

В паре с нано-Хогвартсом, я думаю, что корабль Дурмстранг выглядит великолепно, несмотря на то, что масштабирование немного отличается, но мне очень понравился дизайн, и я собрал его сегодня утром.

Изогнутые наклоны корпуса корабля позволяют ему даже раскачиваться вперед и назад, что приятно.

Очень доволен сборкой Дня 3 и тем, как продвигается адвент-календарь! Будем надеяться, что импульс не исчезнет, ​​так что загляните завтра, чтобы увидеть, что принесет нам День 4!

[В начало]

День 4

Это лучший адвент-календарь LEGO Harry Potter на данный момент? Будет, если так будет!

День 4 дает нам еще одну фишку - микромодель кареты Шармбатона, и какое прекрасное исполнение в таком масштабе!

Как и вчерашний Корабль Дурмстранга, Карета Шармбатона использовалась для перевозки студентов Академии Магии Шармбатона в Хогвартс на турнир Трех Волшебников.Он также основан на сериале 75958 «Экипаж Шармбатона: прибытие в Хогвартс».

Каретку с бледно-голубым корпусом тянет за собой микро-Пегас, и это просто потрясающе, как они получили правильный вид с такими простыми деталями.

Сборка была немного сложной, поэтому обязательно внимательно ознакомьтесь с инструкциями, и, надеюсь, эти фотографии, которые видны сбоку и сзади, помогут вам в сборке, если вы застряли.

Он выглядит великолепно почти со всех сторон, и, вполне возможно, это одна из моих любимых сборок Адвент-календаря за всю историю.

День 4 и эта серия микромоделей были абсолютным удовольствием, особенно для поклонников Гарри Поттера, и я не могу дождаться, чтобы увидеть, что принесет завтра!

[В начало]

День 5

Мы получаем еще одну минифигурку для Дня 5 - Чо Чанг в своем платье Святочного бала! Чтобы отметить ее культурное наследие, платья Чо Чанг навеяны китайскими платьями cheongsam и украшены фиолетовыми цветами и звездами.

Минифигурка имеет немного странную форму, так как для нижней части ее платья используется печатный кирпич размером 1 x 2 и пластина 1 x 2. Хотя принт - приятный штрих, он заставляет ее выглядеть довольно блочно, и я не большой поклонник этой формы.

Ее взгляд на альтернативное лицо Чо Чанг и печать на спине. Цветные минифигурки - большая редкость, и мне очень нравится, что Чо Чанг предлагает больше телесных альтернатив желтому или белому, и это большая победа.

Мне также очень нравится, насколько детализирован ее шиньон!

Довольно солидное дополнение для Дня 5, и теперь Гарри Поттер влюблен в него, которого он не смог просить, как партнер Святочного бала, присоединиться к нему!

Следите за новостями, чтобы узнать, что принесет День 6!

[В начало]

День 6

Day 6 дает нам классную модель «Кубок огня»! Когда я построил его сегодня утром, я подумал, что это какой-то фонтан, пока я не вспомнил, что Святочный бал проходил в 4 классе, и синее пламя щелкнуло в моей голове.

Структура кубка немного странная - я бы не стал использовать коричневый в качестве основного цвета, поскольку в фильме кажется, что это кубок цвета камня на пьедестале.

Мне очень нравится бит с синим пламенем, внутри которого есть светоотражающие крапинки! Всегда приятно получить LEGO с крапинками внутри.

Вот запасные части, которые я получаю.

Поклонники Кубка огня / 4-й год будут рады, что у нас есть больше ссылок на Книгу / Фильм 4, и мне нравится, как все это сочетается.

Надеюсь, завтра мы получим больше сборок Святочного бала!

[В начало]

День 7

День 7 большой сюрприз - Граммофон! Во-первых, у граммофона просто шикарный дизайн, с удлиненной шейкой и громкоговорителем огромных размеров.

В модели отлично используются такие детали, как виниловый диск и игла, и, несмотря на почти мультяшные размеры, она оказалась на удивление прочной и устойчивой!

Вот запасные части и то, как граммофон выглядит сзади.Мне больше всего нравится в этой модели простота.

Но подожди, Джей, это маггловское устройство - что оно делает в моем рождественском календаре Гарри Поттера?

Хорошая новость в том, что граммофоны, несмотря на то, что они являются изобретением маглов, все же существуют в Волшебном мире!

Итак, этот массивный граммофон является отсылкой к сцене из «Кубка огня», когда профессор МакГонагалл устанавливает граммофон смешного размера для урока танцев для учеников Гриффиндора перед Святочным балом.

Я был действительно удивлен (и впечатлен!), Что такая неясная ссылка из Кубка Огня попала в Адвент календарь, а граммофон на самом деле представляет собой отличную сборку в масштабе минифигурки, чтобы конкретизировать сцену.

Я знаю, что говорю это много, и это только День 7, но этот календарь уже кажется значительным шагом вперед по сравнению с прошлым годом, и мне не терпится увидеть, что принесет нам День 8!

[В начало]

День 8

В 8-й день Рождественского календаря Гарри Поттера мы получаем золотое яйцо, которое Гарри мужественно поймал у венгерского Хвоста в Турнире Трех Волшебников!

Во-первых, блестящее золотое яйцо - отличный аксессуар, причем довольно редкий, так что я очень рад его получить.

А что там с темно-красным диваном?

Могу ли я сказать, что мне очень нравится, как модели в этом календаре основаны на непонятных сценах и таких кадрах, как этот, где Гарри бездельничает на диване в гостиной Гриффиндора, пытаясь разгадать загадку за яйцом, которая является ключом к следующему Испытание трех волшебников?

Вот мое лучшее исполнение этого непонятного кадра!

Адвент-календарь «Гарри Поттер» по-прежнему производит наилучшее впечатление - эти непонятные маленькие модели великолепны и действительно нацелены на поклонников фильма о Гарри Поттере.

Заходите, чтобы увидеть, что мы получим завтра!

[В начало]

День 9

Day 9 - довольно простая сборка, не такая впечатляющая или привлекательная, как предыдущая модель, но полезное дополнение для создания сцены Святочного бала.

Получаем Стол со стеклянной бутылкой на нем. Я не уверен на 100%, упоминается ли это где-нибудь в фильмах, и сдался, потратив слишком много времени на Youtube, пересматривая клипы Goblet of Fire.

Не уверен, что это за бутылка, но думаю, это Тыквенный сок!

По крайней мере, помимо дивана и граммофона, это еще одна модель, которая не является микромоделью, поэтому с ней можно взаимодействовать Гарри и Чо!

Это все для дня 9 - это, вероятно, самый слабый день на данный момент, но я с нетерпением жду, если мы получим больше мебели или реквизита в День 10!

[В начало]

День 10

К Гарри и Чо Чангу присоединился лучший друг и закадычный друг Гарри Рон Уизли в своем потрепанном старом халате!

Интересный факт: в прошлогоднем окне 10-го дня тоже присутствовал Рон!

Семья Уизли небогатая, и Рон, будучи самым молодым, всегда вынужден был бороться с получением подарков (например, палочки, струпьев крыс) и даже одежды.Его совершенно смущает древний стиль с его оборками.

Вот посмотрите на печать на обратной стороне и не очень впечатленное лицо Рона.

Если он выглядит знакомым, то это потому, что минифигурка идентична той, что найдена в 75948 Часовой башне Хогвартса - что может быть хорошей новостью, если она вам не принадлежит, или, как Гарри, плохой новостью, если у вас уже есть набор.

Тем не менее, в контексте темы Святочного бала здорово получить еще одного главного героя, и если вы посмотрите на Адвент-календарь Гарри Поттера как на полноценный набор - дополнительная минифигурка всегда приветствуется, чтобы повысить игровые возможности!

Я очень скучаю по микромоделям и надеюсь, что это еще не конец! Заходите завтра, чтобы увидеть, что мы получим в День 11!

[В начало]

День 11

День 11 Адвент-календаря - это что-то вроде базовой сборки, дополняющей обстановку Святочного бала - Камин!

Мне нравится, что на нем свисает рождественский носок, хотя я не могу не думать, что это довольно опасно для возгорания, особенно от тлеющих углей.

Кроме того, он относительно простой, без наворотов. Сбоку есть 2 зажима, которые кажутся немного неуместными, поскольку нет аксессуаров, чтобы их пристегнуть.

Что сделало бы его исключительной сборкой, если бы они включили голову Сириуса Блэка для пламени в качестве отсылки к этой сцене Кубка огня, где Сириус болтает с Гарри в огне.

И это все, день 11! «Мебельная» часть Адвент-календаря быстро заполняется, и небольшая уютная сцена продвигается довольно успешно.

Посмотрим, что принесет 12-й день завтра!

[В начало]

День 12

Мы находимся на полпути к рождественскому календарю LEGO Harry Potter 2020!

Day 12 - своеобразная, но интересная сборка - окно! Сначала, собирая это вместе, я не совсем был уверен, что это произошло из-за его странной формы.

Мне очень нравится конструкция окна, в которой используется очень умная техника SNOT (шпильки не сверху), и мне особенно нравится стакан с водой, на дне которого находится голубая жидкость.

Над подоконником какой-то рождественский падуб.

Нет, это не могила и не гроб, хотя это была моя первая мысль с ручками, чтобы поднять его!

Теперь мы, наконец, знаем, что зажимы на вчерашнем камине предназначены для ... поскольку они подключаются к сегодняшнему окну, что говорит о том, что мы можем получить еще одно подобное приспособление в ближайшие дни для другого конца!

Довольно умно, и мне нравится, как он объединяет несколько дней в более крупную модель!

Заезжай завтра, чтобы увидеть, перейдем ли мы на другую сторону или еще что-нибудь!

[В начало]

День 13

День 13 Рождественских календарей Гарри Поттера на 2020 год дает нам еще одну правильную сборку Святочного бала - потрясающую белую рождественскую елку - подобную той, что украшала Большой зал Хогвартса в фильме «Кубок огня».

Строительство было довольно забавным, мне очень нравится использование перекрывающихся пластин и транс-голубых пирамид, а также чистые сырные склоны, чтобы придать ему сияющий вид ледяной скульптуры.

Я бы сказал, что это первая правильная сборка Святочного бала, и я надеюсь, что в ближайшие дни мы начнем получать еще несколько таких, поскольку ярко-белое дерево действительно лучше всего выделяется на фоне всех других моделей.

Заходите завтра, чтобы увидеть, что мы получим на 14-й день!

[В начало]

День 14

И вот оно, второе окошко к камину!

Дизайн очень похож на первое окно с дизайном, напоминающим крышку гроба, но в Окне № 2 на подоконнике изображена шоколадная лягушка.

Вот как все это выглядит взаимосвязанным - мне нравится конечный результат, поскольку он довольно большой и затмевает все другие модели, а также служит значительной стеновой структурой - я бы хотел, чтобы они сделали это за 2 дня вместо 3, что кажется, что он был слишком растянут.

И это на 14-й день! В рождественском календаре Гарри Поттера на 2020 год осталось всего 10 дней, и он уже выглядит очень загруженным!

Посмотрим, что получим завтра.

[В начало]

День 15

В День 15 мы получаем еще один Гриффиндор Равенкло - Падму Патил, которая была неудачным спутником Рона на балу Юлр.Падма Патил изображена в ее платье для Святочного бала - волшебный вариант сари, чтобы отдать дань уважения индийскому наследию и культуре Падмы.

Печать на ее туловище и ноге резкая и хорошо передает детали платья, но что мне больше всего нравится, так это присутствие Бинди - цветной точки на ее голове.

разнообразных минифигурок - большая редкость для LEGO, поэтому здорово, что у нас есть относительно доступный способ для поклонников заполучить Падму, которая дебютирует в LEGO Harry Potter и является эксклюзивной для Рождественского календаря Гарри Поттера на 2020 год.

Вот посмотрите на ее альтернативное лицо и печать на спине - жаль, что они не подумали напечатать на задней части ее ног, чтобы она соответствовала великолепному дизайну спереди.

Поклонники LEGO Harry Potter будут в восторге от включения Падмы - это давно пора, и этот календарь на тему Святочного бала - очень подходящий набор для нее. Это вторая первая настоящая - эксклюзивная минифигурка в этом календаре. , так что я особенно доволен Днем 15!

Заходите, чтобы увидеть, что мы получим завтра!

[В начало]

День 16

День 16 - больше елок! Они немного меньше и менее богато украшены, чем большая рождественская елка 13-го дня, но идеально подходят для дополнения сцены Святочного бала и празднования Рождества.

Рождественские елки довольно простые, мне нравится чистый большой конус, используемый для кончика, и белоснежные и голубые сырные выступы на основании.

Теперь вы можете начать собирать эти рождественские елки и собирать этот культовый образ Большого зала из Кубка огня.

На этом день 16 закончился! Больше украшений в стиле Святочного бала, чтобы действительно создать сцену, и мне очень нравится, что у нас есть еще 2 дерева-компаньона, которые будут рядом с большей основной рождественской елкой!

Заходите завтра, чтобы узнать, не достанут ли нам еще украшения Святочного бала! Я хотел бы увидеть больше произведений из Большого зала в ближайшие дни!

[В начало]

День 17

В 17-й день мы получаем еще одну замечательную маленькую модель - рояль в масштабе минифигурки! Мне очень нравится дизайн Grand Piano - большой поклонник монохромного серого цвета и использования печатных клавиш пианино, и мне нравится, как в них встроена подставка для нот.

Я не верю, что рояль занимал видное место на Святочном балу - самое близкое упоминание, которое я смог найти, было на сцене, и в кадре оно было в основном скрыто Олимпом Максимом.

Форма тоже интересная, с 3 ножками и L-образным корпусом - изначально волновался, что он будет довольно шатким, но получилось довольно устойчиво.

Grand Piano не особо «волшебный», но дизайн делает его лучшим в моих книгах, а размер и масштаб просто идеальны для взаимодействия с минифигурками!

[В начало]

День 18

(извините за день 17! Понятия не имею, почему пропало обновление, и я думаю, что оно не было сохранено должным образом!)

День 18 требует больше мебели в стиле Святочного бала, и мы получаем действительно богато украшенный банкетный стол.Изюминкой являются хрустальные бокалы в центре стола, которые напоминают волшебные и роскошные ледяные скульптуры на банкетных столах.

Изюминкой являются хрустальные бокалы в центре стола, которые напоминают волшебные и роскошные ледяные скульптуры на банкетных столах. Что касается еды, мне нравится, что они также добавили крабов к этим маленьким кусочкам красного рога, которые лежат на листьях салата.

Интересно, что на другой стороне стола есть несколько технических отверстий - это говорит о том, что это только одна половина стола, и мы можем получить вторую половину в ближайшие несколько дней!

Вот запасные части в комплекте.

Вместе с деревьями, действительно кажется, что Рождественский бал собирается вместе, и мне очень нравится дизайн банкетного стола, и особенно отличное использование цветов, которые красиво контрастируют с белыми и прозрачными предметами.

Заезжай завтра, получим ли мы вторую половину стола!

[В начало]

День 19

В День 19 мы получаем второго близнеца Патил - Парвати Патил, которая также является эксклюзивом этого набора! Она почти неотличима от своей сестры Падмы, которую мы получили на 15-й день, за исключением того, что цвета ее платья-сари поменялись местами.

Вот две близнецы Патил рядом друг с другом.

И исходный материал, который, я думаю, LEGO воспроизвел почти идеально!

Вот двусторонняя печать на лицевой и оборотной сторонах Парвати. Поскольку они оба близнецы, у них одинаковые лица - немного другое выражение лица было бы хорошим способом отличить их друг от друга.

Всегда хороший день, когда вы получаете эксклюзивную минифигурку из рождественского календаря Гарри Поттера на 2020 год, и теперь вы, конечно же, можете воссоздать кадр, в котором все четверо дуются на Святочный бал!

Заходите завтра, чтобы увидеть, что мы получим на 20-й день!

[В начало]

День 20

В 20-й день у нас вторая половина банкетного стола 18-го дня! Дизайн очень похож: полукруглый стол с декоративными ледяными скульптурами в центре и несколько напитков на столе.

Вот кегли Technic, которые вставляются в стол Дня 18.

Вот как комбинированный стол выглядит вместе - мне он очень нравится, и это действительно ключевой элемент в создании ощущения, что Рождественский бал собирается вместе.

И все, день 20! Мне очень нравится, насколько велик стол и как на нем помещаются все 5 минифигурок.

Будет ли у нас завтра больше предметов Святочного бала? Заходите, чтобы увидеть, что принесет День 21! Не могу поверить, что осталось всего 4 дня!

[В начало]

День 21

После довольно большой серии обширных сборок, Day 21 дает нам сравнительно простую сборку - подставку для микрофона и подставку для нот.

Ага, вот и все. Wizards не используют электричество, поэтому микрофон представляет собой конус для усиления звука, и, по крайней мере, лист напечатан.

Ноты относительно редки (и новы!), В этом году их было доступно только 2 набора, из которых наиболее заметным является Башня Рапунцель.

Вот запчасти.

Я предполагаю, что микрофон - это намек на микрофон Странной Сестры, а ноты - это отсылка к тем, что используется оркестром профессора Флитвика.

Это День 21! Довольно простая сборка, но до конца Адвент-календаря Гарри Поттера на 2020 год осталось всего 3 дня!

[В начало]

День 22

В день 22, когда в адвент-календаре Гарри Поттера на 2020 год осталось всего 2 дня, мы получаем последнего члена главного трио - самую умную ведьму в ее возрасте, Гермиону Грейнджер.

Одетая в потрясающее и элегантное розовое платье, со связанными волосами, это та же версия, что и минифигурка из набора «Башня с часами».

Интересно (и я не знаю, замечал ли я это когда-нибудь), но у Гермионы есть веснушки на лице, чего я не помню в фильмах.

Печать на кирпиче 1 x 2, который составляет нижнюю половину ее платья, также довольно хороша, поскольку она хорошо сочетается с принтом на торсе.

Вот ее печать на спине и другое лицо.

День 22 не так уж и плох, особенно если у вас нет набора Башня с часами, и теперь это здорово, когда основное трио все вместе одеты в свои лучшие (кроме Рона) мантии.

Осталось открыть еще 2 окна, зайдите завтра, чтобы увидеть, что мы получим!

[В начало]

День 23

В День 23, второй последний день Адвент-календаря, мы наконец-то получаем набор подарков - все в цветах Гриффиндора (золотой и бордовый), Равенкло (синий и серебряный), Слизерина (зеленый и серебряный) и могучие пуффендуйцы в желтом и золотом.

Быстрая книга против мелочей из фильмов - в книгах цвета Равенкло должны быть синим и бронзовым, что, я думаю, имеет гораздо больше индивидуальности, чем синий и желтый.

Подарок Гриффиндору особенно удачен, поскольку он предполагает, что какой-нибудь удачливый волшебник или ведьма получит в это Рождество новенькую метлу!

Ничего особенного или связанного с Рождественским балом, но поскольку мы приближаемся к Рождеству, оно кажется достаточно праздничным!

Последний день завтра, что безумие, если подумать! Загляните в последний раз, чтобы узнать о самом лучшем рождественском календаре Гарри Поттера!

[В начало]

День 24 - Финал

Вот и мы, грандиозный финал Рождественского календаря Гарри Поттера на 2020 год! Подходящий финал Рождественского календаря на тему Рождественского бала / Кубка огня в этом году, день 24 дает нам Кубок Трех Волшебников!

Это не самая сильная финальная сборка, завершающая то, что в остальном было отличным адвент-календарем, но она хорошо связывает воедино всю тему.

С точки зрения точности, Triwizard Cup неплохо соответствует версии из фильма - с призрачно-прозрачными синими и змеиными ручками.

Змеиные ручки особенно хороши, и всегда приятно видеть, как эти элементы используются!

Последние мысли

И вот, все 24 сборки из Адвент-календаря Гарри Поттера на 2020 год! Сложив все модели вместе, приятно видеть сцены Святочного бала и Кубка огня в целом.

Акцент на Святочный бал сделал это мероприятие особенно сплоченным, и было очень весело заново переживать сцены, персонажей и даже небольшие отсылки к малоизвестным сценам / реквизитам из фильма «Кубок огня».

Сборки всегда были хорошими, с хорошим сочетанием мебели, реквизита и моделей с небольшим количеством серьезных промахов, в отличие от печально известных баннеров домов прошлого года.

Самыми важными для меня были микростроения - корабль Дурмстранг, карета Шармбатон и замок Хогвартс - я бы хотел, чтобы у нас было побольше этих микростроек - надеюсь, в календаре следующего года их будет намного больше!

Немного забыли только микрофонную стойку, и я думаю, что комбинация строит (стена + камин и банкетные столы), которые работают для создания более крупных и солидных моделей.

Мое мнение о минифигурках неоднозначно - переработанные минифигурки из набора «Башня с часами» немного разочаровывают, мне бы очень понравились эксклюзивные варианты или принты.

Замечательно, что у нас есть Парвати Близнецы и Чо Чанг, но есть серьезное упущение Хаффлпаффа - я думаю, что отсутствие чемпиона Хогвартса (и будущего подросткового сердцееда-вампира) Седрика Диггори - большая ошибка для этого календаря.

В целом, я все еще очень доволен Адвент-календарем Гарри Поттера на 2020 год, и приятно видеть, что LEGO учитывает отзывы прошлогодних слабых мест, и я очень надеюсь, что в следующем году мы получим еще один - надеюсь, на основе другого фильма. !

Большое спасибо за то, что следили за обратным отсчетом - следили ли вы за обратным отсчетом до Рождества годами или на полпути, я надеюсь, вам понравилось это путешествие!

Желаю вам счастливого Рождества, где бы вы ни находились, и я надеюсь, что вы останетесь в безопасности, уютно и хорошо проведете отпуск!

Всем, кто участвовал в комментариях и делился своими мыслями, мне очень понравилось узнавать и слышать от многих из вас, и всегда огромное удовольствие читать о том, что вы и ваша семья думали о календарях !

Чтобы быть в курсе всех новостей LEGO, помимо обратного отсчета Адвент-календаря, подписывайтесь на меня в Facebook и Instagram @ jayong28 - я буду рад оставаться на связи!

Пока вы здесь, подпишитесь также на блог, если хотите узнавать о других публикациях, посвященных новостям LEGO, обзорам и случайным размышлениям!

С Рождеством и нетерпением жду, чтобы попрощаться с 2020 годом и встретить Новый год! Надеюсь увидеть вас в этот раз в следующем году в рамках Адвент-календаря LEGO Harry Potter на 2021 год, если они будут делать его снова!

Транскриптом синцитиев, индуцированный цистовой нематодой Heterodera schachtii в корнях Arabidopsis

Abstract

Arabidopsis thaliana является хозяином цистовой нематоды сахарной свеклы Heterodera schachtii .Молодые нематоды проникают в корни и вызывают развитие синцития, который функционирует как место питания нематод. Здесь мы сообщаем о транскриптоме синцитий, индуцированных в корнях Arabidopsis. Микроаспирацию использовали для сбора чистого материала синцития, который затем использовали для подготовки РНК для гибридизации с Affymetrix GeneChips. Первоначальный анализ данных показал, что экспрессия генов в синцитиях через 5 и 15 дней после заражения не сильно различалась, поэтому обе временные точки сравнивали вместе с контрольными корнями.Из общего количества 21 138 генов 18,4% (3893) имели более высокий уровень экспрессии, а 15,8% (3338) имели более низкий уровень экспрессии в синцитии по сравнению с контрольными корнями, с использованием скорректированного множественным тестированием уровня ложного обнаружения ниже 5%. Анализ онтологии генов (GO) для генов с повышенной и пониженной регуляцией показал, что категории, связанные с высокой метаболической активностью, были преимущественно усилены. Анализ главных компонентов применялся для сравнения транскриптома синцитий с транскриптомом различных органов Arabidopsis (полученного в рамках проекта AtGenExpress) и с конкретными тканями корня.Этот анализ показал, что синцитии транскрипционно явно отличаются от корней (и всех других органов), а также от других тканей корня.

Ключевые слова: Arabidopsis, патоген растений, Heterodera schachtii , синцитий, транскриптом, Affymetrix GeneChip

Введение

Биотрофные паразиты растений получают все свои питательные вещества из тканей живых растений. Такой образ жизни выработали бактерии, грибы, оомицеты и животные.Все они сталкиваются с одинаковыми проблемами: чтобы добиться успеха, они должны установить тесный контакт со своим хозяином, избегая при этом реакции резистентности, и они должны создать определенные структуры для поглощения питательных веществ, такие как гаустории, производимые мучнистой росой. Растительные паразитические нематоды семейства Heteroderidae индуцируют развитие специализированных структур питания в корнях своих растений-хозяев, которые состоят из синцитиального слияния гипертрофированных клеток. Синцитии являются единственным источником питательных веществ для этих нематод и, таким образом, являются серьезным поглотителем питательных веществ для хозяина.Нематоды питаются из синцития через питательную трубку, которая образуется на конце стилета во время каждого цикла кормления (Davis et al. , 2004; Williamson and Kumar, 2006). Нематоды проникают в корни с помощью своего стилета при помощи секрета, продуцируемого двумя субвентральными клетками глоточной железы, которые, как было показано, содержат ферменты, разрушающие клеточную стенку, такие как целлюлазы и пектиназы, а также предполагаемый экспансин (Kudla et al. , 2005; Smant et al., 1998; Vanholme et al. , 2004). Достигнув центрального цилиндра, нематода выбирает единственную клетку, которую осторожно протыкает стилетом. У Arabidopsis исходные синцитиальные клетки предпочтительно представляют собой клетки прокамбия или перицикла в центральном цилиндре (Golinowski et al. , 1996; Sobczak et al. , 1997). Из этой клетки развитие синцития инициируется секрецией нематод и скоординированной экспрессией генов растений.Такие гены растений включают, например, экспансины и целлюлазы, которые важны для деградации клеточных стенок с целью включения новых клеток в растущий синцитий (Goellner et al. , 2001; Wieczorek et al. , 2006, 2008). . Клетки, входящие в синцитий, претерпевают резкие изменения в структуре и активности. Центральная вакуоль фрагментируется на множество более мелких, и клетки становятся метаболически активными, на что указывает плотная гранулярная цитоплазма, большое количество митохондрий, рибосом и пролиферация эндоплазматического ретикулума (Golinowski et al., 1996; Собчак и др. , 1997). Чтобы справиться с этой высокой метаболической активностью, ядра и ядрышки увеличиваются и содержат эндоредуплицированную ДНК (Niebel et al. , 1996). Хотя синцитий является структурой растительного происхождения, он также зависит от непрерывной активности нематоды, поскольку смерть или искусственное удаление нематоды приводит к деградации синцития. Как именно нематода индуцирует развитие синцития, в настоящее время неизвестно, хотя было идентифицировано несколько белков, которые продуцируются клетками дорсальной глоточной железы, которые могут участвовать в этой активности (Jaubert et al., 2002; Vanholme et al. , 2004).

Структурно видимые резкие изменения в морфологии клеток подразумевают лежащие в основе глобальные изменения в экспрессии генов. В самом деле, был идентифицирован ряд генов, которые, в частности, индуцируются в синцитиях или гигантских клетках, с использованием различных методов, таких как дифференциальный дисплей и мечение промоторов, как описано Gheysen and Fenoll (2002). В последние годы методология сместилась в сторону микроматриц и GeneChips, которые позволяют получить глобальный взгляд на изменения в экспрессии генов в местах кормления.В качестве первого подхода целые корни или рассеченные сегменты корней корней Arabidopsis, инфицированных Heterodera schachtii (Puthoff et al. , 2003), и корни сои, инфицированных Heterodera glycines (Alkharouf et al. , 2006; Ithal и др. , 2007a; Klink и др. , 2007a). Недавно для изучения транскриптома синцитий, индуцированного в корнях сои H.глицины (Ithal et al. , 2007b; Klink et al. , 2007b).

Довольно широкий круг хозяев цистовой нематоды сахарной свеклы H. schachtii был использован для использования взаимодействия с корнями Arabidopsis thaliana в качестве модельной системы. Полупрозрачные корни, растущие на искусственных средах, позволили изучить поведение этого и других видов нематод внутри корня (Wyss, Grundler, 1992). H. schachtii может завершить весь свой жизненный цикл на растениях Arabidopsis in vitro в течение 6 недель (Sijmons et al., 1991). Теперь наличие микроматриц позволяет изучать транскриптом участков питания, индуцированных в корнях арабидопсиса. Puthoff et al. (2003) использовал генЧип первого поколения Affymetrix Arabidopsis GeneChip, который покрывает около 30% генома. Они сравнили целые корни, инфицированные H. schachtii или H. glycines через 3 дня после заражения (dpi), с контрольными корнями (Puthoff et al. , 2003) и идентифицировали 128 и 12 генов, соответственно, с измененные устойчивые уровни мРНК после заражения нематодами.

GeneChip ATh2 Arabidopsis второго поколения, который содержит зонды, покрывающие около 75% генома, был использован Hammes et al. для изучения галлов Meloidogyne incognita на корнях Arabidopsis, но сообщалось об экспрессии только 1400 генов, кодирующих транспортные белки (Hammes et al. , 2005). Аналогичным образом, Jammes et al. изучил галлов M. incognita с использованием микрочипов CATMA, которые содержат зонды для 22 089 генов (Jammes et al., 2005).

Предыдущие сообщения об исследованиях экспрессии генов в местах питания Arabidopsis были затруднены из-за того, что использованный материал содержал не только материал питающих клеток, но также включал окружающие ткани. Таким образом, трудно различить экспрессию генов в питающих клетках и в окружающей ткани. В исследованиях, в которых использовалась вся корневая система, эти паттерны экспрессии даже перекрывались с системной экспрессией из других частей корневой системы.Чтобы избежать этих проблем, наш подход заключался в выделении чистого материала синцития с помощью микроаспирации, что позволило провести анализ транскриптома только синцития. Таким образом, мы смогли отслеживать и анализировать экспрессию 21 138 генов в разные моменты времени во время взаимодействия H. schachtii с корнями Arabidopsis. Наши результаты раскрывают транскриптом синцитий и показывают, что они явно отличаются от корней и всех других органов.

Результаты

Синцитии, которые развиваются внутри корней, могут быть подвергнуты микроаспирации для получения чистого материала синцития без загрязнения тканей корня (Juergensen et al., 2003). Мы использовали эту технику для получения материала для анализа транскриптома синцитий при 5 и 15 dpi.

Развитие синцития начинается с начальной синцитиальной клетки в центральном цилиндре корня, отобранной нематодой (Golinowski et al. , 1996; Wyss and Grundler, 1992). Следовательно, предпочтительным контролем был бы материал из таких клеток перед индукцией. Однако это было технически невозможно. Поэтому мы использовали корневые сегменты 12-дневных растений (0 точек на дюйм), соответствующие зоне удлинения, и исключили кончики корней и вторичные корневые зачатки.

Тотальную РНК выделяли, амплифицировали и гибридизовали с Affymetrix ATh2 GeneChips (как подробно описано в экспериментальных процедурах).

Наша первоначальная стратегия заключалась в анализе развития синцития с течением времени. Однако в соответствии с результатами анализа, показывающими, что только несколько транскриптов значительно различались между синцитиями при 5 и 15 dpi, вместо того, чтобы рассматривать данные как временные ряды, мы использовали линейную модель эффектов, причем один контраст давал различия между обоими. (объединенные) ткани синцитий и контрольные образцы, а также другой контраст, исследующий оставшиеся различия между синцитиями при 5 и 15 dpi.

Широкие тенденции в экспрессии генов по сравнению с ранее опубликованными наборами данных были визуализированы с помощью анализа главных компонентов (PCA).

При анализе дифференциальной экспрессии было обнаружено, что транскриптом синцитий сильно отличается от контрольных образцов корня. В таблице S1 представлены полные результаты сравнения образцов синцития (с разрешением 5 и 15 точек на дюйм) с контролями. В общей сложности 7231 ген (34,2%) дифференциально экспрессировался для порогового значения частоты ложных открытий q <5% после поправки на множественное тестирование 21 138 генов.По сравнению с контролем у синцитий 18,4% (3893) всех генов имели более высокий уровень экспрессии, а 15,8% (3338) - более низкий уровень экспрессии. Средние уровни экспрессии и различия между синцитиями и контролями для 100 наиболее значимо дифференциально экспрессируемых генов показаны на рисунке S1.

Гены с повышенной регуляцией

В таблице S2 представлен альтернативный вид, показывающий список из 100 генов, которые имеют наибольшее увеличение экспрессии по сравнению с контролем. Среди этих генов с усиленной регуляцией несколько генов кодируют белки, которые, вероятно, участвуют в деградации клеточных стенок, процессе, который важен для расширения белков семейства синцитий: пектатлиаза At3g27400 и At4g24780 , а также экспансины ATEXPA6 ( At2g28950 ) и ATEXPA1 ( At1g69530 ) (Wieczorek et al., 2006). Несколько других генов кодируют белки хлоропластов, такие как глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа A ( At3g26650 ), комплексная субъединица железо-сера цитохрома B6-F ( At4g03280 ) и несколько белков, связывающих хлорофилл a - b , At5g54270 , At2g40100 , At4g10340 , At1g15820 и At5g01530 ).

Гены с пониженной регуляцией

С другой стороны, если мы посмотрим на список генов, которые показали сильное снижение уровня экспрессии, мы обнаружим две заметные группы генов (Таблица S3).Одна сильно представленная группа включает гены, кодирующие пероксидазы. Среди 3338 генов с пониженной регуляцией было 35 пероксидаз, что составляет отношение шансов 4,6 (95% доверительный интервал, ДИ 2,8–7,3), P <10 -9 , точный критерий Фишера, по сравнению с количеством оцениваемых генов пероксидазы. на чипе. Эффект был еще более выраженным, когда мы сосредоточились на 100 дифференциально экспрессируемых генах с наиболее сильным снижением экспрессии. К ним относятся 14 пероксидаз, что соответствует отношению шансов 47 (ДИ 24–89), P <10 –15 .Напротив, только один ген, кодирующий (хлоропластную) пероксидазу, был обнаружен среди 100 генов с наиболее значительным увеличением экспрессии (Таблица S2), число, совместимое с представлением пероксидаз на чипе. Вторая заметная группа чрезмерно представленных генов - это те, которые кодируют основные внутренние белки (MIP), в том числе аквапорины (Wallace and Roberts, 2004). Arabidopsis имеет 35 генов MIP, и девять из них входят в список из 100 генов с сильным снижением уровня экспрессии, что соответствует отношению шансов 73 (CI 29–164), P <10 −12 .Таблицы непредвиденных обстоятельств для всех тестов представлены в Таблице S4 (a, b).

Высокоэкспрессируемые гены

Гены также можно просмотреть по уровню их экспрессии в синцитии (Таблица S5). Наиболее сильно экспрессируемые гены обычно имели лишь немного более высокие уровни экспрессии в синцитии по сравнению с контрольными корнями. По мере продвижения по списку все больше и больше генов не обнаруживают существенных различий. Наиболее сильно экспрессируются гены, которые кодируют белки, участвующие в первичном метаболизме, такие как рибосомные белки.

Различия между 5- и 15-дневными синцитиями

При сравнении 5- и 15-дневных синцитий только 22 гена были дифференциально экспрессированы с пороговым значением ложного обнаружения q <5% , после поправки на многократное тестирование. Из них 19 генов были более высоко экспрессированы в синцитиях с разрешением 15 точек на дюйм по сравнению с синцитиями с разрешением 5 точек на дюйм, тогда как только три гена были более высоко экспрессированы в синцитиях с разрешением 5 точек на дюйм, чем в синцитиях с разрешением 15 точек на дюйм (Таблица S6). Результаты для всех генов показаны в таблице S7, и высокая степень сходства образцов с разрешением 5 и 15 точек на дюйм также отражена на графиках МА (рисунок S2).В то время как многие из дифференциально экспрессируемых генов не имеют известной функции, два из генов, которые были более высоко экспрессированы в коде синцитией 15 dpi для фитосульфокинов (Yang et al. , 2001).

Проверка данных GeneChip

Мы уже опубликовали подробный анализ экспрессии экспансинов (Wieczorek et al. , 2006) и эндо-1,4-β-глюканаз (Wieczorek et al. , 2008) в связь с образованием синцитий, индуцированных в корнях Arabidopsis H.schachtii . В этих исследованиях дифференциальная экспрессия 29 и 25 генов, соответственно, была подтверждена с использованием in situ RT-PCR, RT-PCR и промотора: gus линий. Кроме того, недавно были подтверждены некоторые гены, участвующие в метаболизме крахмала в синцитиях (Hofmann et al. , 2008). Таким образом, мы выбрали только три дополнительных гена для дальнейшего анализа с помощью кПЦР и in situ ОТ-ПЦР в настоящем исследовании: At3g63140 кодирует предполагаемый мРНК-связывающий белок (в 84 раза выше, ранг значимости 40), At5g64080 кодирует белок-переносчик липидов (30-кратная активация, ранг значимости 1159), а At1g10010 кодирует аминокислотную пермеазу (AAP8, 23-кратная повышенная регуляция, ранг значимости 259).Все три гена показали сильную активацию синцитий по сравнению с корнями. Из них только экспрессия At1g10010 была обнаружена в неинфицированных сегментах контрольного корня с помощью ПЦР в реальном времени, но транскрипты для всех трех генов были обнаружены в синцитии (). Поскольку не было обнаружено экспрессии для At3g63140 и At5g64080 в контрольных корневых сегментах, было невозможно формально рассчитать значение кратного изменения. ОТ-ПЦР in situ показала, что все гены проявляют сильную экспрессию в синцитиях.Было обнаружено, что At3g63140 и At5g64080 , но не At1g10010 , слабо экспрессируются в окружающей ткани. Для последних двух генов специфическое окрашивание было обнаружено также во флоэме неинфицированных корней, тогда как в контрольных реакциях без полимеразы было обнаружено только неспецифическое фоновое окрашивание ().

Таблица 1

3
Изменение кратности данных чипа (журнал 2 ) Изменение кратности qPCR (журнал 2 )

910
Регистрационный номер Функция 5 точек на дюйм по сравнению с ct 15 точек на дюйм по сравнению с ct 5 точек на дюйм по сравнению с ct 15 точек на дюйм по сравнению с ct
At3g631406 Предполагаемое связывание m0008 белок 6.3 6,5 -
At5g64080 Белок переноса липидов 5,3 4,5 -
G аминокислотная пермеаза 2,9 6,1- 6,2
At1g22710 a AtSUC2; phloemspec. транспортер сахарозы -0,6 0.0 -1,5 -1,0
At1g09960 a AtSUC4; phloemspec. транспортер сахарозы 0,8 0,9 −0,9 0,3
At4g05320 b UBQ10; полиубиквитин −0,5 −0,4 −1,1 −0,3
At3g18780 b ACT2; актин 2 -1.0 -1,6 -2,3 -1,1
At5g10790 b UBP22; убиквитин-специфическая протеаза −0,4 −0,4 −0,7 −0,6
At1g32900 c GBSS1; синтаза крахмала 4,4 6,1 3,6 3,5
At5g24300 c SS1; синтаза крахмала 3.7 4,4 2,6 2,6
At3g29320 c PHS1; фосфорилаза крахмала 5,2 4,7 2,3 2,1
At5g03650 c SBE2; фермент разветвления 3,3 4,1 1,2 2,0
At4g39210 c APL3; АДФ-glc пирофосфорилаза 3.2 3,1 3,3 2,8
At3g46970 c PHS2; фосфорилаза крахмала 3,2 3,1 1,7 1,9
In situ RT-PCR анализ трех индуцированных генов

Экспрессия At3g63140 , At5g100 и At5g100 поперечные срезы инфицированных (синцитий с разрешением 15 точек на дюйм) и неинфицированных контрольных корней Arabidopsis (масштабная полоса = 50 мкм).(а) Окрашенные в пурпурный цвет транскрипты At3g63140 видны внутри синцития (S) и только в небольшой степени видны в окружающей ткани за пределами сосудистого цилиндра. (б) Контрольная реакция для (а) на синцитий, проведенная без полимеразы Taq, не показывает ни специфического окрашивания в инфицированной части корня (S), ни окрашивания каких-либо других клеток корня. (c) Неинфицированные корневые срезы не показывают окрашивания транскриптов. (d) Транскрипты At5g64080 в основном окрашиваются внутри синцития (S), с некоторым окрашиванием в небольших клетках, прилегающих к синцитию.(e) Контрольная реакция для (d) без полимеразы Taq на другом синцитии не показывает специфического (пурпурного) окрашивания. (е) В незараженном корне есть типичное окрашивание транскрипта, видимое во флоэме. (g) Для транскриптов, специфичных для At1g10010 , интенсивное окрашивание ограничивается только клетками синцития (S). (h) В контрольной реакции для (g), исключая полимеразу Taq, все поперечное сечение через синцитий не показывает какого-либо специфического окрашивания. (i) При неинфицированном корне окрашивание At1g10010 ограничивается клетками флоэмы.

Гены, участвующие в образовании и поддержании синцития

По аналогии с процедурой, описанной Jammes et al. (2005), мы исследовали регуляцию «биологических процессов» и «молекулярных функций», а также их распределение по «клеточным компонентам» в соответствии с классификацией генной онтологии (GO; http://www.geneontology.org) путем сравнивая их репрезентативность в генах со значительной активизацией и подавлением активности. С этой целью для каждой из 4278 использованных категорий GO мы сравнили распространенность 3885 аннотированных GO генов со значительной активацией с преобладанием того же числа генов с пониженной регуляцией (точный тест Фишера с поправкой Бонферрони).Напротив, его распространенность в аннотированных 3331 GO генах со значительно подавленной регуляцией сравнивалась с его распространенностью в том же количестве усиленных генов (полные результаты в таблице S8a, b). Категории особого интереса показаны ниже и описаны ниже. В нашем сравнении генов со значительным повышением и понижением регуляции для домена «клеточный компонент» значительно больше генов было активировано для категорий «хромосома», «цитоплазма», «внутриклеточная органелла», «митохондрия», «пластида» и рибосома ».Точно так же мы обнаружили больше генов с усиленной регуляцией, чем генов с пониженной регуляцией, принадлежащих к категориям «биологические процессы», «процесс биосинтеза», «процесс клеточного биосинтеза», «процесс клеточного метаболизма», «процесс макромолекулярного биосинтеза», «фотосинтез» и «трансляция» ( ). С другой стороны, это сравнение выявило категории домена «биологического процесса», такие как «защитный ответ», «ответ на химический стимул» и «ответ на гормональный стимул», со значительной репрезентативностью подавляемых генов.В пределах домена «клеточного компонента» категория «вакуоль» включала значительно больше генов, которые были подавлены, а не активированы ().

Предпочтительная регуляция в категориях онтологии генов (GO), относящаяся к функции синцития

Предпочтительная регуляция дифференциально экспрессируемых генов для выбранных категорий GO двух доменов «биологический процесс» и «клеточный компонент». Процент генов, обнаруженных в исследуемой подгруппе, показан на оси x .Таким образом, первая (розовая) полоса в верхней части каждой панели отображает размер исследуемого набора генов (3331 и 3385 соответственно) относительно размера чипа. Это представляет собой соотношение, ожидаемое в среднем, если распределение исследованных генов по категориям GO совпадает с распределением всех генов, протестированных на чипе. Для каждой категории GO пара столбцов сравнивает количество репрессированных генов (желтый) и индуцированных генов (синий), а значение P для этого сравнения отображается справа. (а) Избыточное представительство генов с повышенной регуляцией по сравнению с генами с пониженной регуляцией для репрезентативного случайного выбора категорий.(b) Чрезмерное представительство генов с пониженной регуляцией по сравнению с генами с повышенной регуляцией в четырех различных подкатегориях, представляющих особый интерес.

Транскриптом синцитий отличается от транскриптома корней или других органов

Мы проанализировали тканеспецифическую экспрессию ста наиболее сильно индуцированных генов в Genevestigator (Zimmermann et al. , 2004) (Таблица S9), и отметили, что некоторые сильно индуцированные гены не зависят от корня, а вместо этого экспрессируются в семенах (например, Pdf2.1 ) или пыльца ( MIOX4 и MIOX5 ). Это также находит свое отражение в сравнении генов с повышенной и пониженной регуляцией в категориях «репродуктивный процесс» и «развитие семян» в домене «биологический процесс» (), где гены с повышенной регуляцией были значительно перепредставлены. Чтобы изучить данные с глобальной точки зрения, мы сравнили транскриптомы синцитий с транскриптомами различных органов Arabidopsis (цветок, лист, пыльца, корень и семена), полученными в рамках проекта AtGenExpress (Schmid et al., 2005) от PCA. Мы также включили данные транскриптома из проекта, в котором использовалась сортировка клеток с активацией флуоресценции для выделения определенных тканей корня (Birnbaum et al. , 2003). В то время как транскриптомы наших образцов корней сгруппированы вместе с транскриптомами целых корней разных стадий и разных тканей корня, синцитиальные транскриптомы были четко разделены (). Разделение на компонент 1 PCA четко отличает синцитии от ткани корня. С другой стороны, образцы не сгруппировались с тканями других органов.Таким образом, хотя он происходит из клеток корня и внутри корня, транскриптом синцития явно отличается от корней (и всех других органов), а также от других тканей корня.

Анализ главных компонентов

PCA был применен к 185 образцам из трех различных исследований. Каждая точка представляет собой состояние (то есть конкретный тип ткани), а цветовая кодировка конкретных органов растения. Контрольный образец для текущего исследования обозначен бирюзовым цветом, а две различные стадии заражения образцов синцития с разрешением 5 и 15 точек на дюйм показаны красным.

Предпочтительное регулирование в категориях онтологии генов (GO), относящихся к воспроизводству

категорий GO, показывающих избыточное представительство активированных генов по сравнению с подавленными генами в рамках домена «биологический процесс». Подробнее см.

Обсуждение

Проблема при анализе экспрессии генов на участках питания нематод состоит в том, что корень растения может поддерживать только ограниченное количество этих участков питания. Таким образом, при отборе проб корней все места питания будут содержать только небольшое количество корневого материала, и поэтому будет невозможно отличить экспрессию гена в синцитии от системной экспрессии в корне, вызванной инфекцией нематод.Поэтому для тщательного анализа необходимо изолировать чистый материал от мест кормления. Мы использовали микроаспирацию синцитий, индуцированную цистовой нематодой H. schachtii в корнях Arabidopsis, чтобы выделить такой чистый материал для анализа транскриптома с помощью Affymetrix GeneChips. Использование чипов Affymetrix Arabidopsis последнего поколения (ATh2) вместе с текущей аннотацией TAIR (http://www.arabidopsis.org) позволило четко оценить уровни экспрессии для 21 138 генов (Dai et al., 2005).

Проверка

Для проверки мы сравнили результаты GeneChip трех генов ( At3g63140, At5g64080 и At1g10010 ) с in situ, RT-PCR и qPCR (и). Следует отметить, что для кПЦР мы обычно используем синцитии, которые вырезаны из корней и, таким образом, также содержат окружающие ткани корня, по сравнению с чистым материалом синцития, который был получен с помощью микроаспирации для анализа GeneChip. Следовательно, уровни экспрессии, полученные этими методами, могут показывать количественные различия, но время, необходимое для получения материала с помощью микроаспирации, исключает их использование в качестве рутинного метода.В дополнение к трем генам, подтвержденным в этой статье, мы недавно опубликовали всесторонний анализ экспрессии гена экспансина в синцитиях, в котором мы также проверили этот набор данных GeneChip с in situ RT-PCR, промотор: gus линий, и полуколичественная ОТ-ПЦР (Wieczorek et al. , 2006). Кроме того, экспрессия эндо-1,4-β-глюканаз, наблюдаемая в этом наборе данных, была подтверждена с использованием in situ RT-PCR и qPCR (Wieczorek et al., 2008). Кроме того, подтверждена экспрессия генов, участвующих в транспорте сахара и метаболизме крахмала (Hofmann et al. , 2007, 2008). Во всех рассмотренных случаях результаты анализа GeneChip оказались надежными. Для справки мы также включили опубликованные значения количественной ПЦР для этих других генов в.

Деградация и синтез клеточной стенки в синцитиях

Начиная с одной исходной клетки, синцитий расширяется за счет включения окружающих клеток.Стенки между этими клетками частично разрушены. Известно, что нематоды продуцируют ряд ферментов, разрушающих клеточную стенку, в клетках их желез (Vanholme et al. , 2004, 2006), которые могут секретироваться через стилет, но в какой степени эти ферменты могут быть задействованы в клетке. деградация стенок синцития еще не известна. С другой стороны, известно, что гены растительного происхождения для ферментов, разрушающих клеточную стенку (Goellner et al. , 2001), а также гены экспансинов (Wieczorek et al., 2006), активируются в синцитиях. Анализ синцитиального транскриптома показал, что некоторые гены экспансина специфически активируются (Wieczorek et al. , 2006). Гены предполагаемых ферментов, разрушающих клеточную стенку, также были активированы, и некоторые из них были среди наиболее сильно индуцированных (Таблица S2), например, гены, кодирующие пектатлиазу и β-глюканазу (Wieczorek et al. , 2008). Таким образом, возможно, что разрушение клеточных стенок внутри синцития достигается исключительно за счет эндогенных растительных белков, и что специфические для нематод ферменты несут ответственность только за деградацию и разрыхление клеточной стенки во время прохождения нематод через корень растения к центральный цилиндр.

Образование синцитиев, с одной стороны, сопровождается деградацией клеточных стенок; с другой стороны, синтез клеточной стенки также необходим, например, для образования врастаний клеточной стенки (Jones and Northcote, 1972; Sobczak et al. , 1997), которые обычно обнаруживаются вблизи ксилемы, и для утолщения внешняя клеточная стенка синцития (Golinowski et al. , 1996). Врастание клеточной стенки также характерно для клеток-переносчиков, которые, как считается, облегчают транспорт растворенных веществ на границе между апопластом и симпластом (Offler et al., 2002). В этом отношении также примечательно, что гены, кодирующие мио-инозитолоксигеназу (MIOX) (Kanter et al. , 2005), сильно экспрессировались в синцитиях. Три из четырех генов Arabidopsis MIOX представлены на GeneChip. Из них MIOX2 были приблизительно в восемь раз активированы, а MIOX4 и MIOX5 были среди генов с наиболее сильной активацией в синцитиях (Таблица S2). Функция этих генов в целом не совсем ясна, но MIOX4 и MIOX5 в остальном сильно экспрессируются в пыльце (Таблица S9). Гены MIOX , вероятно, участвуют в производстве UDP-глюкуроновой кислоты, важного предшественника нескольких нуклеотидных сахаров, используемых в биосинтезе клеточной стенки, но исследования сверхэкспрессии также указывают на то, что они могут участвовать в синтезе аскорбата (Lorence и др., , 2004). UDP-глюкуроновая кислота также может быть продуцирована вторым путем, который использует UDP-глюкозодегидрогеназу, но соответствующие гены экспрессируются на том же уровне в синцитиях и в контрольных корнях.Таким образом, гены MIOX , по-видимому, играют важную роль для функции синцитий. В настоящее время эта проблема исследуется в нашей лаборатории.

Метаболическая активность

Для растения-хозяина синцитии являются приемниками питательных веществ. Другими особо важными поглотителями являются семена и пыльца. Поэтому интересно, что гены категорий GO «развитие семян» и «репродуктивный процесс» преимущественно активируются у синцитий (Таблица S8a). Семена и пыльца также характеризуются высокой метаболической активностью, причем в семенах и пыльце наблюдается избыточная экспрессия компонентов синтеза и метаболизма белка (Schmid et al., 2005). То же самое и с синцитиями, которые также отличаются высокой метаболической активностью. Исследование регуляции генов для категории «рибосома» домена GO «клеточный компонент» обнаружило сильное избыточное представительство генов с повышенной регуляцией (; Таблица S8a). Подчеркивая биологическое значение этого наблюдения, многие рибосомные гены принадлежат к наиболее сильно экспрессируемым генам (Таблица S5). Более того, гены категории GO «трансляция» были преимущественно активированы, что указывает на сильное усиление биосинтеза белка.Высокая метаболическая активность синцитий также отражалась в преимущественной активации генов в категориях «биосинтетический процесс», «клеточный биосинтетический процесс», «клеточный метаболический процесс» и «процесс биосинтеза макромолекул» (). Хотя это явные тенденции, многие другие категории GO и генные семейства имеют как повышающие, так и понижающие уровни. Семейство генов экспансинов является хорошим примером этого (Wieczorek et al. , 2006). Высокая метаболическая активность с аналогичным количеством генов с повышенной и пониженной регуляцией также наблюдалась для галлов, индуцированных узловатой нематодой M.incognita в корнях Arabidopsis (Jammes et al. , 2005).

Транспорт питательных веществ в синцитии

Синцитии являются единственным источником питательных веществ для цистовых нематод на протяжении всей их жизни и, следовательно, являются серьезным поглотителем питательных веществ для растений. До недавнего времени считалось, что синцитии симпластически изолированы и что сахароза поглощается транспортером сахарозы Suc2 (Juergensen et al. , 2003). Анализ данных транскриптома, представленных здесь, не дал никаких указаний на то, что ген Suc2 был индуцирован в синцитии. Suc2 экспрессировался на низких уровнях как в синцитиях, так и в контрольных корнях. Это согласуется с недавними данными, свидетельствующими о существовании плазмодесм между синцитиями и флоэмой (Hofmann and Grundler, 2006; Hofmann et al. , 2007; Hoth et al. , 2005). Аналогичным образом, многие другие переносчики сахара и ферменты, метаболизирующие сахар, не были сильно индуцированы в нашем эксперименте (J. Hofmann, P. Hess, D. Szakasits, A. Blöchl, A. van Bell, H. Bohlmann и F. Grundler, неопубликованные данные ).

В отличие от умеренной регуляции транспортеров сахара, мы обнаружили сильную активацию транспортера аминокислот (AAP6; Таблица S2). Второй переносчик аминокислот той же группы (ААР8) также был активирован в синцитиях и был одним из немногих генов, которые были значительно более сильно экспрессированы в синцитиях с разрешением 15 dpi, чем в синцитиях с разрешением 5 dpi (Таблица S6). Эти переносчики являются симпортерами протонов и, по-видимому, особенно необходимы для транспорта кислых аминокислот (Okumoto et al., 2002). Пока не известно, имеют ли синцитии особую потребность в кислых аминокислотах или эти переносчики могут выполнять другую функцию. Было обнаружено, что ген, кодирующий ААР6, лишь слегка активируется в желчных сегментах корней Arabidopsis, инфицированных M. incognita (Hammes et al. , 2005). Остается открытым вопрос, вызвано ли это эффектом разбавления гигантских клеток окружающим материалом или существуют фундаментальные различия между транспортом аминокислот в синцитии и гигантские клетки.Однако это еще раз подчеркивает важность использования чистого материала для анализа транскриптома участков питания нематод.

Подавление защитных реакций

Патогены в целом сталкиваются с проблемой совладания с защитными реакциями их хозяев. Бактерии, например, для этой цели продуцируют множество эффекторов (Debroy et al. , 2004; Jamir et al. , 2004). Недавно было показано, что они могут быть доставлены через своего рода молекулярную инъекционную иглу, систему секреции типа III, в клетки-хозяева (Galan and Wolf-Watz, 2006).По аналогии можно ожидать, что нематоды используют свой стилет для доставки эффекторов в синцитии. Ряд различных белков, которые могут действовать как таковые, был очищен от нематод in vitro (Vanholme et al. , 2004), но в большинстве случаев пока нет ключа к их возможным функциям. Микроиглы использовались для демонстрации того, что механический стимул, сравнимый с проколом клеточной стенки стилетом нематоды, вызывает защитные реакции в растительных клетках (Gus-Mayer et al., 1998). Однако анализ транскриптома синцитий, представленный в этой статье, показывает, что экспрессия защитного гена подавляется (), аналогично результатам, полученным для галлов, индуцированных узловатой нематодой M. incognita в корнях арабидопсиса (Jammes et al. , 2005). Остается открытым вопрос, участвуют ли гены пероксидазы, которые были среди наиболее сильно подавляемых генов (Таблица S3), в защитных реакциях.

Исключение составляет экспрессия группы генов дефенсинов растений (обзор см. В Thomma et al., 2002). Pdf2.2 и Pdf2.3 сильно экспрессировались как в контрольных сегментах корня, так и в синцитиях, а Pdf2.1 был среди наиболее сильно активируемых генов в синцитиях (Таблица S2). Неизвестно, поглощаются ли эти пептиды нематодами, хотя их небольшой размер указывает на то, что это могло быть так (Böckenhoff and Grundler, 1994). Это означало бы, что по крайней мере эти дефенсины не действуют на H. schachtii и, возможно, на другие цистовые нематоды.

Пластиды в синцитии

Растения Arabidopsis, инокулированные нематодами, обычно выращивают в чашках Петри в темноте / ночном цикле, чтобы облегчить наблюдение и манипулирование (например, микроаспирацию) инфицированных растений (Sijmons et al. , 1991; Wyss и Grundler, 1992). Давно известно, что синцитии, образующиеся в этих условиях, содержат хлоропласты (Golinowski et al. , 1996; Sijmons et al. , 1991). В соответствии с этими наблюдениями мы обнаружили, что гены, кодирующие белки хлоропластов, были одними из наиболее сильно активируемых генов (Таблица S2), и что гены в категории GO «пластиды» были преимущественно активированы ().Кроме того, гены, отнесенные к категории GO «фотосинтез», также были преимущественно активированы (). Таким образом, по крайней мере, в этих условиях роста синцитии содержат пластиды, которые, по-видимому, осуществляют активный фотосинтез. Конечно, в естественных условиях это было бы невозможно. Поэтому мы изучили синцитии из корней, хранящихся в темноте после заражения. Эти синцитии имеют сопоставимое количество пластид, которые демонстрируют такую ​​же флуоресценцию при конфокальной микроскопии, как и у растений, содержащихся в цикле свет / темнота (D.Szakasits, M. Sobczak и H. Bohlmann, неопубликованные данные). Пластиды внутри синцитии, как известно, отличаются от пластидов, обнаруживаемых в клетках, окружающих синцитий (Golinowski et al. , 1996). Таким образом, наши результаты подтверждают, что на дифференцировку пластид влияет синцитий.

Синцитиальный транскриптом

Мы отметили, что среди наиболее сильно активируемых генов у синцитий было несколько, которые иначе специфически экспрессируются в пыльце или семенах (Таблица S9).Это побудило нас выполнить PCA (), чтобы сравнить данные транскриптома синцитий с данными для различных органов и тканей Arabidopsis. Подобный подход был описан для органов арабидопсиса (Schmid et al. , 2005) и для тканей корня арабидопсиса, полученных путем сортировки клеток (Birnbaum et al. , 2003). В нашем анализе корневые ткани и корневые органы также сгруппированы вместе. Кроме того, используемые в нашей работе корневые управляющие сегменты попали в один кластер. Однако синцитии явно располагались вне корневого кластера, что также согласуется с глобальными различиями между синцитием и контрольными корневыми участками (18.4% всех проанализированных генов были активированы в синцитиях, а 15,8% были подавлены для q <5%). Более того, синцитии не сгруппировались ни с какими другими типами тканей, включая образцы цветов, листьев, пыльцы и семян. Таким образом, этот анализ показал, что синцитии, хотя и образуются внутри корня, имеют характерный уникальный транскрипционный профиль, отличный от профиля любого другого органа, а также от любой другой ткани корня.

В предыдущем исследовании (Puthoff et al., 2003), сравнение всех корней, инфицированных H. schachtii с разрешением 3 dpi, с контрольными корнями, выявило 116 дифференциально экспрессируемых генов (71 с повышенной и 45 с отрицательной регуляцией) с использованием первого поколения Arabidopsis GeneChip, что покрыло примерно одну треть всех генов. гены. Есть несколько возможных объяснений того, почему это исследование выявило гораздо меньшее количество генов, чем наш анализ. Во-первых, текущий GeneChip исследует более чем в два раза больше генов. Во-вторых, мы изолировали чистый материал синцития и специально проанализировали изменения внутри синцития.В-третьих, различия во временных точках отбора проб также могут повлиять на результаты: материал синцития для этого исследования был получен как с разрешением 5, так и 15 точек на дюйм. Однако различия в экспрессии между временными точками 3 и 5 точек на дюйм кажутся лишь незначительными (первоначальные сравнения с ограниченным количеством образцов в этой лаборатории выявили только четыре гена, показывающих значительно разные уровни экспрессии; D. Szakasits, D. Kreil и H. Больманн, неопубликованные данные).

Если мы сравним анализы целых инфицированных корней с анализами аспирированных синцитиев, выполненные для этого исследования, мы обнаружим, что 56 генов (34 с повышением и 22 с пониженной регуляцией), идентифицированные Puthoff et al. (2003) также по-разному регулируются в синцитиях, что составляет почти 50%. Гены, идентифицированные только Puthoff et al. (2003), вероятно, являются генами, которые системно индуцируются или подавляются инфекцией нематод. Тот факт, что гены, кодирующие рибосомные белки, не были обнаружены в публикации Puthoff et al. Исследование (2003) предоставляет доказательства, подтверждающие эту интерпретацию. Однако в нашем анализе и других исследованиях транскриптомов было показано, что такие гены сильно экспрессируются в местах питания нематод (Ithal et al., 2007b; Jammes et al. , 2005), что свидетельствует о высокой метаболической активности в этих местах питания.

Другие лаборатории также сообщили о различиях при сравнении удаленных участков инфекции с материалом синцития для анализа транскриптома (Ithal et al. , 2007b; Klink et al. , 2007b). Второе исследование, например, обнаружило только два общих гена между 77 генами, индуцированными в синцитии, и 502 генами, индуцированными в образцах инфицированных корней при 3 dpi.Эти данные также предполагают, что большинство индуцированных генов в образцах инфицированных цельных корней (Puthoff et al. , 2003), вероятно, представляют собой системно индуцированные гены.

Недавно микродиссекция с лазерным захватом была применена для изучения синцитий, индуцированных H. глицинами в корнях сои, с использованием Affymetrix GeneChips, содержащего 37 744 наборов зондов (Ithal et al. , 2007b; Klink et al. , 2007b ). В первом исследовании 1116 генов были индуцированы при 2 dpi, а 649 генов были подавлены.Во втором исследовании 77 генов были индуцированы и 210 подавлены при 3 dpi в совместимом взаимодействии, тогда как 206 были индуцированы и 63 подавлены при 8 dpi. В обоих исследованиях использовался порог кратности изменения 1,5 и порог вероятности ложного обнаружения 0,5 и 5% соответственно. В настоящее время неясно, почему в первом исследовании было идентифицировано больше индуцированных и репрессированных генов. В то время как некоторые небольшие различия, вероятно, можно объяснить разницей между временными точками 2 и 3 dpi, тот факт, что первое исследование выявило так много других генов, является неожиданным, особенно потому, что в нем использовалось более строгое статистическое отсечение.Кроме того, второе исследование выявило в три раза больше подавленных, чем индуцированных генов при 3 dpi, тогда как соотношение было совершенно другим и обратным при 8 dpi. В настоящее время у нас нет объяснения этому.

Ithal et al. идентифицировал 1116 генов с повышенной и 649 пониженной регуляции в синцитиях при 2 dpi. Как и ожидалось, это исследование также выявило высокую метаболическую активность синцитий, о чем свидетельствует активация 35 генов, кодирующих рибосомные белки. Эти авторы также обнаружили как повышающие, так и понижающие гены внутри семейств генов, что соответствует нашим наблюдениям в настоящем исследовании.Из 1765 дифференциально регулируемых генов 833 гена с повышенной и 449 с пониженной регуляцией имели гомологи у Arabidopsis (коллапс сопоставления "многие к одному"). Ожидая незначительных различий в экспрессии генов между образцами синцитий с разрешением 3 и 5 точек на дюйм, индуцированными H. schachtii в корнях Arabidopsis (D. Szakasits, D. Kreil и H. Bohlmann, неопубликованные данные), мы сравнили списки генов для активированных или подавленные гены из Ithal et al. (2007b) с нашими данными. Мы обнаружили, что из 833 гомологов Arabidopsis с усиленной регуляцией генов сои, 312 также имели повышенную регуляцию синцитий, индуцированных H.schachtii в корнях Arabidopsis. Из 449 гомологов Arabidopsis с пониженной регуляцией генов сои 146 также были понижены в синцитиях, индуцированных H. schachtii в корнях Arabidopsis.

С биологической точки зрения синцитии, индуцированные родственными нематодами у разных хозяев, должны быть очень похожими в отношении их основного метаболизма. Это отражено в сравнении здесь. Список гомологичных генов, которые были активированы в обеих системах, включает, например, почти все гены, кодирующие рибосомные белки (все, кроме двух).В сое было активировано восемь генов, гомологичных шести генам экспансина Arabidopsis. Из них четыре гена также были активированы в синцитиях Arabidopsis (согласие 66–75%). Подробное сравнение различий между наборами данных на уровне генов также может выявить тонкие эффекты выбора точки отбора проб и различий в статистическом анализе и потребует всестороннего анализа гомологов арабидопсиса и сои. Конечно, паралоги могли различаться как в функции, так и в регуляции транскрипции.Учитывая множество неуникальных отображений, надежная идентификация ортологов, таким образом, будет частью проблемы. (Например, в настоящих базах данных семь генов сои сопоставляются с одной и той же предполагаемой пероксидазой At5g05340. )

Экспериментальные процедуры

Выращивание растений

Семена арабидопсиса (сорт Колумбия) подвергали поверхностной стерилизации в течение 10 минут в 5% растворе. (мас. / об.) гипохлорит кальция, погруженный на 5 мин в 70% (об. / об.) этанол, а затем трижды промытый стерильной водой (Sijmons et al., 1991). Затем стерилизованные семена помещали в стерильные чашки Петри (Ø 9 см) на модифицированной 0,2 концентрированной среде Кнопа с добавлением 2% сахарозы (Sijmons et al. , 1991). Семена выдерживали при 4 ° C в течение 3 дней перед инкубацией в камере для выращивания при 25 ° C с циклом 16 часов света и 8 часов темноты.

Нематодная инфекция

Heterodera schachtii размножали in vitro на корнях горчицы ( Sinapsis alba cv. Albatros), растущих на 0.2 концентрированная среда Кнопа с добавлением 2% сахарозы (Sijmons et al. , 1991). Вылупление личинок L2 стимулировали замачиванием цист в стерильном 3 мМ ZnCl 2 . Молодь четыре раза промывали стерильной водой и ресуспендировали в 0,5% (мас. / Об.) Гельрите для инокуляции. Двенадцатидневные корни растений A. thaliana инокулировали примерно 30 молодыми особями в аксенических условиях.

Выделение РНК

РНК выделяли из аспирированных синцитиев и сегментов корня с использованием набора RNeasy Mini Kit (Qiagen, http: // www.qiagen.com). Качество всех образцов РНК контролировали с помощью биоанализатора Agilent 2100 (Agilent Technologies, http://www.home.agilent.com).

qPCR

РНК

транскрибировали в кДНК с использованием случайных праймеров [oligo (dN) 6 ] и обратной транскриптазы SuperScript III (Invitrogen, http://www.invitrogen.com), следуя инструкциям производителя. Ген-специфические праймеры были отобраны с использованием Primer Express v2.0 (Applied BioSystems, http://www.appliedbiosystems.com) и проверены на специфичность гена в геноме Arabidopsis с помощью поисковой системы Blast в базе данных генов Arabidopsis.Последовательности праймеров можно найти в Приложении S1. 18S, РНК и UBP22 использовали в качестве внутренних ссылок, как описано ранее (Hofmann and Grundler, 2007).

Количественную ПЦР в реальном времени проводили в детекторе последовательностей ABI PRISM 7300 (Applied BioSystems) с использованием SYBR Green для мониторинга синтеза двухцепочечной ДНК. Конечный объем реакции ПЦР составлял 25 мкл, содержащий 12,5 мкл 2 × Platinum SYBR Green qPCR SuperMix (Invitrogen) с UDG и ROX в качестве эталонных красителей, праймеров и MgCl 2 , в зависимости от пар праймеров, воды и 2 мкл матрицы кДНК. .Эффективность праймеров и условия ПЦР можно найти в Приложении S1. кДНК разводили 1: 100 для 18S РНК и 1: 2 для всех других праймеров. В качестве контроля вместо кДНК добавляли воду, что привело к отсутствию детектируемого флуоресцентного сигнала. ПЦР проводили при 50 ° C в течение 2 минут и 95 ° C в течение 5 минут с последующими 43 циклами при 95 ° C в течение 15 секунд, при 60 ° C в течение 30 секунд и при 72 ° C в течение 60 секунд. Анализ данных выполняли с использованием программного обеспечения для обнаружения последовательностей (sds) v2.0 (Applied BioSystems). Изменения уровней транскрипта были связаны с экспрессией РНК 18S и UBP22 с использованием формулы (1+ E ) -ΔΔ C t (Livak and Schmittgen, 2001).

In situ RT-PCR

In situ RT-PCR выполняли точно так же, как описано ранее (Wieczorek et al. , 2006), с использованием тех же праймеров, что и для анализа RT-PCR в реальном времени ( см. Приложение S1).

Анализ Affymetrix GeneChip

Растения Arabidopsis выращивали в среде Кнопа на тонких стеклянных пластинах, которые содержали в чашках Петри в условиях, описанных выше. Их инокулировали личинками H. schachtii через 12 дней.Стеклянные пластины, поддерживающие корни, затем можно было удалить из чашек Петри для микроскопии (). Цитоплазма синцитий была получена путем микроаспирации с использованием обратного микроскопа, оснащенного микроинъектором (). Количество микроаспирируемых синцитий составляло 346 для синцитиев с разрешением 5 точек на дюйм и 191 для синцитий с разрешением 15 точек на дюйм. Эти синцитии были собраны из семи и пяти независимых посевов соответственно, но были объединены, чтобы получить достаточно материала для амплификации РНК. Контрольные сегменты корней вырезали из зоны удлинения незараженных корней, которые выращивали в тех же условиях, что описаны выше.Особое внимание уделялось предотвращению появления верхушек корней или зачатков боковых корней. Так же, как и в случае инфицированного материала, неинфицированные корневые сегменты были собраны в виде пула примерно из 1000 растений, которые были выращены в четырех независимых партиях.

Экспериментальная установка для микроаспирации инфицированных корней Arabidopsis

(a) Металлическое кольцо, закрепленное под обратным микроскопом (Zeiss, http://www.zeiss.com), удерживает тонкую стеклянную пластину, покрытую средой, покрывающей корни . (b) Микроманипулятор направляет микрокапилляр к корням (Eppendorf, http: // www.eppendorf.com) для прокалывания одиночного синцития.

РНК

выделяли, как описано выше. Поскольку наиболее вариабельной частью всей процедуры является амплификация РНК с использованием РНК-полимеразы Т7, мы провели не менее трех независимых экспериментов по амплификации для каждого пула РНК и использовали каждую амплифицированную копию РНК для мечения и гибридизации одного GeneChip. Мы гибридизировали четыре чипа для образцов с разрешением 5 точек на дюйм, три чипа для образцов с разрешением 15 точек на дюйм и четыре чипа для контрольных образцов, с индивидуальными микрочипами, представляющими независимые технические реплики.Зонды, меченные биотином, были приготовлены в соответствии с протоколом Affymetrix с некоторыми модификациями. Для получения дополнительной информации см. Приложение S1.

Статистический анализ данных микрочипов

Файлы Affymetrix CEL были считаны в среду статистического анализа R (http://www.r-project.org) с использованием пакета affy пакета Bioconductor (http: //www.bioconductor. org). Поскольку на 10–40% наборов зондов влияет обновленная аннотация генов, чипы были обработаны с использованием текущей аннотации набора зондов TAIR v8 (Dai et al., 2005). «Коррекция фона», специфичная для последовательности зонда (Wu et al. , 2004), выполнялась с использованием процедур, доступных в пакете Bioconductor gcrma . При использовании модели «аффинности», хотя для определения параметров аффинности использовались зонды «MM», для коррекции фона, специфичного для зонда, использовались только зонды «PM». Изучение графиков поискового парного разброса и «MA» подтвердило необходимость нормализации между чипами. Таким образом, требуемые явные шаги нормализации сделали ненужным вычитание эвристической оценки для фона оптических приборов, как это предлагается в gcrma.Для всех остальных параметров gcrma использовались значения по умолчанию. Поскольку исследование парных графиков квантилей-квантилей показало только случайные колебания, нормализация между чипами может быть достигнута с помощью нормализации квантиль-квантиль (Bolstad et al. , 2003). См. Раздел «Анализ низкоуровневых микрочипов и диагностические графики» (Приложение S3) для получения диагностических графиков и рисунков.

После нормализации для каждого гена были получены надежные сводки сигналов набора зондов с использованием итеративной взвешенной аппроксимации методом наименьших квадратов линейной модели уровня зонда (Bolstad, 2004) с помощью функции fitPLM пакета Bioconductor affyPLM .Этот процесс автоматически определяет ненадежные участки чипа и, соответственно, снижает вес зондов с выбросами. См. Приложение S2 и S3.

Нормализованные данные по шкале log2 были затем подогнаны ген за геном с линейной моделью, включая эффекты партии гибридизации, с использованием функции lmFit (Smyth, 2004) пакета Bioconductor limma . Таблицы результатов также включают значения q как индикаторы значимости контрастов после поправки на множественное тестирование, контролирующее частоту ложных открытий (Benjamini and Hochberg, 1995).Для статистических тестов дисперсия отдельных генов была модерирована с использованием эмпирического байесовского подхода, который черпает силу из переноса характеристик дисперсии из набора всех генов в тест для каждого отдельного гена (Smyth, 2004).

Полная аннотация GO была загружена с ТАИР 6 января 2007 г. (http://www.arabidopsis.org). Аннотации (включая «неизвестные» назначения) были доступны почти для всех генов на чипе (99,6%, 21 053). Чтобы разрешить анализ произвольных категорий GO, GO-ID обрабатывались с целью разрешения устаревших ID (http: // www.geneontology.org; rev. 1.287, 6 января 2007 г.), вторичные идентификаторы / псевдонимы (ред. 1.48, 5 января 2007 г.) и аннотации были пересмотрены для согласованности за счет полностью рекурсивного распространения членства в категории на родительские узлы. Затем для каждой категории мы проверили относительное обогащение генов в наборе тестов путем сравнения с распределением генов на чипе с помощью точного критерия Фишера и поправки Бонферрони для множественного тестирования N = 4279 исследованных категорий. Это соответствует и эквивалентно обычно используемым тестам с использованием гипергеометрического распределения.Результаты представлены в разделе «Анализ» Приложения S1.

Чтобы дополнительно охарактеризовать природу регуляторных изменений, в этой статье мы проверили, были ли значительно регулируемые гены преимущественно активными или отрицательными. При оценке избыточного представительства генов с повышенной экспрессией по сравнению с генами с пониженной регуляцией мы сравнили распределение по категориям GO 3885 аннотированных генов, которые были значительно усилены для q <5%, с таким же количеством наиболее значительно подавленные гены.Точно так же, исследуя чрезмерную представленность генов с пониженной регуляцией по сравнению с генами с повышенной регуляцией, мы сравнили распределение по категориям GO 3331 аннотированных генов, которые были значительно понижены для q <5%, с распределением такого же количества наиболее значимо усиленных генов. . Значения P для оценки значимости наблюдаемых отличий от биномиального распределения были скорректированы Бонферрони для тестирования всех категорий GO ( N = 4279) и также представлены в разделе «Анализ» Приложения S1.Результаты для выбранных категорий представлены в.

Дополнительные онлайн-материалы, содержащие большие, исчерпывающие таблицы и графики, а также подробный технический анализ, заархивированы по адресу http://bioinf.boku.ac.at/pub/Szakasits2008/.

Анализ главных компонентов

Всего 185 файлов Affymetrix.CEL из трех различных исследований (Birnbaum et al. , 2003; Schmid et al. , 2005, эта работа) были непосредственно загружены из операционной системы Affymetrix GeneChip. (GCOS) в GeneSpring v7.2 (Silicon Genetics; Agilent Technologies, http://www.home.agilent.com) с применением суммирования зонда GeneSpring GCRMA (надежное многокристальное усреднение с алгоритмом коррекции фона GC-содержимого). После предварительной обработки файлов были выполнены следующие стандартные шаги по нормализации GeneSpring для одноцветных данных: (i) преобразование данных (измерения от менее 0,01 до 0,01), (ii) на чип (нормализовано до 50-го процентиля) и (iii) ) на ген (нормализовано к медиане).

Чтобы сравнить паттерны экспрессии различных типов тканей, мы выполнили анализ логарифмических соотношений основных компонентов для всех различных образцов тканей.Затем данные были визуализированы путем построения выборок в пространстве главных компонентов с использованием первых двух компонентов, что объяснило ~ 41% общей дисперсии экспрессии. Затем была исследована взаимосвязь между образцами путем визуального изучения кластеров в этом сокращенном двумерном пространстве.

Дорогой курс для любого бюджета

Ящик почета. Я видел это несколько раз в своих путешествиях. Это концепция, которая всегда дает мне надежду на человечество, и в скрытых жемчужинах, таких как поле для гольфа Кавендиша, поле с девятью лунками на гавайском острове Ланаи, оно ошеломляюще высоко.

Опять это слово. Значение. Это золото в гольф-индустрии. Каждый курс хочет считаться отличной ценой . Каждый заядлый игрок в гольф хочет чувствовать, что он получил большую ценность. И все же это относительный термин. Скользящая шкала основана не только на индивидуальных бюджетах и ​​представленном продукте, но и на конкуренции, которая может быть местной и / или национальной. Я всегда говорю, что мне сложно объяснить ценность поля для гольфа и общего опыта, но я знаю это, когда вижу и играю.

Например, на противоположном конце диапазона Кавендиша находится Bethpage Black, который принимал несколько турниров US Open и PGA Tour и будет местом проведения Кубка Райдера в 2024 году. Тем не менее, по выходным 150 долларов для людей, которые не живут в Нью-Йорке это все еще большая ценность. Но 150 долларов и Bethpage Black - это то место, где я проведу эту линию ценности, и это будет верхняя ступенька на моей лестнице ценностного гольфа в Америке.

Что касается всего промежуточного, то есть дизайн Пита Дая и несколько дизайнов Дональда Росса по цене менее 50 долларов.Есть дизайн доктора Алистера Маккензи за 30 долларов и модель A.W. Тиллингаст оригинал за 60 долларов. Еще есть The Classic at Madden's в Брейнерде, штат Миннесота, который был разработан суперинтендантом Скоттом Хоффманом. Его портфолио курсов начинается и заканчивается на The Classic. Неплохой способ войти и уйти из дизайнерского бизнеса, и для всех, кто платит за это, это огромная ценность.

По большей части я использовал цены в пик сезона на выходных, но в некоторых случаях я позволял себе вольность с частотой повторов, специальными предложениями на 36 лунок и опциями в межсезонье в таком месте, как Bandon Dunes, где вы можете играть в зимние месяцы. за 100 долларов.Из почти 60 полей, представленных в этом списке, я сыграл на всех, кроме трех, что отмечено в обзорах. И в одном случае я попросил курс и обзор у моих последователей в социальных сетях. (См. Mullen Golf Club.)

Если ценность - это «суждение о том, что важно в жизни», этот список, безусловно, является моим суждением о том, что важно в моей жизни в гольф, и я надеюсь, что он поможет вам.

Лестница ценного гольфа Мэтта Джинеллы в США

Шаттл до Ланаи с Мауи обойдется вам в 60 долларов, но быстрая девятка в Кавендише стоит всего 10 долларов в коробке почета.


Милтон Херши был и остается одним из величайших филантропов в американской истории, и то, что он оставил после себя в Спринг-Крик, - это веселая и доступная игровая площадка для поколений.


Моя запись «Выбор читателей» принадлежит Марку Бреннеру, подписчику в Instagram: «Это отличный макет с девятью отверстиями. Играйте по 15 долларов за девять лунок или по 20 долларов за весь день. Вы кладете деньги в ящик чести ».


В Loma Club у владельца есть выигрышное меню как на этом коротком поле в Сан-Диего, так и за его пределами, которое находится всего в нескольких минутах от аэропорта.


Ей более 100 лет, и она теряла деньги, затем пришли Кейт Ребб, Райли Джонс и вложили 1,2 миллиона долларов в курс, который пролегает через один из самых больших маленьких городов Флориды. Вы шесть раз пересечете улицу на одном из самых популярных и приятных маршрутов в стране.

Реконструкция поля для гольфа Winter Park стала настоящей жемчужиной для семейного отдыха недалеко от Орландо. Мэтт Джинелла / советник по гольфу

На северном берегу Оаху, сразу за полем Палмера в Тертл-Бэй, Кахуку - это настоящий гольф на Гавайях.


Одно из немногих, в которое я не играл в этом списке, но Sweetens Cove настолько хорош, что поместил поле с девятью лунками и команду дизайнеров King-Collins в национальные рейтинги и на карту истинного гольфа.


Гольф-клуб Aiken, история которого восходит к 1912 году и восходит к человеку, который работал с Дональдом Россом, прожил несколько жизней, но одно можно сказать наверняка: заплатить 25 долларов за прогулку по этому полю - кража.


Многие люди жалуются на плату в размере 500 долларов за игру в Pebble Beach, но прямо через дорогу никто не жалуется на 30 долларов за игру Питера Хэя.Дети до 12 лет играют бесплатно.


Это был дом десегрегации в начале 1950-х годов, он находится на территории Национального фонда охраны памятников старины, и именно здесь Бен Креншоу вырос, играя в гольф. И если Техасский университет попытается превратить его в эту зеленую зону Остина, это станет кошмаром для связей с общественностью.


Доктор Алистер Маккензи спроектировал Augusta National, Cypress Point Club, Royal Melbourne и Northwood Golf Club. Деревья стали больше, фервеи стали теснее, но это все еще доступно и весело.


Коротко, быстро, весело и доступно. Другими словами, все, что есть хорошего в маленьком гольфе в Америке. А теперь добавили детское поле с тремя лунками. Джон Эшворт и город Оушенсайд привлекают заслуженное внимание за то, что спасли парк Гоут-Хилл и заставили улыбнуться игроков в гольф, которые выбирают этот необычный и уникальный маршрут.


Студенты могут поиграть прямо по улице от Огаста Нэшнл, в доме Университета Огаста и бывшего дизайнера Дональда Росс за 18 долларов.


Один из лучших дизайнов Дональда Росс менее чем за 50 долларов. И их больше, чем вы думаете.


Дизайн Pete Dye менее чем за 50 долларов. Их не так много.


Этот дизайн Джона Харботтла получил национальное признание за свою ценность и качество, особенно если вы заплатите 80 долларов и включите однодневный тур на трассе Cascade Gold Mountain.


Наслаждайтесь ценой, местными жителями, беглым взглядом на «Hotel Del» и завершающим отрезком вдоль залива Сан-Диего.


Этот городок Хартфорда с богатой историей, недавним ремонтом и некоторыми местными достопримечательностями находится в невысокой траве.


Новый дом мужской и женской команд по гольфу Университета штата Аризона подвергается масштабному ремонту никем иным, как Филом Микельсоном, который будет включать в себя «ультрасовременную тренировочную базу», ресторан и клуб. Но останутся ли зеленые сборы прежними? Придется подождать и посмотреть.


Это настолько хорошо, что мне пришлось поделиться этим со зрителями Morning Drive.


Всего в 30 минутах от центра Бостона, этот легендарный городок и дизайн Дональда Росса поразит ваш (Red) Sox.


Один из самых популярных военных курсов на Гавайях - это дизайн Уильяма П. Белла. Белл работал с Джорджем Томасом в строительстве загородного клуба Bel-Air, загородного клуба Riviera и загородного клуба Лос-Анджелеса. Активные военнослужащие могут играть в гольф без ограничений во второй половине дня за 29 долларов.


В тени полей Торри-Пайнс, в парке Бальбоа, еще один Уильям П.Дизайн колокола может быть более популярным среди экономных местных жителей Сан-Диего.


Заплатите один раз, но сейчас вы можете играть в этот дизайн Гила Хансе весь день.

The Cradle


Это должен быть самый дешевый курс в портфолио прославленных дизайнеров Билла Кура и Бена Креншоу.


Сказать, что это лучшее соотношение цены и качества на Гранд Стрэнд в Миртл-Бич, - это все, что вам нужно знать.


Если вы планируете поездку с друзьями в Кроссвилл, который они называют столицей гольфа Теннесси, организуйте тур в Bear Trace.


Поле West, связанное с такими именами, как Никлаус, Палмер, Тревино, Глисон, Хоуп и Кросби, представляет собой путешествие по истории гольфа в Майами.


Любой гольфист, совершающий поездку на Кауаи и не сыгравший хотя бы один раунд в Вайлуа, упускает часть культуры, неприхотливых страстных игроков в гольф и один из лучших вариантов в стране.


Дом Ассоциации гольфа Колорадо и Академии Кэдди и лидерства братьев Соличей, дизайн Tom Doak - еще один пример всего, что возможно в доступном гольф-клубе с полным спектром услуг, который находится по соседству с большим городом.


«Олд Брэк» - это компания A.W. Интересный, доступный и удобный для прогулок дизайн Тиллингхаста является домом для Зала славы гольфа Техаса, который стоит вашего времени.


Ценностная лестница Джинеллы: Часть II

65 $ - Озеро, курсы Links в Гранд-Нэшнл на гольф-тропе Роберта Трента Джонса, Опелика, Алабама.

Мой любимый из 11 центров профессионального гольфа на трассе RTJ Trail, он особенно привлекателен в начале сезона студенческого футбола.Оба 18-го лучше, чем хорошо, и Короткий курс тоже.


Мне нужно сыграть в рассказ о путешествии в Санта-Фе, и мне не терпится вернуться. Это удаленное место без окружающих домов, с интересными маршрутами и захватывающими пейзажами.


Дизайн Гила Ханса, созданный при участии Джеффа Шакелфорда, «Рустик Каньон» широко считается лучшим местом в Лос-Анджелесе.


Недорогой гольф в большом штате Мичиган получает много заслуживающей внимания шумихи, но недостаточно внимания уделяется Pilgrim’s Run.


Вы не можете заниматься гольфом в Америке без учета Пасифик Гроув. Пасифик Гроув находится на одном участке побережья Калифорнии с такими пляжами, как Пеббл-Бич и Сайпресс-Пойнт. Здесь вы найдете умных и бережливых местных жителей.


Когда кто-нибудь просит меня сыграть в розыгрыше в районе Джексонвилля, я отправляю его в Сент-Джонс. У меня никогда не было жалоб.


Центральный Орегон - недооцененный центр отличного гольфа и мероприятий на свежем воздухе, но если вы пропустите раунд в Аспен Лейкс, вы совершите большую ошибку.


Почти через дорогу от Bandon Dunes, здесь вы найдете кедди Bandon и истинных ценителей гольфа.


Раньше дизайн Робина Нельсона с девятью лунками, в 2003 году они расширили эту старую плантацию сахарного тростника до 18 лунок. Она предлагает широкий выбор снимков и видов, пока вы путешествуете по классическим гавайским пейзажам.


Лучшее соотношение цены и качества в сети TPC. Вы захотите наслаждаться каждым шагом, пытаясь замедлить ходьбу в Deere Run.


Еще один из немногих в этом списке, в который я не играл, но он попал в него из-за положительных отзывов, его репутации и моего страха перед лояльными местными жителями, которые будут преследовать меня в социальных сетях.


Если вы когда-нибудь окажетесь где-нибудь рядом с восточной оконечностью Лонг-Айленда, остановитесь и достаньте клюшки из багажника, чтобы сыграть оригинал Роберта Трента Джонса, за который жители Нью-Йорка платят меньше 50 долларов.


Вечно в тени Черного поля местные жители скажут вам, что предпочитают красный не только из-за удобства игры, но и из-за доступности.


Комплекс на 36 лунок в отдаленном уголке Миннесоты, но он стоит драйва и чувства открытия для этих двух совершенно разных, но одинаково очаровательных мест.


Многие люди твердят о цене, чтобы играть в отличный гольф в Америке, но не понимают, что в зимние месяцы вдоль юго-западного побережья Орегона вы можете поймать дни без дождя, температуры ниже 60-х и гольф для 100 долларов. А если вы выйдете первым и быстро, у вас может быть время на 36, что обойдется вам всего в 150 долларов, чтобы сыграть на двух лучших курсах в стране.

Тихоокеанские дюны зимой могут быть очень выгодными. Мэтт Джинелла / советник по гольфу

Pacific Dunes


Я не знал фразу «полноценный гольф», пока не наткнулся на Classic в Madden’s Resort. С тех пор как это первое впечатление сформировало мою оценку ценности каждого курса в этом списке и вне его.


В эти два дизайна Tom Fazio можно играть за один день и в выходные в пик сезона за 178 долларов, что на 32 доллара меньше суммы, которую гость курорта платит за один раунд в Streamsong Resort.


Майк ДеВрис привлекает к себе всеобщее внимание за работу, которую он проделал в Kingsley Club в Мичигане и Cape Wickham Links в Тасмании, но вы не можете упомянуть его имя, пока кто-то не спросит: «Вы играли в Greywalls?» Ваш ответ должен быть "Да!"


Это два курса, на которых Байонет получает большую часть чернил и признания, но реальная ценность состоит в том, чтобы заплатить 205 долларов и сыграть и Байонет, и Черную лошадь за один день.


Организатор нескольких Открытых чемпионатов США, туров и Кубка Райдера в 2024 году.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *